Радиоавтография высокого разрешения

РАДИОАВТОГРАФИЯ ВЫСОКОГО РАЗРЕШЕНИЯ [c.185]

Когда радиоавтографию используют для анализа образцов очень низкой активности, имеются два способа получения необходимых данных. Как уже упоминалось, может быть использован денситометр, допускающий точные измерения низких оптических плотностей, или применены методы подсчета числа проявленных зерен, приходящихся на единицу площади пленки. Последние стали широко использоваться исследователями, применяющими радиоавтографию с высоким разрешением [9]. [c.251]

Поскольку оба классических метода секвенирования ДНК - путем химической деградации и ферментативным построением комплементарной цепи - в условиях специфической терминации требуют разделения меченых фрагментов ДНК, различающихся по длине на один нуклеотид, в полиакриламидном гель-электрофорезе высокого разрешения, то этому процессу, а также и радиоавтографии, и чтению нуклео- [c.10]

Частицы, возникающие при распаде трития, обладают низкой энергией и поэтому идеально подходят для радиоавтографии высокого разрешения. Зерна серебра обычно располагаются на расстоянии 0,1—0,5 мкм от источника -частиц трития тогда как в случае -частиц это расстояние достигает 290 мкм ( leaver, 1967). Действительный диапазон зависит от энергии отдельной -частицы и плотности материала, через который она проходит, так что С может быть использован только в тех случаях, когда требуемое разрешение ниже 20 мкм. [c.174]

Другие методы выявления гибридизуемых in situ клеточных транскриптов с использованием флуоресцентных или конъюгированных с ферментом зондов обладают рядом преимуществ по сравнению с обычной процедурой радиоавтографического выявления. Эти преимущества заключаются в следующем (I) резко сокращается время, необходимое для определения участка гибридизации из-за отсутствия периода экспозиции радиоавтографов (II) методы выявления флуоресценции обеспечивают более высокое разрешение, чем при использовании радиоавтографов (III) при отказе от радиоавтографии часто удается увеличить отношение сигнал/шум. [c.314]

В основе метода секвенирования ДНК путем химической деградации лежит ограниченное расщепление меченого фрагмента ДНК под действием специфических реагентов. Непременным условием проведения секвенирования этим методом является наличие фрагмента ДНК, меченного только по одному концу. Разделение продуктов деградации по размеру с помощью высоковольтного электрофореза в полиакриламидном геле высокого разрешения, способного разделять фрагменты ДНК, различающиеся между собой по длине всего на один нуклеотид в достаточно широком диапазоне, и последующая радиоавтография геля позволяет определить нуклеотидную последовательность секвениро-ванного участка ДНК. [c.20]

Полученные описанным способом 8 образцов одновременно подвергают электрофоретическому разделению высокого разрешения, гель радиоавтографируют и с радиоавтографа читают последовательность нуклеотидов (см. рис. 1.22, в). Исходная последовательность комплементарна читаемой с радиоавтографа. [c.38]

В реакции транскрипции могут использоваться радиоактивные нуклеотиды, меченные Р, или Н. Изотоп Р дает такой радиоактивный сигнал, который не удается локализовать на уровне отдельной клетки, но который легко можно обнаружить с помощью радиоавтографии всего за несколько дней. Следует иметь в виду, что излучение невозможно достаточно эффективно регистрировать с помощью стандартной эмульсии гораздо лучше это делать, экспонируя меченый препарат с рентгеновской пленкой (Д. Дэвидсон, личное сообщение Р. Купмен, личное сообщение). Излучение имеет гораздо меньшую энергию, чем излучение Р поэтому оно обеспечивает лучшее разрешение, и, кроме того, меченные этим изотопом нуклеотиды имеют более высокую удельную радиоактивность, чем нуклеотиды, меченные тритием. Рибонуклеозидтрифосфаты, меченные довольно эффективно включаются в РНК под действием полимераз фагов SP6 или Т7. [c.35]

Эффективность радиоавтографии в выявлении меченных тритием молекул составляет около 5—10%. Нуклеотиды, меченные 1251 JJ 35 обеспечивают более высокую эффективность выявления метки на автографах по сравнению с распадами Н при сохранении адекватного для многих целей разрешения в световом микроскопе (например, для обнаружения генов вирусов и цитоплазматических мРНК). Меченные комплементарные РНК вируса SV40 обеспечивают достаточное количество зерен серебра на автографах после недельной экспозиции, когда с помощью гибридизации выявляется один участок вирусной интеграции на диплоидный набор хромосом [14]. [c.308]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология