Методы выделения, очистки и определения белков

С развитием методов выделения, очистки и анализа белков в течение первых трех десятилетий этого века выяснилось два существенных факта. Оказалось, что каждый белок состоит из полипептидной цепи определенной длины, причем у разных белков длина цепи меняется от нескольких десятков до нескольких сотен аминокислотных остатков. Выяснилось также, что в каждом белке содержатся характерные для него относительные количества двадцати стандартных аминокислот. Когда эти факты были установлены, то было сделано следующее предположение индивидуальная особенность каждого типа белка зависит от того, сколько аминокислот и какие именно аминокислоты составляют его полипептидную цепь. [c.41]

В литературе имеются сведения о ряде методов, пригодных для определения углеводов [108], пентоз [109], липидов [110] и других веществ [43] в белках. Если известно, что белок содержит легко обнаруживаемую составную часть, то определение последней часто может служить хорошим средством контроля степени очистки. Например, содержащие медь белки — гемокупреин и гепатокупреин — были выделены путем фракционирования, ход которого контролировался с помощью определения содержания меди [111]. При выделении многих других белков, например белков, в состав которых входят производные тема, а именно фла-вина, тиамина или тироксина, были использованы подобные гке принципы, [c.22]

На заключительном этапе выделения и очистки белков исследователя всегда интересует вопрос о гомогенности полученного белка. Нельзя оценивать гомогенность индивидуального белка только по одному какому-либо физико-химическому показателю. Для этого пользуются разными критериями. Из огромного числа хроматографических, электрофоретических, химических, радио- и иммунохимических, биологических и гравитационных методов наиболее достоверные результаты при определении гомогенности белка дают ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы или хлорида цезия, диск-электрофорез в полиакриламидном геле, изоэлектрическое фоьсусирование, иммунохимические методы и определение растворимости белка. Действительно, если при гель-электрофорезе белок движется в ввде одной узкой полосы и в этой зоне сосредоточена его биологическая активность (ферментативная, гормональная, токсическая [c.32]

В настоящее время для выделения сайт-специфических ДНК-связывающих белков разработаны гораздо более совершенные методы. Процедура обычно начинается с определения сдвига подвижности в геле. Благодаря этому можно выяснить, с каким именно участком на фрагменте ДНК связывается неизвестный белок в клеточном экстракте (см. рис. 9-9). Затем химическим способом синтезируется соответствующий этому связывающему участку двух цепочечный олигонуклеотид, который можно использовать двумя способами. При аффинной хроматографии олигонуклеотид связывают с нерастворимым пористым носителем, например агфозой, а затем таким нагруженным носителем заполняют колонку, которая селективно связывает белки, узнающие определенные последовательности ДНК. Этот относительно нетрудоемкий метод позволяет добиться 10000-кратной очистки. [c.103]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология