Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Эндонуклеазы рестриктазы

    Расщепление нуклеиновых кислот под влклнием специфических ферментов — эндо- и экзонуклеаз — сопровождается разрывом фосфо-диэфирной связи и образованием продуктов различной величины, которые могут быть разделены методами электрофореза и хроматографии. Это широко используется при анализе последовательности нуклеотидов в молекулах РНК и ДНК., Особое значение при развитии генной инженерии получило расщепление ДНК специфическими эндонуклеазами (рестриктазами), позволяющее получать отрезки ДНК определенной длины и нуклеотидного состава. > [c.175]


    Известно три основных типа ферментов рестрикции. Рестрицирующие эндонуклеазы (рестриктазы) первого типа узнают определенную последовательность нуклеотидов и разрезают двухцепочечную молекулу ДНК неподалеку от этой последовательности, но само место разреза не строго специфично. Эндонуклеазы рестрикции второго типа узнают определенную последовательность и разрезают двойную спираль в определенной фиксированной точке внутри этой последовательности. Эндонуклеазы рестрикции третьего типа узнают нужную последовательность и разрезают двойную спираль, отступив определенное число нуклеотидных пар от ее конца. Мы в основном сосредоточимся на обсуждении свойств эндонуклеаз второго типа, поскольку именно они позволяют, во-первых, получать препараты ДНК, содержащие фрагменты с одинаковыми последовательностями нуклеотидов и, во-вторых, конструировать химерные молекулы ДНК, состоящие из фрагментов, взятых из разных геномов. [c.267]

Рис. 4.60. Обнаружение глобинового гена. ДНК выделяют из любого препарата клеточных ядер, в ее составе имеются глобиновые гены. Различные рестрикционные эндонуклеазы (рестриктазы) расщепляют ДНК на множество фрагментов (рестриктов), узнавая специфические последовательности нуклеотидов. Фрагменты разделяют по размеру с помощью гель-электрофореза. Готовят специфический радиоактивный зонд на глобиновый ген и гибридизуют его с фрагментами ДНК Радиоактивный сигнал обнаруживают с помощью радиоавтографии [1252]. Рис. 4.60. <a href="/info/1354273">Обнаружение глобинового</a> гена. ДНК выделяют из любого <a href="/info/1396389">препарата клеточных</a> ядер, в ее составе имеются <a href="/info/1324277">глобиновые гены</a>. Различные <a href="/info/1280832">рестрикционные эндонуклеазы</a> (рестриктазы) расщепляют ДНК на множество фрагментов (рестриктов), узнавая <a href="/info/33265">специфические последовательности</a> нуклеотидов. Фрагменты разделяют по размеру с <a href="/info/213921">помощью гель</a>-электрофореза. Готовят специфический <a href="/info/10666">радиоактивный зонд</a> на глобиновый ген и гибридизуют его с фрагментами ДНК Радиоактивный сигнал обнаруживают с помощью радиоавтографии [1252].
    Рестриктазы. Отдельную группу, особенно с утилитарной точки зрения ее применения в генной инженерии, представляют специфические эндонуклеазы — рестриктазы. [c.25]

    Механизмом, предотвращающим смешивание генетического материала прокариот разных видов, служат процессы рестрикции и модификации ДНК, осуществляемые соответствующими ферментами. Рестрикционные эндонуклеазы (рестриктазы) расщепляют проникшую в клетку чужеродную ДНК. Они распознают специфические нуклеотидные последовательности и разрезают по ним или рядом с ними двухцепочечные молекулы ДНК. Модифицирующие метилазы клетки обеспечивают метилирование оснований своей ДНК в участках, чувствительных к рестриктазам. Модифицированные таким путем участки становятся устойчивыми к действию рестриктаз. (В противном случае молекула ДНК расщеплялась бы собственными рестриктазами.) Таким образом, процессы модификации и рестрикции обеспечивают защиту собственной ДНК от проникшего в клетку чужеродного генетического материала. [c.133]


    Корректорская правка - удаление неправильных (образующих некомплементарные пары) оснований, образование недостающих оснований или соединение цепей в молекуле ДНК в случае их разрыва. Коррекцию осуществляют ферменты репарации экзо- и эндонуклеазы, рестриктазы и лигазы. Все это обеспечивает высокую точность репликации возможна од- [c.55]

    В генетической инженерии с целью получения белков в достаточных количествах и с заданными свойствами (например, для генотерапии наследственных и соматических болезней) широкое применение получили эндонуклеазы рестриктазы, катализирующие расщепление молекулы двухцепочечной ДНК по специфическим нуклеотидным последовательностям внутри цепи. Рестриктазы узнают определенные 4-7-членные последовательности, вызывая, таким образом, разрывы в определенных сайтах цепи ДНК. При этом образуются не случайные последовательности, а фрагменты ДНК строго определенной структуры с липкими концами (рекомбинантные ДНК), используемые далее для конструирования гибридных молекул и получения генно-инженерной, биотехнологической продукции (например, инсулина, гормона роста, интерферона, вакцин против вируса гепатита В, СПИДа и др.). [c.481]

    В основе метода, позволившего непосредственно приступить к манипуляциям с генами, лежит открытие ферментов, названных рестрикционными эндонуклеазами (рестриктазами). Еще в 1953 г. было обнаружено, что ДНК определенного штамма Е. соИ, введенная в клетки другого штамма (например, ДНК штамма В в клетки штамма С), не проявляет, как правило, генетической активности, так как быстро расщепляется на фрагменты ДНК-специфическими ферментами — рестриктазами. К настоящему времени из разных микроорганизмов выделено более тысячи различных рестриктаз. В генетической инженерии наиболее широко используются около 200. [c.25]

    История открытия ферментов рестрикции, детальная характеристика их биологической роли, энзиматических и структурных особенностей детально рассмотрена в большом количестве обзоров [49, 58, 59, 62, 263, 309, 417]. Учитывая направленность настоящего обзора на рассмотрение одного из известных типов рестриктаз, в этом его разделе ограничимся лишь описанием некоторых общих вопросов, призванных в первую очередь определить место специфических эндонуклеаз (рестриктаз II типа) среди других обсуждаемых ферментов. [c.6]

    Первые наблюдения. Заражая фагом X различные штаммы Е. соН, Арбер [296] обнаружил, что ДНК этого фага при пассаже через бактерию разрезается и теряет свою инфекционность. Оказалось, что ни классические рекомбинационные процессы, ни мутации в этом не участвуют. Более того такая судьба постигала не только фаговую но и любую чужеродную ДНК, попадаю щую в бактерию. Такое разрезание (реет рикцию) следует рассматривать как защит ный механизм клетки. Как было показано в дальнейшем, рестрикция чужеродной ДНК осуществляется ферментами, называемыми рестрикционными эндонуклеазами (рестриктазами). Встает вопрос, почему ре-стриктазы не разрезают ДНК собственной клетки. Ответ был найден Арбером и состоял в следующем. Эти ферменты вступа- [c.123]

    Используйте ДНК, очищенную, как описано в разд. 2.2.1.1, и разводите ее только непосредственно перед каждым использованием. Отберите 180 мкл и добавьте 20 мкл соответствующего 10-кратного рабочего буферного раствора рестриктирующей эндонуклеазы (рестриктазы) и тщательно перемешайте. [c.44]

    Представление о том, что носителем генетич. информации является ДНК, возникло еще в 1944. Было известно также, что ген представляет собой отрезок ДНК, кодирующий определенный белок, и что передача наследств. ин(]юр-мации между поколениями происходит посредством удвоения молекул ДНК. Но любым манипуляциям препятствовала огромная молекулярная масса ДНК, составляющая миллионы и миллиарды иа клетку, и невозможность получать химически однородные небольшие ее фрагменты. Положение изменилось, когда удалось обнаружить и выделить два рода ферментов 1) рестриктирующие эндонуклеазы (рестриктазы)-они рассекают молекулы ДНК в пределах строго определенных нуклеотидных последовательностей их описано ок. 400, наиб, употребительны рестриктазы E o RI, Hind III, Bam HI, Pst I, Sal I и др. 2) ДНК-лигазы (прежде всего фермент кишечной палочки, индуцируемый бактериофагом Т4), к-рые сшивают двухцепочечные фрагменты ДНК, восстанавливая межнуклеотндные связи в местак единичных разрывов. С помощью этих ферментов получают удобные для генетич. операций фрагменты ДНК и соединяют их в единое целое. Для такого объединения безразлично происхождение ДНК (химически у всех существ она одинакова), между тем в природе объединению генетич. информации неродственных существ препятствуют разл. межвидовые барьеры. [c.518]

Рис. 36.2. Расщепление ДНК рестрицирующими эндонуклеазами (рестриктазами). В результате рестрикции образуются Рис. 36.2. Расщепление ДНК <a href="/info/200438">рестрицирующими эндонуклеазами</a> (рестриктазами). В результате рестрикции образуются
    К наиболее важным ферментам, применяющимся в генетической инженерии, относятся специфические эндонуклеазы — рестриктазы, с помощью которых получают фрагменты ДНК воспроизводимого состава и длины, а также ДНК-лигазы, объединяющие эти фрагменты. Широко применяются также различные ДНК-полимеразы, ведущие матричный синтез ДНК. Среди них уникальный фермент — обратная транскриптаза, которая синтезирует копии генов, используя в качестве матрицы их мРНК. [c.163]


    Рестрикция (разрезание) выделенной из клеток ДНК осуществляется ферментами — рестрикционными эндонуклеазами (рестриктазами). Эти ферменты вступают в реакцию с определенными участками ДНК, так называемыми сайтами узнавания, которые в клетке обычно бывают защищены специальными группировками (метилированы). После обработки ДНК эндонуклеазами фрагменты имеют так называемые липкие концы рестрик-тазы разрезают две цепи ДНК не в одном месте, а в двух разных местах, в результате чего одна из цепей оказывается длиннее другой на несколько нуклеотидов. Свободные нуклеотиды мо1ут спариваться с комплементарны.ми нуклеотидами другого фрагмента ДНК с липкими концами. Благодаря этому, ДНК из различных источников может объединяться, образуя рекомбинантные молекулы. Это свойство рестрикционных фрагментов ДНК ис-нoль yeт( я в генной инженерии для со 1дания искусственных векторов на основе бактериальных плазмид, или фагов. [c.67]


Смотреть страницы где упоминается термин Эндонуклеазы рестриктазы: [c.14]    [c.50]    [c.451]    [c.190]    [c.92]    [c.99]    [c.92]    [c.151]   
Биологическая химия Изд.3 (1998) -- [ c.481 ]

Биохимия (2004) -- [ c.424 , c.500 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Эндонуклеаза эндонуклеазы



© 2024 chem21.info Реклама на сайте