Смеси ферментов

Ввиду того что распад нитрила миндальной кислоты на компоненты в процессе ферментативного гидролиза не является гидролизом, этот нитрил расщепляется не глюкозидазой, а специальным ферментом—оксинитрилазой, содержащейся в смеси ферментов эмульсина. [c.269]

Спиртовое брожение — это расщепление глюкозы в анаэробных условиях смесью ферментов, зимазой, которую выделяют дрожжевые грибки В результате анаэробного ферментативного расщепления глюкоза превращается в пировиноградную кислоту, которая декарбоксилируется пируватдекарбоксилазой Образующийся при этом уксусный альдегид восстанавливается до этанола восстановленным никотинамидадениндинуклеотидом (НАД Н), входящим в состав фермента алкогольдегидрогеназы [c.779]

В настоящее время находят применение некоторые протеазы, полученные из экстрактов животного, растительного и микробного происхождения. В первом случае речь идет преимущественно о пепсине, трипсине, химотрипсине (особенно а-химо-трипсин) из протеаз растительного происхождения наиболее употребимы папаин и фицин. Среди многочисленных ферментов микробного происхождения имеются препараты промышленного назначения бактериальные экстракты, дрожжи, плесневые грибы. Эти ферменты поступают в торговлю под различными названиями, и их специфическая активность не всегда хорошо известна, особенно когда речь идет о препаратах или смесях ферментов. Впрочем, сходная картина наблюдается и в отноше- [c.598]

Ход работы. I. В трех пробирках готовят инкубационные смеси фермента (аргиназы) с субстратом (аргинином и его аналогами — креатином, гуанидином), как указано в таблице [c.73]

Вследствие сложности этих реакций тирозиназа является, по-видимому, не простым ферментом, а смесью ферментов. [c.398]

Поэтому ДЛЯ разделения сложной смеси ферментов, которые могут сорбироваться, необходимы дополнительные средства. [c.106]

Иногда перед адсорбцией на специфическом сорбенте бывает необходимо освободиться от белков-примесей путем предварительного фракционирования. Если изменить условия адсорбции, такие, как pH, ионную силу, темшературу, скорость потока и диэлектрическую проницаемость, можно избирательно исключить некоторые ферменты. Более того, для предотвращения адсорбции некоторых из них можно добавить в раствор ингибитор или другие лиганды. Используя носитель с порами малого размера, можно исключить белки с высокой молекулярной массой. Повысить избирательность можно также, применяя специфическое элюирование. Специфические ингибиторы или субстраты могут быть применены для избирательного элюирования индивидуальных ферментов. В гл. 10 приведены примеры разделения смесей ферментов на сорбентах с групповой специфичностью для выделения индивидуальных веществ применялись градиенты pH, ионной силы или температуры. [c.107]

Адсорбция фермента очень сильно зависит От состава и реакций среды. Поэтому, промывая адсорбент после адсорбции небольшими порциями того или иного растворителя или даже водным раствором с измененным pH, можно вытеснить адсорбированный фермент с поверхности адсорбента. Это вытеснение адсорбированного вещества получило название элюции. Для дальнейшей очистки эту операцию с адсорбцией и элюцией повторяют несколько раз и таким образом получают фермент очень высокой чистоты и весьма большой активности. Методика Вильштеттера не только позволяет очищать ферменты, но и разделять смеси ферментов, отделяя их один от другого. [c.258]

Рис. 10.7. Разделение смеси ферментов на №-(6-аминогексил)-Б -АМР—сефарозе с помощью градиента температуры [15].

Производство пива и спирта можно также совершенствовать с помощью более активных штаммов микроорганизмов, которые возможно получить селекцией. Уже сейчас выведены новые варианты грибов, продуцирующих в полтора-два раза больше декстриназы и мальтазы их внедрение позволяет снижать количество фермента и эффективнее проводить осахаривание крахмалистого сырья. Разнообразные возможности заложены и в дальнейших поисках оптимальной смеси ферментов (смеси применяемых культур), в стимулировании их биосинтеза при выра-ииш нии микробных продуцентов и т. п. [c.230]

Строго говоря, зависимость оо от Л в этом случае не должна быть сигмоидной. Но на практике, если скорость реакции измеряется по нарастанию концентрации продукта, кинетика действия смеси ферментов, катализирующих превращение одного субстрата в разные продукты, нередко имеет сигмоидный вид. Причиной кажущегося снижения скорости реакции при низкой концентрации субстрата является при этом превращение субстрата в конкурирующей реакции, протекающей с большей скоростью. [c.234]

На рис. 6.13 показано разделение смеси ферментов на большой колонке. Содержащий катепсины С, В1 и I) экстракт бычьей селезенки обрабатывали сульфатом аммония до степени насыщения 0,65, диализовали и разделяли на сефадексе 0-150. Полученные пики и соответствующие значения активности фер- [c.383]

Оси. работы посвящены исследованию адсорбции и электрофореза. Создал (1931 —1935) метод фронтальной адсорбционной хроматографии, с помощью которого смог анализировать качественно и количественно смеси, содержащие аминокислоты, пептиды, углеводы. В результате проведенных им (с 1935) исследований электрофореза разработал метод электрофоретического анализа биоколлоидов с его различными модификациями (микроэлектрофорез, электрофорез на бумаге, иммуноэлектрофорез). Применил электрофоретический метод для решения ряда прикладных задач биохимии — исследования и разделения нормальной и патологической сывороток, изучения чистых белков и их смесей, ферментов, нуклеопротеидов, нуклеиновых и аминокислот и др. С помощью иммуноэлектрофореза заложил основы изучения белковой структуры нормальной сыворотки крови, выделив из нее три различных белка (теперь их обнаружено более 20). [c.428]

Путем хроматографического анализа сыворотки крови человека было обнаружено наличие 6—10 белковых фракций. Распределение ферментов вдоль бумажной полоски после хроматографического разделения смеси ферментов может быть исследовано следующим способом. [c.160]

Проточная система, предложенная Надем и др. [21 ], показана на рис. Х1.3. Забуференный фосфатом раствор субстрата (глюкоза -ЬК1) и раствор смеси ферментов, содержащий в оптимальном отношении (1 2) пероксидазу и глюкозооксидазу, смешивают в камере 2. Смесь пропускают через змеевик 3 в течение некоторого времени, необходимого для протекания реакции. Уменьшение концентрации I регистрируется электродом 4. Реакцию электрода на изменение концентрации глюкозы (калибровка электрода) изучали при следующих условиях 10 М К1, 1 М фосфатный буферный раствор, pH = 6,0 энзимы—0,3 мг/мл [c.328]

Аликвотные части раствора, содержащие 20—60 мкг о-глюкозы, переносят в пробирки и разбавляют дистиллированной водой до объема 1 мл. В пробирки приливают по 5 мл смеси фермент — буфер — хромоген, встряхивают и выдерживают ровно 45 мин в темноте при 20 1°С, чтобы образовался хромофор. Реакцию прерывают, добавляя 0,25 мл 5 и. соляной кислоты, и измеряют оптическую плотность раствора при 400 нм. Для каждой серии анализов проводят холостой опыт и строят калибровочный график зависимости оптической плотности раствора от содержания о-глюкозы (от О до 60 мкг/мл). [c.86]

Многие исследователи работали над вопросами спиртового брожения. Л. А. Иванов впервые установил в 1903 г. участие фосфорной кислоты в процессах брожения и показал, что стимулирующее действие фосфата сводится к тому, что образуется промежуточное соединение фосфорной кислоты (фосфорные эфиры), способное к дальнейшим превращениям. Этот процесс, получивший название фосфорилирования, является промежуточной стадией брожения. Кроме того, в присутствии неорганических соединений фосфора скорость брожения быстро возрастает. В дальнейшем было установлено, что независимо от того, какой гексозный сахар был взят для брожения, в результате фосфорилирования образуется дифосфат фруктозы. Роль фосфора в этих процессах изучали также английские ученые А. Гарден и Т. Юнг (1905). Они разработали схему спиртового брожения, включающую образование фосфорных эфиров. А. И. Лебедев (1881 — 1938) открыл многие основные этапы спиртового брожения, используя дрожжевой сок, полученный по его методу. Для разделения смеси ферментов А. И. Лебедев применял ультрафильтрацию через желатиновые фильтры. Он совершенно верно определил роль кофермента как передатчика водорода при процессах брожения. В настоящее время установлено, что коферменты состоят из комплекса различных веществ. В результате своих исследований [c.534]

Метод пользуется в настоящее время наибольшей популярностью. Все большее значение приобретает использование эстеразного действия протеолигических ферментов — химотрипсина илн смеси ферментов панкреатина. Если такой смесью подействовать на эфиры рацемических аминокислот, то гидролизуется только ь-антнпод, который легко отделить. Таким путем М. А. Губерниев получил Ь-фенилаланин. Этот метод широко развит Цаном. [c.456]

Полное ферментативное расщепление белков проводят с помощью смеси ферментов, которую составляют протеазы, синтезируемые грибами (проназы). Однако ферменты смеси расщепляют еще и друг друга, так что в общем случае для количественного расщепления белка на составляющие его аминокислоты ферментативный гидролиз не годится. Один из новых методов основан на применении гидролитических ферментов, иммобилизованных на колонках с агаровым гелем. Гидролизуемый белок пропускают через гель, после чего на дне колонки скапливаются составляющие его аминокислоты [132]. [c.168]

При исследовании крови смешивают 1 мл образца с 9 мл 10%-ной (масс./об.) трихлороуксусной кислоты раствор центрифугируют или фильтруют. В случае тканевых экстрактов, инкубационных смесей ферментов и других объектов обычно достаточно создания в конечном растворе концентрации трихлороуксусной кислоты 3 -н 5% (масс./об.) для обеспечения полного осаждения белков. Небелковый азот остается в супернатанте. После удаления осадка белка трихлороуксусную кислоту в значительной мере можно удалить из супернатанта путем многократной экстракции диэтиловым эфиром, насыщенным водой. [c.473]

Еще до первого химического образования пептидной связи делалась попытка получить белок с помощью ферментов. В 1886 г.Данилевски показал, что при инкубации продуктов расщепления белка с неочищенной смесью ферментов желудочного сока выпадает белковоподобный осадок. Завьялов и сотр. в 1901 г. назвали продукт такого синтеза пластеином. Впоследствии многие исследователи занимались синтезами высокомолекулярных пластеинов при воздействии протеолитических ферментов на концентрированные растворы подходящих олигопептидов (ср. разд. 2.2.9.2.) [c.166]

Применимость. Капилляры с поли(метилглутаматовым) (ПМГ) покрытием пригодны для разделения белков. Кроме того, ими можно разделять комплексные смеси ферментов (рис 71). [c.78]

Чтобы построить рестрикционную карту, следует сравнить размеры фрагментов, полученных при раздельной рестрикции и при рестрикции смесью ферментов. Результат такого сравнения представлен на рис. 4.4,Б. Если при гидролизе ДНК каждой из двух рестриктаз ( соЯ1 и ВатШ) образуются три фрагмента, значит, в исходном фрагменте ДНК было два сайта узнавания для каждой из использованных рестриктаз. Фрагмент размером 300 п. п., который образуется в результате гидролиза соК1, не расщепляется [c.53]

В наших лабораториях мало применялся ферментативный гидролиз протеинов. Причина этого лежит в неуменьи разделять ферменты, идентифицировать, очищать от примесей. Действие смеси ферментов, добываемых нами из желудочного сока животных, из секретов желез, из клеток организмов, не позволяет вести процесс распада строго по стадиям от протеина до аминокислоты аналогично ходу его в организмах, отклоняет реакцию в сторону получения вторичных образований и даже не исключает одновременно и синтеза (Данилевский). Только в самое последнее время Вильштетером, а за ним другими исследователями открыты способы очистки и изолирования ферментов один от другого. Эти успехи в области исследования ферментов, даже при нынешнем начальном, далеком от совершенства состоянии, дали в руки исследователей новое средство к изучению белковых веществ. Реакции с протеинами приближены к естественным, имеющим место в организмах условиям, а это во многом поможет разобраться в трудно разрешаемой белковой проблеме. [c.18]

Однако в целом экзоферменты используются при установлении строения полисахаридов. гораздо реже эндоферментов. Последние, как правило,, отличаются тем, что расщепляют высокомолекулярные субстраты с образованием не MOHO-, а олигосахаридов. Так, например, а-амилаза слюны человека превращает амилозу в мальтозу и мальтотриозу с выходом, превышающим 90%. По этой причине эндоферменты можно использовать-как реагенты для повышения выхода олигосахаридов по сравнению с кислотным гидролизом, а также для получения не образующихся при кислотном гидролизе олигосахаридов с кислотолабильными гликозидными связями. Очевидно, что длй такого применения ферменты не обязательно должны быть охарактеризованы по специфичности более того, можно. пользоваться заведомыми смесями ферментов. Существуют примеры очень успешного применения на практике неочищенных ферментных препаратов. Так, при гидролизе 4-0-метилглюкуроноксилана древесины пектиназой были получены две серии гомологичных олигосахаридов с общим выходрм около 70% выходы отдельных представителей олигосахаридов превышали 10% [c.511]

Для некоторых гексоз характерно ферментативное расщепление. Наибольшее значение имеет процесс сгшртового брожения, происходящий под действием смеси ферментов зимазы. Эту смесь ферментов вырабатывают дрожжевые грибы. [c.513]

Метод. Нейтральный гидролизат (pH 7) подвергают действию смеси ферментов в течение 3—12 час. при комнатной температуре. Затем определяют аммиак манометрически методом Ван-Сляйка. [c.49]

Продажный панкреатин (Pan reatinum purum absolutum) представляет собой смесь ферментов, добытую особым способом из поджелудочной железы животных или ее сока. В качестве главных составных частей он содержит трипсин, диастаз и липазу, но кроме того, может содержать еще незначительные количества эрепсина и лактазы. Кроме абсолютного панкреатина в продаже имеются еще и другие препараты, представляющие собой только слабее действующие или смешанные с индиферентными веществами соответствующие абсолютному панкреатину смеси ферментов. В качестве индиферентных веществ могут применяться крахмал, молочный сахар и бикарбонат натрия. [c.524]

Ферменты являются сильнейшими катализаторами. Еще в 1836 г. Берцелиус установил, что под действием смеси ферментов из картофеля крахмал разлагается гораздо быстрее, чем под действием раствора серной кислоты. В лабораторных условиях никогда еще не удавалось с помощью низкомолекулярных катализаторов достичь скоростей и специфичности, свойственных ферментативным реакциям. В этой главе мы не будем углуб- [c.380]

Известны и другие условия, при которых механизмы с неупорядоченным присоединением субстратов характеризуются прямолинейными кинетическими графиками. Клеланд заметил, что при известных обстоятельствах члены кинетических уравнений, содержащие концентрации субстратов в высших степенях, полностью сокращаются. Во многих случаях эти члены, входящие как в числители, так и в знаменатели уравнений, столь малы, что обнаружить кривизну графиков практически невозможно. Эта ситуация частично напоминает рассмотренный Рейвером [13] случай кривизны графика, построенного по данным для односубстратной системы со смесью ферментов, действующих на один и тот же субстрат. Автор сделал вывод, что величины Кт для двух ферментов должны различаться вдвое, чтобы кривизна была заметной. [c.140]

Вопрос о химической природе ферментов является важнейшим вопросом биохимии. Изучению природы ферментов долго препятствовало то обстоятельство, что их нельзя было выделить в чистом виде. Они всегда содержали большое количество разнообразнейших примесей, главным образом белкового характера. Вильштеттер использовал опо1Собность продуктов клеточного распада по-различному адсО рбироваться на поверхностях адсорбентов. Ферменты этой способностью обладают в весьма большой степени. Поэтому при адсорбции из смесей фермент может быть почти полностью поглощен на поверхностях, в то время как различные примеси остаются в растворе. Для различных ферментов можно подобрать соответствующие адсорбенты, которые особенно хорошо адсорбируют тот или иной фермент, освобождая его от посторонних примесей. В качестве таких адсорбентов используется глинозем, каолин, коллоидная гидроокись железа и т. д. [c.257]

Отсутствие специфичности к основанию, а также постоянство отношения активности фермента к фенилаланиновым производным АМФ и УМФ на всех стадиях очистки при выделении фермента [44] свидетельствуют о том, что фосфоамидаза является одним ферментом, воздействующим на различные нуклеотидоаминокислоты, а не смесью ферментов, каждый из которых гидролизует производные какого-либо определенного мононуклеотида. [c.378]

Отечественный медицинский материал некролитического действия Дальцекс-трипсин , представляющий собой медицинскую марлю с привитым ферментом трипсином, способствует очищению гнойно-некротических тканей, уменьшает количество патогенной микрофлоры, снимает воспалительную реакцию [28]. Полиферментные салфетки для перевязок гнойных ран получают иммобилизацией на медицинской хлопчатобумажной марле смеси ферментов трипсина и лизоцима [29]. [c.191]

И поэтому, как видно на приведенном графике, пробирка, в которую не добавлено клеточного экстракта, не окрашивается. Наоборот, в той пробирке, в которую было добавлено 0,4 мл экстракта, раствор приобретает ярко-желтую окраску. Интенсивность окрашивания в этой пробирке достигает максимума через 20 мин инкубации, когда гидролиз ОНФГ завершается. Можно видеть, наконец, что начальная скорость окрашивания этой пробы соответственно в два и в четыре раза выше, чем скорость окрашивания проб, в которые добавлено только 0,2 или 0,1 мл экстракта. Таким образом, скорость гидролиза субстрата пропорциональна концентрации присутствующего в реакционной смеси фермента Р-галактозидазы. Следовательно, измеряя каталитическую активность, можно установить, какое количество фермента содержится в клеточном экстракте. Отношение активности к сухой массе присутствующего в экстракте органического вещества представляет собой удельную активность ферментного препарата. [c.82]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология