Радиоавтография экспозиция

В определенный момент вегетации подопытное растение извлекают из почвы, очищают от земли и в распластанном виде плотно прижимают в темноте к фотопластинке. Радиоактивный изотоп фосфора своей радиацией действует на фотослой и как бы засвечивает его. После должной экспозиции (выдержки) (от нескольких часов до нескольких суток) фотопластинка проявляется и фиксируется (закрепляется), как обычно. Таким путем получают отпечаток (радиоавтограф), отображающий распределение радиоактивного изотопа в исследуемом растении. На рисунке ХУ1-2 дан пример подобных радиоавтографов. [c.391]

Радиометрические измерения выполняются быстро с помощью сцинтилляционного измерительного прибора. Однако лучше всего использовать радиоавтографию. Для фотометрического обнаружения радиоактивных веществ на высушенной хроматограмме после тщательного удаления растворителя к слою прижимают рентгеновскую пленку (например, РТ-1) и помещают их в светонепроницаемую коробку. Время контактирования определяется чувствительностью пленки и активностью разделенных веществ. При необходимости проводить экспонирование в течение длительного времени тонкослойную хроматограмму с пленкой следует хранить в холодильнике. Считается, что достаточно хорошее почернение пленки происходит, если за время экспозиции на 1 см попадает 1—10 миллионов Р Частиц (в зависимости от изотопа) [90, стр. 68]. [c.42]

Соединения с мечеными радиоактивными атомами могут быть определены при помощи радиоавтографии, осуществляемой путем прижимания бумажной хроматограммы к рентгеновской пленке. Экспозиция пленки должна быть такой, чтобы в фотографический слой проникло примерно 10 частиц на 1 см . Можно определять активность хроматограммы счетчиком Гейгера. [c.900]

Предположим, что делают одну инъекцию и через короткое время, скажем через полчаса, ткань фиксируют для радиоавтографии. В типичной клеточной популяции, где все клетки делятся быстро, но не синхронно, около 30% клеток получат радиоактивную метку. Это будут те клетки, которые синтезировали ДНК в короткий период экспозиции в присутствии Н-тимидина, и их доля в клеточной популяции отражает долю клеточного цикла, занятую S-фазой (рис 13-3). Только около 5% клеток в момент фиксации окажутся в стадии митоза (малая величина этого митотического индекса означает, что митоз занимает лишь небольшую часть клеточного цикла), но ни в одной из них не будет радиоактивной метки. Это указывает на то, что фазы М и S-обособленные части клеточного цикла. Однако, с другой стороны, если препараты фиксировать через несколько часов после введения Н-тимидина, то некоторые клетки, находящиеся в митозе, получат радиоактивную метку вероятно, эти клетки еще синтезировали ДНК в момент инъекции. Минимальный интервал между инъекцией и временем появления меченых митотических клеток будет равен длительности фазы Сг. Такого рода исследования позволяют определить длительность всех четырех фаз цикла. Пример использования этого метода приведен на рис. 13-4. [c.396]

Повышенный фоновый счет обнаруживается, когда 1) используется старая эмульсия, либо радиоавтографы экспонируются вблизи радиоактивных источников, таких, как 2) увеличивается время экспозиций 3) имеет место неадекватное удаление тритированных предшественников или кислоторастворимых компонентов. [c.179]

Мы получали удовлетворительные результаты при окрашивании гелей серебром, однако там, где это возможно, мы предпочитаем применять биосинтетическое мечение. Относительно небольшие изменения количества образцов, наносимых на гель для двумерного разделения, могут быть причиной получения столь различных картин фракционирования, что их трудно сравнивать. В случае радиоавтографии (или флюорографии) разницу в картинах распределения пятен в двух гелях, различающихся на порядок по количеству нанесенного материала, можно компенсировать подбором соответствующего времени экспозиции. [c.214]

Рис. 11-13. Радиоавтограф белков после двумерного разделения. В-клетки активировали в течение 24 ч ЛПС н затем метили в течение ночи 5-метионином (50 мкКи/мл). Нанесен материал, эквивалентный 10 клеткам. Экспозиция геля 5 дней.

Уменьшение площади образца. При радиоавтогра-фировапии образец располагают на близком расстоянии от эмульсии (или контактируют с ней) скорость потемнения пленки зависит от количества радиоактивного излучения, испускаемого с единицы новерхности образца В связи с этим скорость потемнения пленки может быть во много раз увеличена, если радиоактивный материал сконцентрировать на уменьшенной площади. Поскольку самоэкранирования не происходит, увеличение скорости потемнения должно быть примерно пропорционально уменьшению илощади образца, по крайней мере до размеров 1 мм. Практически это можно пояснить на примере с образцом, дающим на счетчике лишь 2 имп/мин. При концентрировании этого количества радиоактивного материала на поверхности 1 мм (около 1/500 площади круга диаметром 25,4 мм), радиоавтограф даст плотность потемнения, равную 0,6, все еще после трехдиевной экспозиции. [c.245]

Рис. 13-4. Метод, используемый обычно для измерения продолжительности фаз клеточного цикла. Несинхронно пролиферирующую клеточную популяцию короткое время вьщерживают в среде с Н-тимидином, а затем отмывают при этом клетки продолжают проходить свой цикл. Через разное время после экспозиции берут пробы клеток и получают радиоавтографы. Для интерпретации результатов полезно изобразить клетки так, как будто они распределены на равномерно вращающемся круге, причем положение каждой клетки соответствует стадии цикла, на которой она находится. Вначале клетки в фазе 8 получают радиоактивную метку (окрашенный участок), а клетки в фазах Сг, М и 01 ее не получают. Через промежуток времени, равный длительности Сг, меченые клетки начинают вступать в фазу М когда пройдет время, равное Сг + М, получают метк> все клетки, находящиеся в фазе М, и т.д. Отмечая время вступления меченых клеток в фазу М и последующие фазы вплоть до возвращения в М в принципе можно определить среднюю длительность фаз Сг, М и 8 и общую продолжительность цикла, а отсюда (путем вычитания) и

При необходимости продолжительных измерений и особенно, когда одновременно должно быть сравнено много образцов, радиоавтография является наиболее удобным методом. Операция экспоз1Щпи по существу не требует особого внимания, так как опасности потери данных нет, поскольку при этом отсутствует какая-либо радиотехническая аппаратура. Фактически при условиях хранения, предопределяющих уменьшение ослабления скрытого изображения и фона от излучения, продолжительность экспозиции будет ограничиваться главным образом периодом полураспада используемого изотопа и терпением экспериментатора. [c.246]

С целью повышения пользы количественной радиоавтографчи образцов, полученных с применением метода меченых атомоь, необходимо уделить внимание некоторым деталям при изготовлении этих образцов. В настоящем сообщении будут рассмотрены только сухие образцы. Как уже отмечалось, особенность радиоавтографии заключается в необходимости одновременной экспошгции многих образцов. Для использования только нескольких образцов радиоавтография является громоздким и неудобным методом, и ее использование в таких случаях может быть оправдано только исключительными обстоятельствами. Для осуществления одновременной экспозиции многих образцов они должны иметь такую форму, чтобы их можно было расположить рядом друг с другом. При сравнении образцов с помощью одной пленки было бы желательно использовать маленькие планшетки определенного размера, которые можно было бы наложить па пленку и удерживать вместе специаль- [c.246]

Количественные сравнения с разно11 степенью точности осуществляют многими способами. Во-первых, образцы могут быть просто рассортированы в порядке улели-чепия активности путем визуального сравнения. Этим методом можно осуществить и нолуколичественное определение, если серию источников известной активности экспонировать одновременно или если со всех образцов спять несколько радиоавтографов за различное время. Ранее уже было показано, что У 2 серий шкал времени экспозиции со стандартным отклонением между 3 и 5% получены визуальным подбором [6]. При помощи такой серии пленок было найдено, что денситометр дает стандартное отклонение 1%, т. е. такое значение, которое обычно получают при использовании счетчика. [c.249]

После испытания на скольжение снимали радиоавтограф для определения переноса металла. Этот метод определения переноса особенно пригоден, когда более мягкий полусферический образец скользит по более твердому плоскому образцу. Количество и распределение частиц продуктов износа на плоской новерхности определяли с достаточной точностью по вьоывавшим-ся ими потемнениям пленки, поскольку отсутствие царапин на поверхности плоского образца повышало точность радиоавтографа. При опытах выяснилось, что применение мягкого металла нри длительном контакте, сопровождающемся износом, устраняет значительное выкрашивание металла из твердой поверхности. В тех случаях, когда наблюдался значительны неренос металла, отличные четкие радиоавтографы снимали ири краткой экспозиции с помощью мелкозернистых пленок. При малол переносе металла применяли более чувствительную пленку. П.1генки проявляли обычным способом, после чего сравнивали результаты различных опытов. [c.265]

Исс.ледуемые соединения содержат атомы С , испускающие р-частицы. Если лист незасвечен-ной рентгеновской пленки наложить в темноте на высушенную бумагу, то на рентгеновскую пленку попадают р-частицы из тех участков хроматограммы, в которых локализуются радиоактивные соединения. После экспозиции соответствующей продолжительности рентгеновскую пленку проявляют темные пятна на пленке указывают на локализацию радиоактивных веществ на хроматограмме. Такой радиоавтограф, полученный для одноклеточных водорослей, у которых фотосинтез в атмосфере С Оз происходил в течение нескольких секунд, приведен на фото 52. [c.539]

Рис. 28. Радиоавтографы зубов, запломбированных эпоксидными материалами (8 — дентоксид, 9 — эпоксидент). Экспозиция—30 дней. Краевая проницаемость отсутствует.

Рис. 30. Радиоавтографы, показывающие проникновение изотопа в каналы, запломбированные фосфат-цементом (1), парацином (2), окисью цинка с эвгенолом (3) и цебанитом (4). Экспозиция — 7 дней.

Фргачиц и Книвальд [238] нашли, что аскорбиновая кислота, введенная в слой силикагеля, предохраняет кортикостероиды от окисления при длительной экспозиции, необходимой при применении радиоавтографии. С этой целью пластинки опрыскивают насыщенным раствором аскорбиновой кислоты в абсолютном этаноле. Аскорбиновая кислота гасит флуоресценцию обычно флуоресцирующих слоев, так что для обнаружения разделенных соединений уже нельзя использовать УФ-облучение. [c.332]

Радиоавтография, т. е. наложение рентгеновской пленки на проявленную пластинку, обеспечивает разрешение, сравнимое с разрешением исходной хроматограммы, однако в зависимости от уровня радиоактивности время экспозиции может изменяться от нескольких часов до нескольких дней или даже недель. Количественный анализ осуществляется денситометрированием пятен на проявленной пленке. [c.47]

Рис. 11-21. Схема экспериментов, выявляющих способ движения репликационной вилки во время фазы S. ДНК, синтезируемую в клетках человека in vitro, метили путем кратковременной инкубации клеток с высокорадиоактивным тимидином. В одном варианте опыта (А) клетки лизиро-вали и ДНК адсорбировали на стекле, которое затем покрывали фотоэмульсией. После экспозиции, продолжавшейся несколько месяцев, эмульсию проявляли и наблюдали линию из зерен серебра над радиоактивной ДНК. В другом варианте (Б) после такой же инкубации с меченым тимидином клетки инкубировали без метки, и тогда происходил синтез ДНК со значительно меньшей удельной активностью. Далее препарат обрабатывали так же, как в первом варианте. Тот факт, что следы из зерен серебра были расположены парами, причем два следа каждой пары ослабевали в противоположных направлениях, впервые навел на мысль о движении двух репликационных вилок в разные стороны от общей начальной точки (см. рис. 11-12). Цветные цепи ДНК изображены на схеме только для того, чтобы легче было разобраться в данных радиоавтографии немеченая ДНК Б таких опытах не видна.

Применение радиоактивных изотопов значительно повышает чувствительность аналитических методов и позволяет проводить такие исследования, которые иначе было бы невозможно выполнить. Поэтому было приложено немало усилий, чтобы разработать методы выявления радиоактивных веществ после электрофореза в различных поддерживаюии1Х средах. Чувствительность определения радиоактивности зависит преимущественно от следующих факторов во-первых, от энергии и природы излучения и, во-вторых, от свойств поддерживающей среды. Па-пример, у-лучи легко обнаружить в любой электрофоретической среде, тогда как для обнаружения р-излучателей, особенно Н, и 5, требуется либо тщательная подготовка опыта, если они определяются с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика, либо высокая концентрация этих изотопов или длительное время экспозиции, если применяется радиоавтография. [c.204]

Зоны трансферрина выявляют путем насыщения сыворотки перед электрофорезом ионами 5эреЗ+ ц радиоавтографии полученных электрофореграмм. По методу Гиблетта и др. [433] перед электрофорезом к 1 мл сыворотки добавляют 5 мкКи РеС1з. После электрофореза крахмальные гели разрезают на отдельные фрагменты, которые завертывают в прозрачный материал, помещают на подходящую рентгеновскую пленку и экспонируют в течение 12 ч. При более длительной экспозиции для предотвращения диффузии необходимо замораживать гель и проводить радиоавтографию при глубоком охлаждении. [c.346]

Предположим, изучают ДНК такого размера, как ДНК Е. oli (мол. масса 2 10 ). Ее контур четко определит тысяча точек распада, равномерно распределенных по длине молекулы. Если используют время полураспада которого равно 14 дням, и если экспозиция длится 14 дней, то в молекулу ДНК должно быть включено 2000 атомов Это соответствует удельной радиоактивности 2,5 Ки (ммоль Р) (1 Ки = 2,2 10 расп./мии). Это достаточно высокая плотность излучения. Для приготовления образца культуру Е. соИ выращивают в феде с При этом возникает опасность радиационных нарушений не только в растущей клетке, но и в самой ДНК, в которой могут появиться разрывы. Радиоавтография молекул высших организмов еще более затруднена из-за большей чувствительности к радиации. [c.185]

Эффективность радиоавтографии в выявлении меченных тритием молекул составляет около 5—10%. Нуклеотиды, меченные 1251 JJ 35 обеспечивают более высокую эффективность выявления метки на автографах по сравнению с распадами Н при сохранении адекватного для многих целей разрешения в световом микроскопе (например, для обнаружения генов вирусов и цитоплазматических мРНК). Меченные комплементарные РНК вируса SV40 обеспечивают достаточное количество зерен серебра на автографах после недельной экспозиции, когда с помощью гибридизации выявляется один участок вирусной интеграции на диплоидный набор хромосом [14]. [c.308]

Другие методы выявления гибридизуемых in situ клеточных транскриптов с использованием флуоресцентных или конъюгированных с ферментом зондов обладают рядом преимуществ по сравнению с обычной процедурой радиоавтографического выявления. Эти преимущества заключаются в следующем (I) резко сокращается время, необходимое для определения участка гибридизации из-за отсутствия периода экспозиции радиоавтографов (II) методы выявления флуоресценции обеспечивают более высокое разрешение, чем при использовании радиоавтографов (III) при отказе от радиоавтографии часто удается увеличить отношение сигнал/шум. [c.314]

Высушенные пластинки геля можно хранить под прессом (например, между страницами блокнота), чтобы предотвратить их скручивание для получения радиоавтографов эти пластинки накладывают на медицинскую рентгеновскую пленку (Ко(11гех) и экспонируют время экспозиции лучше всего определять опытным путем. Для электрофореграммы смеси пептидов (50—100 полос) с общей радиоактивностью порядка 50 000 имп/мин обычно нужна экспозиция 24—36 ч. Затем пленку проявляют и закрепляют коммерческими реактивами по инструкции изготовителя. [c.110]

Радиоавтографы электрофореграмм можно представить графически, использовав денситометр с записывающим устройством. Следует выбирать такое время экспозиции, при котором высота пиков на денситограмме линейно зависит от радиоактивности белковых полос. Для количественной оценки радиоавтографов необходим денситометр, снабженный интегратором площади пиков на денситограмме можно также определить либо триангуляцией, либо вырезая отдельные пики и взвешивая их. [c.111]

Б. ДНК бактериофага X после рестрикции дает две полосы, поскольку Kpnl расщепляет клонированную ДНК в двух местах, в результате чего образуется один фрагмент размером 6 т.п.н., содержащий один ген U2, и больший по размеру фрагмент (с правой стороны от клона на рис. 10-21), который также несет одну копию гена U2. Дробление любого тандемного повтора приведет к образованию так называемых соединяющих фрагментов из концов областей повторов. В этих экспериментах виден лишь один из соединяющих фрагментов, так как ген U2 используется в качестве зонда. При анализе продуктов рестрикции всего генома соединяющий фрагмент не виден, так как его слишком мало-на один соединяющий фрагмент приходится много внутренних фрагментов. Выявлению соединяющего фрагмента может способствовать более длительная экспозиция радиоавтографа. [c.427]

Пкспозиция листьев в каморах с углекислотой продолжалась в течепие 20 мин, затем через определенные промежутки времени после окончания экспозиции растеиия извлекали с корнем из вазонов и использовали для получения радиоавтографов. [c.85]

При написании этого раздела намеренно не упоминался тип используемой метки, поскольку он может быть разным, но принципиальной разницы на этапе мечения не существует. Обычно при секвенировании фрагментов ДНК методом химической деградации в качестве радионуклида используется 32р ввиду его более высокой энергии. Использование имеющих меньшую энергию радионуклидов ззр и 35s также возможно, но при этом время экспозиции сильно увеличивается. При секвенировании фрагментов ДНК методом химической деградации применяются также и хемилюминесцентные, и флуоресцентные метки, но при этом требуется проведение несколько других (более сложных) процедур для выявления полос ДНК, чем простая радиоавтография на рентгеновскую пленку [Voss et al., 1989]. [c.24]

Смотреть страницы где упоминается термин Радиоавтография экспозиция: [c.243] [c.243] [c.250] [c.221] [c.37] [c.72] [c.159] [c.56] [c.353] [c.45] [c.45] [c.306] [c.310] [c.30] [c.286] [c.286] [c.116] [c.98] [c.101] [c.194] [c.196]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология