Стандартные смеси аминокислот

Рис. 4.2. Хроматограммы стандартной смеси аминокислот (а) и гидро-лиаата ванадилпорфириновой фракции нефти (б), полученные на аминокислотном анализаторе — жидкостном хроматографе Mi rote hna AAA 881 [761].

Рис. 32.15. Одноколоночный анализ стандартной смеси аминокислот (гидролизата белка) на анализаторе фирмы Te hni on.

К 1—2 мл крови добавляют равный объем 0,04 н. раствора СНзСООН, нагревают на кипящей водяной бане 2—3 мин, охлаждают я осадок белка отделяют центрифугированием. Центрифугат сливают и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 0,1—0,2 мл смеси НСООН—СНзСООН—Н2О (7 5 13), нерастворившийся осадок отбрасывают. На хроматограмму наносят 0,01—0,02 мл полученного раствора и стандартные смеси аминокислот и хроматографируют в бута-нолуксусной смеси. После разгонки хроматограммы обрабатывают нингидрином, идентифицируют аминокислоты и проводят их количественное определение. Содержание аминокислот в сыворотке крови выражают в микромолях, миллиграмм-процентах или процентах к небелковому азоту. [c.195]

Рис. 3. Двумерная хроматограмма стандартной смеси аминокислот Нанесено по 0,1—0,Ь мпг асп (1), цист (г), глу (3), лиз ( ), арг (5), сер] (в), гли (7), опро (8), тре (9), ала (10), гист (и), про (12), тир (13), вал (14), лей, илей, мет (13),

С переходом на непрерывное детектирование изменился и метод стандартизации. Вместо стандартизации по лейцину работу всех систем анализатора стали стандартизовать по результатам анализа стандартной смеси аминокислот. [c.316]

Стандартные смеси аминокислот [c.342]

Приготовление стандартных смесей аминокислот. Для калибровки аминокислотных анализаторов используют все аминокислоты, входящие в состав белков или встречающиеся в физиологических жидкостях или биологических экстрактах. Соответственно различают два стандарта белковый гидролизат и смесь редких аминокислот. Аминокислоты, которые используют [c.342]

Рис. 32.12. Двухколоночный анализ стандартной смеси аминокислот на базовом аминокислотном анализаторе.

Хроматограмма стандартной смеси аминокислот (соответствующей составу физиологической жидкости) приведена на рис. 32.13 и 32.14. [c.345]

Аналогичным образом, но при помощи интегрального метода можно рассчитать содержание вещества по профилю элюирования, полученному на аминокислотном анализаторе. Площадь пика делят вертикальными линиями на участки, соответствующие смещению ленты за время сбора одной фракции. Так, при скорости подачи элюента 30 мл/ч, скорости смещения ленты самописца 75 мм/ч и объеме фракций 1 мл расстояние между двумя вертикальными прямыми составляет 2,5 мм. Величину поглощения определяют в точке пересечения кривой элюирования с вертикальной линией. Однако эти данные не пересчитывают на лейцин, поскольку в условиях анализа на аминокислотном анализаторе построение стандартной лейциновой линии является сложной задачей. Поэтому найденные величины поглощения суммируют, вычитают среднее значение фона, умноженное на число фракций, и в итоге получают число, соответствующее площади данного пика. При анализе стандартной смеси аминокислот определяют так называемый цветовой показатель (константу С ), соответствующий каждой аминокислоте (см. [c.354]

Аминокислоты белковых гидролизатов разделяют на колонке 0,9x150 см в две стадии. Вначале 0,2 н. буферным раствором с pH 3,25 элюируют кислые и часть нейтральных аминокислот, а после выхода глицина (250 мл 8 ч 20 мин) насос переключают на подачу второго 0,2 н. буферного раствора с pH 4,25, которым элюируют остальные нейтральные и ароматические аминокислоты (тирозин и фенилаланин). В соответствии с константами диссоциации тирозин и фенилаланин должны элюироваться в меньших объемах их задержка объясняется адсорбцией на матрице ионита. Основные аминокислоты элюируются с большой задержкой, ускорить их выход можно лишь существенным увеличением концентрации буфера. Однако это в свою очередь вызывает дрейф нулевой линии, изменение объема смолы и ряд других отрицательных последствий. Поэтому элюирование заканчивают, а оставшиеся аминокислоты вымывают разбавленным раствором гидроокиси натрия. Вторую половину образца хроматографируют на короткой колонке (15 см) в 0,38 н. буфере с pH 5,28. При этом вначале получают суммарный пик кислых и нейтральных аминокислот, а затем в области между триптофаном и аргинином элюируют основные аминокислоты. При скорости подачи 30 мл/ч и 50 °С общее время анализа составляет 21 ч 30 мин (16 ч 30 мин и 5 ч). Хроматограмма стандартной смеси аминокислот приведена на рис. 32.12. [c.343]

В приборе предусмотрен простой измеритель скорости потока жидкости 17). Он представляет собой стеклянную трубку с двумя рисками. На вход трубки подаются пузырьки воздуха, скорость перемещения которых легко подсчитать по времени прохождения известного расстояния между рисками. Манипулируя работой насосов 5) и 11), можно установить отдельно скорость элюцип колонки и скорость подачи нингидринового реактива (для указанного выше состава последнего соотношение скоростей должно быть 2 1). На выходе всего прибора имеется запорный клапан 16). Внешний вид аминокислотного анализатора Biotronik L 7000 представлен на рис. 183. Прибор можно укомплектовать интегратором с микрокомпьютером (например, типа SP4100). Он производит обсчет площади пиков и (с учетом данных по калибровке прибора стандартной смесью аминокислот) печатает на ленте аминокислотный состав исследуемого препарата. [c.522]

Рис. 4.16. Хроматограмма стандартной смеси аминокислот и гидролизата ванадилпорфиринового концентрата нефти

Все буферные растворы содержат нейтральный детергент Вг1]-35 (полиэтиленгликольлаурат), способствующий более эффективному смачиванию зерен ионита. Буферные растворы готовят в больших бутылях, объемом 20—40 л, поскольку важно очень точно довести pH буферного раствора. Величину pH определяют при помощи точного компенсирующего рН-метра. Окончательную доводку буферных растворов производят после первого контрольного анализа стандартной смеси аминокислот. [c.335]

Объем образца составляет 50—бООл кл. Раствор пептида или стандартной смеси аминокислот (из расчета 0,5—5 ммоль каждого компонента) в 0,1 М растворе бикарбоната натрия упаривают досуха в вакууме, удаляя при этом следы аммиака. Остаток растворяют в 10—15 мкл воды (свободной от аммиака) и смешивают с равным объемом насыщенного раствора ДНС-хло-рида в ацетоне. Смесь инкубируют при 37 °С в течение 1 ч, экстрагируют избыток дансил-хлорида тремя порциями по 500 мкл толуола или этилацетата. При выполнении этих операций еле- [c.376]

На фиг. 63 схематично представлены негативные снимки в ультрафиолетовых лучах хроматограмм, полученных по методике Шеквиста показано разделение ФТГ-производных стандартной смеси аминокислот. [c.165]

Хроматографирование. В две чашки Петри помещают растворитель на 1/2 высоты. В центр одного хроматографического круга микропипеткой наносят каплю стандартной смеси аминокислот, в центр другого - каплю анализируемой смеси. Каждую хроматограмму помещают в чашку Петри так, чтобы "фитили" погружались в растворитель (см. рис. 49). Чашки закрывают крышками и разделяют смесь до тех пор, пока растворитель под действием капиллярных сил пройдет почти до конца хроматографической бумаги. На полученных хроматограммах карандашом отмечают фронт растворителя. [c.369]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология