Методы определения активности эстеразы

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЭСТЕРАЗЫ 433 [c.433]

Методы определения активности эстеразы [c.433]

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЭСТЕРАЗЫ 435 [c.435]

Особой областью флуоресцентного анализа является изучение ферментативной активности в жидких средах, тканях и клетках. Для большинства известных в настоящее время ферментов разработаны чувствительные флуоресцентные методы анализа, основанные на собственной флуоресценции самих ферментов или продуктов их метаболизма. В то же время в последние годы разработаны очень чувствительные методы определения активности ферментов с помощью флуоресцирующих метчиков. Для этого используют флуорогенные соединения, являющиеся комплексом субстрата фермента и химически связанного с ним флуорохрома (обычно флуорохромом является аминофлуоресцеин). В растворе флуорогенные соединения не флуоресцируют, а при наличии в исследуемой среде активного специфического фермента субстрат подвергается разрушению, флуорохром высвобождается и возникает интенсивная флуоресценция. Для анализа активности клеточных эстераз был предложен диацетат флуоресцеина, который легко проникает в живые клетки и, расщепляясь с освобождением флуоресцеина, придает клеткам с активными эсте-разами зеленую флуоресценцию. Аналогичным образом можно определять и лигазную активность клетки — об использовании метчиков энзимологии см. работы Рубина [57] и Мейселя [24]. [c.297]

Мы поставили задачу разработать доступный и высокочувствительный метод определения указанных дефолиантов, использовав для этого энзимный метод, основанный на способности фосфорорга-нических соединений определенного типа угнетать фермент холин-эстеразу. Используя микрохимический титрационный метод определения активности холинэстеразы в присутствии яда, опубликованный Смирновой [5] для меркаптофоса, мы разработали количественное определение фолекса и бутифоса в растительном материале. [c.130]

Флуоресценция нафтола, образующегося при расщеплении а-и р-нафтилацетатов, использована в очень чувствительном методе определения активности фермента При гистохимических исследованиях эстераз нафтол обнаруживают в виде окрашенных соединений, получаемых в результате различных реакций сочетания например с а-нафтилдиазо-1,5-нафталиндисульфокислотой или диазотированным розанилином . [c.171]

Доказано, что ацетилхолин выступает как передатчик нервного импульса в автономных ганглиях . Позднейшие исследования показали, что ацетилхолин является передатчиком самостоятельного нервного импульса в мышцах млекопитающих выявлена возможность аналогичного механизма его действия на центральную нервную систему . Эти выводы были проверены, особенно в клинической части " . Полученные результаты положили начало многочисленным исследованиям деталей этих явлений, например распределения, специфичности и очистки холин-эстераз , методов определения активности этих энзимов и изучения взаимодействия энзима, среды и алкалоидов . Следует добавить, что чисто химические гипотезы не дают полного представления о всем физиологическом процессе. Недавно появилось интересное сообщение об электротехнической трактовке передачи импульса и было обращено внимание на электрогенетические свойства ацетилхолина . [c.574]

Дельта-рН-метод , примененный Мичелом [73] в 1949 г., был впоследствии модифицирован, и его стали применять как метод определения остатков ФОС [37, 77]. Он крайне прост, требует минимума аппаратуры и позволяет за день исследовать большое количество проб. Недостатками этого метода являются а) очень низкая чувствительность, особенно вследствие того, что pH в лучшем случае изменяется на 1 единицу, а большинство рН-метров имеют точность измерения не выше 0,02 единицы б) активность эстераз изменяется с pH, следовательно, скорость реакции не является постоянной в ходе опыта в) могут возникать помехи из-за буферного действия неко- [c.434]

Для оценки кислороднезависимых механизмов внутриклеточной микробицидности моноцитов используется метод определения содержания лизосом в цитоплазме моноцитов. Содержание лизосом в моноцитах оценивают с помощью их прижизненной окраски люминесцентным красителем — акридиновым оранжевым, который избирательно накапливается в лизосомах, окрашивая их в ярко-красный цвет. С помощью люминесцентной микроскопии окрашенных препаратов оценивают суммарный индекс люминесценции моноцитов, который отражает содержание лизосом в их цитоплазме. Другие варианты оценки содержания лизосом связаны с цитохимическим определением активности внутриклеточных ферментов кислой фосфатазы или неспецифической эстеразы. [c.218]

Действие других эстераз, например химотрипсина, трипсина, некоторых эстераз насекомых и ряда других энзимов, также мо- жет быть ингибировано фосфорорганическими пестицидами. Для всех этих ферментов существуют специфические субстраты. Учи- утывая это, для определения пестицида можно выбрать не холин- эстеразу, а другой фермент и соответствующий ему субстрат, или даже смесь ферментов, что до некоторой степени и осуществляется в методах, использующих подавление активности плазмы крови. [c.17]

Нам представился случай провести некоторые ориентировочные опыты по определению ферментных показателей крови тироидоэктомированных коз. Эти козы принадлежали ферме тироидоэктомированных коз , которая снабжает различные лечебные учреждения Москвы терапевтически активным молоком. Для нашего исследования нам было предоставлено пять нормальных и семь оперированных животных. Первые же определения дали чрезвычайно низкие значения показателя каталазы как для нормальных, так и для тироидоэктомированных коз. Мы удвоили концентрацию крови (т. е. 1 на 500 вместо 1 иа 1000), но и после этого показатели пероксидазы, протеазы и эстеразы были настолько малы, что их пельзя было считать надежными. Мы поэтому ограничились определением показателей каталазы опыты производились по онисанному ранее методу ежедневно на всех животных в течение 10 дней. Полученные данные приведены в нижеследующих таблицах. [c.552]

Таким образом, у микроорганизмов описаны также эстеразы, молекулярные веса которых имеют величины, характерные для эстераз животного происхождения (Krish, 1971). Кроме того, не исключено, что при определении молекулярного веса методом гельфильтрации, как это было сделано в цитированных выше работах, может происходить диссоциация молекул фермента на активные субъединицы, как это было обнаружено при исследовании животных эстераз (Krish, 1971). [c.32]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология