Выделение белков

ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ [c.76]

Фильтрация. Для фильтрации применяют фильтр-прессы закрытого типа, рамы и плиты которых изготовлены из нержавеющей стали. После выделения белка сок должен содержать каротина не более 1,0 мг%. Сок поступает в сборник 21, откуда он далее поступает в выпарной агрегат. Белковый осадок после разгрузки фильтр-пресса поступает в вакуум-вальцовую сушилку 22. Задержка белкового осадка во влажном виде не допускается. [c.403]

Разделение сильно различающихся по молекулярной массе веществ (очень важный для химии белков прием обессоливания , т. е. удаления веществ, используемых при выделении белков и других высокомолекулярных водорастворимых соединений) в основном относится к очистке или выделению растворимых в воде природных соединений. [c.79]

Осторожное выделение белков из живых организмов позволило узнать очень многое о их свойствах. Каждый белок имеет вполне определенный молекулярный вес (от 10000 до нескольких миллионов), а отдельные группы белков можно выделить и исследовать благодаря тому, что каждый из них обладает различной скоростью диффузии. Например, определение молекулярного веса белка осуществляется методом измерения осмотического давления. Многие белки удается получить в кристаллической форме, а это позволяет исследовать их строение методом дифракции рентгеновских лучей. [c.482]

Технология выделения белков [c.247]

Некоторые методы солюбилизации (полной или избирательной) отличаются от других способов выделения белков тем, что в них используется только жидкая фаза без твердого носителя, Наоборот, дифференциальная солюбилизация (растворимость) требует наличия двух несмешиваемых жидких фаз. [c.77]

Полученный прессованием листьев клеточный сок служит основой для выделения белков, содержит растворимые белки клеток листьев, а также фрагменты хлоропластов. Компоненты этих двух типов находятся в концентратах белков зеленой массы, [c.233]

Больщинство белков выделяется из водных растворов солями щелочных или щелочноземельных металлов, не подвергаясь при этом денатурации. Так как многие белки по-разному относятся к различным высаливающим средствам (солям), то таким путем часто удается их разделять. Для высаливания белков применяют хлористый натрий, сернокислый натрий, уксуснокислый натрий, уксуснокислый калий, сернокислый магний, азотнокислый кальций, сернокислый аммоний, сернокислый цинк и другие соли. Некоторые из них осаждают белки, даже будучи прибавлены к раствору в небольшом количестве, что может быть с успехом использовано для дробного выделения белков. [c.62]

Выделение белков из листьев [c.245]

Белковые вещества весьма чувствительны к повышению температуры и действию многих химических реагентов (органические растворители, кислоты, щелочи). Поэтому обычные методы органической химии, применяемые для вьщеления того или иного вещества из смеси (нагревание, перегонка, возгонка, кристаллизация и др.), в данном случае неприемлемы. Белки в этих условиях подвергаются денатурации, т.е. теряют некоторые существенные природные (нативные) свойства, в частности растворимость, биологическую активность. Разработаны эффективные методы выделения белков в мягких условиях, при низкой температуре (не выше 4°С), с применением щадящих нативную структуру химических реагентов. [c.23]

С технической точки зрения выделение белков из листьев растений представляет собой операцию, уже внедренную в сельскохозяйственную и промышленную практику [16]. С биохимической точки зрения только начинают постигать наблюдаемые явления и связанные с ними механизмы. И с той и с другой точек зрения большой диапазон изменений анализируемых параметров дает основания для изучения значительных потенциаль- [c.259]

Выделение белков из водных растворов южeт быть осуществлено повышением концентрации солей этот процесс называется высаливанием. Высаливание белков производится полунасыщенными или насыщенны.чш растворами солей (На2804, (НН4)2 804 и др.) и совершенно отличается от коагуляции лиофобных коллоидов слабьпш концентра- [c.184]

ВЫДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ В ЧИСТОМ ВИДЕ [c.24]

Не менее важно в диагностике заболеваний почек исследование активности ферментов мочи. При острых воспалительных процессах в почках прежде всего отмечается повышенная проницаемость клубочковых мембран, что обусловливает выделение белка, в том числе ферментов, с мочой. В целом сдвиги в обмене веществ почечной ткани могут быть вызваны блокадой клубочкового кровотока, нарушением фильтрации и реабсорбции, блокадой оттока мочи, поражением юкстагломерулярного аппарата, нарушением секреции и т.д. [c.616]

Чтобы как-то решить эту проблему, некоторые авторы вначале исключают некий белок из базового набора и проводят параметризацию с сокращенным базовым набором. Затем найденные параметры используются для предсказания вторичной структуры выделенного белка. Таким образом, абсолютные величины подбираемых параметров как будто становятся независимыми (склонности, данные в табл. 6.1 и 6.2). Однако правила использования параметров, которые и составляют сущность каждого метода, по-прежнему основываются на всех известных белках, включая и предсказываемый. [c.146]

Для подробного исследования физико-химических и биологических свойств белков, а также для изучения их химического состава и структуры непременным условием является получение белков из природных источников в химически чистом, гомогенном состоянии. Последовательность операций по выделению белков обычно состоит в следующем измельчение биологического материала (гомогенизация) извлечение белков, точнее, перевод белков в растворенное состояние (экстракция) вьщеление исследуемого белка из смеси других белков, т.е. очистка и получение индивидуального белка. [c.23]

Для изолирования и выделения ферментов из биологических объектов в чистом (гомогенном) состоянии используют весь арсенал методов выделения белков в индивидуальном виде (см. главу 1). [c.159]

При выделении белков из расгворов имеет место денатурация белков. [c.258]

Заряд белков обусловлен в первую очередь остатками аспартата и глутамата, имеющими при нейтральном и щелочных значениях pH отрицательный заряд, и остатками лизина и аргинина, имеющими при слабоосновных и тем более при нейтральном и кислых pH положительный заряд. По мере повышения pH заряд белков проходит от положительных к отрицательным значениям и в изоэлектрической точке (см. 3.1) оказывается равным нулю. Вблизи этой области белок оказывается лишенным ионной атмосферы и его молекулы могут беспрепятственно сближаться до радиуса действия ван-дер-ваальсова притяжения. В ряде случаев это приводит к выпадению белка в осадок. Такой способ выделения белков из раствора называют изоэлектрическим осаждением. [c.234]

Связывающие белки подошли бы на роль подвижных переносчиков в процессе облегченной диффузии, однако большая часть выделенных белков принадлежит, по-видимому, к системам активного транспорта, и их функция в процессах переноса до сих пор окончательно не установлена. Согласно одному из предположений, связывающий белок обладает сильным сродством к транспортируемому веществу (субстрату) и прочно связывается с ним на наружной поверхности летки. Образовавшийся комплекс белок—субстрат далее диффундирует к внутренней i TopOHe мембраны. Здесь в результате процесса, сопряженного с самопроизвольно протекающей экзергонической реакцией, например с гидролизом АТР, конформация бел1ка меняется таким образом, что его сродство к субстрату уменьшается. В результате транспортируемое вещество переходит в клетку, а связывающий белок диффундирует обратно к наружной поверхности. Там его конформация возвращается к исходной, вероятно, под влиянием химических воздействий. [c.359]

Наиболее распространенный метод — экстрагирование в жидкой среде, которое заключается в переводе белков в растворимое состояние в щелочной среде, куда помещают отщелушенные (лишенные оболочек) и размолотые семена [38]. Нерастворимые вещества отделяют центрифугированием, после чего белки осаждают добавлением кислоты, промывают и высушивают. Часть антипитательных веществ удаляется во время этих операций. Таким образом, большая часть а-галактозидов и почти 70% трипсиновых ингибиторов и лектинов отделяются в процессе экстракции в щелочной среде и промывки выделенных белков гороха и конских бобов [39]. Содержание вицина и конвицина в экстрактах конских бобов всегда меньше, чем в исходной муке [87]. Содержание фитиновой кислоты в экстрактах зависит от pH при экстракции и осаждении у сои осаждаются выделенные белки, более богатые фитиновой кислотой при pH 5 5 чем при pH 4,5 [22]. [c.348]

С тех пор как Порат и Флодин в 1959 г. в качестве носителя при фракционировании белков применили первые гели из сетчатого декстрана сефадекса (Sephadex), произошло очень суш,ественное развитие этой техники. Она стала повседневной во всех лабораториях и даже в промышленных производствах, нуждаюш,ихся в выделении белков. Разработано много других носителей, все более расширяющих возможности их применения. [c.73]

Сапонины — это гликозилированные стероиды или тритерпе-ны. Стерическая громоздкость их алифатического ядра аналогична таковой стеринов. Они могут препятствовать ассимиляции холестерина и, таким образом, оказывать угнетающее действие на рост молодых животных (см., например, [43]). Их содержание в препаратах зеленых белков зависит от содержания сапонинов в растении и от условий выделения белков [69] (табл. 6В.13). [c.252]

Некоторые белки листьев проявляют гидролитическую и окислительную ферментативную активность. Другие являются ингибиторами протеаз или лектинов. Они могут проявлять свое действие при выделении белков или придавать им особые свойства. [c.256]

Из органических соединений, помимо давно применяемых водных растворов глицерина, широко используют (особенно для солюбилизации) слабые растворы сахарозы. На растворимость белков при экстракции большое влияние оказывает pH среды, поэтому в белковой химии применяют фосфатные, цитратные, боратные буферные смеси со значениями pH от кислых до слабощелочных, которые способствуют как растворению, так и стабилизации белков. Особенно широкое распространение получили трис-буферные системы, представляющие собой смеси 0,2 М раствора трис-(оксиметил)-аминометана (НОСН,)зСКН, (сокращенно обозначают трис ) с 0,1 М раствором хлороводородной кислоты в разных соотношениях. Для выделения белков сыворотки крови используют способы их осаждения этанолом (см. метод Кона), ацетоном, бутанолом и 1гх комбинации. Почти все органические растворители разрывают белок-липидные связи, способствуя лучшей экстракции белков. [c.24]

Перечень предложенных в 1920-1940 гг. теорий и гипотез можно было бы продолжить, но, по-видимому, приведеных уже достаточно для постановки следующих двух вопросов чем были вызваны фактический отказ от пептидной теории Фишера и появление такого большого количества существенно отличающихся и даже взаимоисключающих друг друга концепций химического строения белков и почему все они, несмотря на пестроту в химическом отношении, непременно постулировали существование белковых молекул только в форме циклических группировок Для сложившейся в послефишеровский период ситуации характерно прежде всего наличие заметного несоответствия между достаточно высоким уровнем развития аналитической и синтетической органической химии и неудовлетворительным состоянием белковых исследований. В химии белка отсутствовали надежные количественные методы выделения, очистки и анализа, а также методы расщепления, гарантирующие от вторичных реакций и образования побочных соединений. По этим причинам, а часто и вследствие неиндивидуальности выделенных белков среди продуктов их распада находили массу самых разнообразных веществ, строение которых органическая химия того времени уже умела анализировать. Поскольку разделить их на первичные и вторичные не представлялось возможным, выбор в каждом случае оказывался случайным, обусловленным вкусами и интуицией автора. Это ответ на вторую часть первого вопроса. [c.63]

Разборка мембран и последующее выделение белков с помощью детергентов и хелатирующих агентов. Процедура разборки мембран связана с разрушением белково-липидного слоя и ее можно сравнить с удалением цемента, который связывает кирпичи в стене. Для разборки мембран часто используют мочевину, гуанидинхлорид, детергенты, желчные кислоты, ЭДТА, ферменты - липазы. [c.107]

Для выделения белка слабоподкисленный клеточный сок картофеля (pH 5) нагревали до 70°С. Смесь нейтрализовав до pH 6,5 известковым молоком. Скоагулированный белок выпадал в осадок. После декантации осадок смешивали с мезгой. [c.16]

Техническая лактоза (РТУ РСФСР 761—64). Получают лактозу из молочной сыворотки после выделения белков, сгущения до концентрации сахаров 50 /о и кристаллизации. Лактозный сахар-сырец содержит не менее 927о сахара, не более 3% воды, 2% зольных веществ и 1 % молочной кислоты. Количество белка не регламентировано, но обычно оно не превышает 3%. Для нужд микробиологического синтеза иногда готовят сгущенный концентрат лактозы. [c.77]

Чрезвычайно эффективным средством фракционирования белков из смеси оказалась колоночная хроматография с гидроксилапатитом, различными ионообменными смолами и производными целллюлозы в качестве носителей. При выделении и очистке белков используют четыре основных типа хроматографии адсорбционную, распределительную, ионообменную и аффинную (хроматография по сродству)-в соответствии с разными физическими и химическими механизмами, лежащими в основе каждого из них. Хроматография широко применяется не только для выделения белков, но и для разделения множества других органических и неорганических веществ, входящих в состав живых организмов. [c.27]

Методика опыта (кристаллизация альбумина). Источником получения альбумина обычно служит белок куриного яйца. В 10 свежих куриных яйцах тщательно отделяют белок от желтка и к выделенному белку добавляют равный объем насыщенного (ЫН4)2304. Выпадает осадок глобулина, который отделяют в центрифуге при 2500 об/мин. Центрифугат осторожно сливают на складчатый фильтр или в воронку Бюхнера и отсасывают его. При температуре 20° С отмеряют определенный объем фильтрата и добавляют к нему тонко измельченный (NH4)2S04 из расчета 8,5 г (ЫН4)2504 на 100 мл фильтрата. При этом выпадает желтовато-розовый осадок альбумина, который отфильтровывают на воронке Бюхнера или через складчатый фильтр. Отфильтрованный осадок альбумина растворяют (стакан погружают в ледяную воду) в возможно меньшем количестве воды. В раствор добавляют по каплям (при помешивании) 5%-ный раствор СН3С6ОН до pH = 4,7 (проверяют ионометром). Раствор отфильтровывают, чтобы исчезла муть. К фильтрату добавляют большими порциями насыщенный раствор (NH4)2S04 (при встряхивании) до появления так называемой муаровой мути. При температуре от О до 2° С через 1—2 суток образуются игольчатые кристаллы альбумина. Кристаллический альбумин следует хранить в растворе с 2—3 каплями толуола, который применяют в качестве антисептика. [c.43]

Суммарное получение белков основано на растворении их в воде, в солевых, водоспиртовых и слабощелочных растворах. Выделение белков заключается в экстрагировании их тем или иным растворителем после измельчения исследуемого материала. [c.44]

Для изучения структур и функций белков требуется вьщеление и очистка их с минимальным количеством примесей, а в идеале — до гомогенного состояния. Связи, поддерживающие высшие структуры белковых макромолекул, легко разрываются, число гидрофобных и гидрофильных группировок на поверхности белковых глобул изменяется, что сказывается в первую очередь на их растворимости. Для выделения белков из клеток последние разрушаются, причем если для деградации цитоплазматических мембран животньгх клеток достаточно применения гомогенизаторов, то разрушение клеточных стенок растительных и особенно микробных клеток требует больших усилий (ультразвук, шаровые мельницы и т. д.). [c.54]

Браконно (Вгасоппо1( Анрн (1760— 1655), французский химик Образо а ние получил Страсбургском и Парижском университетах Основное неправ ление работ — химия природных со динении. Впервые успешно осуществил выделение белков из растительных и животных тканей. Открыл в продуктах гидролиза белка глицин (1620) [c.23]

Для реализации такого подхода необходимо выбрать протеолитический фермент м подобрать условия, при которых полипептидная цепь исследуемого белка будет гидролизоваться только по нанбю/1ее доступным пептидным связям. Важным условием ограниченного протеолизв является сохранение нативной конформации белке. Поэтому при выделении белка следует избегать действия денатурирующих агентов. Во многих случаях удается расщепить молекулу белка на небольшое число фрагментов, если проводить гидролиз я условиях, которые снижают актнв- [c.48]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология