Селекция клонов

Генетическая селекция клонов [c.82]

После 1960 г. многие затруднения, встающие на пути биохимиков при использовании этого метода, были устранены в результате трех событий. Наиболее важную роль сыграл, возможно, тот факт, что промышленные компании взяли на себя поставку культуральных сред, сывороток, клеток и посуды для культивирования, что позволило выращивать клетки эпизодически или постоянно на самой различной поверхности — от менее одного квадратного сантиметра до нескольких квадратных метров. Это стало возможным только потому, что, с одной стороны, были созданы простые среды, обеспечивающие хороший рост клеток, а с другой — разработаны простые методы выделения первичных клеток, селекции клонов и хранения клеточных линий. [c.7]

Генетические способы отбора требуют значительно меньших затрат труда, чем методы скрининга, что позволило разработать новые подходы, позволяющие проводить генетическую селекцию клонов, содержащих последовательности, гомологичные любой желаемой последовательности-зонду. Это дало возможность расширить применение этого метода, распространив его на задачи, обычно решаемые с помощью более трудоемких (и часто менее специфичных) методов скрининга. В общих чертах в основе всех этих подходов лежит следующее обстоятельство хотя в случае большинства специфических эукариотических последовательностей нельзя обеспечить генетическую селекцию в клетках Е. соИ, можно сконструировать пары векторов, позволяющие селектировать продукты гомологичной рекомбинации, обусловленной гомологией последовательностей между клонами. Такая селекция основана на том факте, что процессы, подобные репликации ДНК, транскрипции, мобилизации плазмид или упаковке ДНК в фаговые частицы, могут происходить только по is-схеме в отношении соответствующего регуляторного элемента (области начала репликации, промотора, сигнала мобилизации или упаковки). Чтобы исключить рекомбинацию между векторными последовательностями, нужно подбирать векторные пары, не обладающие взаимной гомологией (или в случае рекомбинации фагов без взаимной гомологии в пределах той области, которая определяется маркерами, используемыми для селекции). Соблюдение этого главного принципа лежит в основе и скрининга фаговых клонов с использованием рекомбинации между [c.77]

Лучше всего, если селективный маркер является одновременно и маркером амплификации, поскольку при трансфекции ДНК часто подвергается перестройкам и мутациям, из-за которых не все клоны, экспрессирующие селективный маркер, будут экспрессировать и маркер амплификации. Амплифицируемый ген может служить основой для селекции клонов в том случае, если [c.241]

Развитием идеи Белла о различии антител по величине связи с антигеном служат работы Бруни с соавторами (см., например, [29]), где вместо численностей популяций лимфоцитов в уравнения входят плотности их распределения по константам связи к. Эти модели хорошо описывают времени селекцию клонов увеличение авидности в течение иммунного ответа. [c.118]

Антитела других изотипов (IgG, IgA, IgE), имея меньший молекулярный вес и соответствующие молекулярные механизмы взаимодействия с эпителиальными клетками (см. ниже), значительно легче преодолевают клеточные барьеры и достаточно широко распространяются по организму из мест синтеза. Другой отличительной чертой антител этих изотипов является их большая по сравнению с IgM аффинность. Как отмечалось выше, два процесса — переключение внутриклеточного синтеза иммуноглобулинов с одного изотипа на другой и селекция клонов по признаку наибольшего сродства к антигену — требуют времени, но при этом потеря времени компенсируется у рассматриваемых изотипов повышением аффинности и проницаемости через эпителий, что говорит об их большей функциональной активности. [c.254]

Отбор бактерий-трансформантов можно продемонстрировать, используя плазмиду pBR322 (см. рис. 5.10), содержащую два гена устойчивости к тетрациклину и ампициллину. Для отбора этих бактерий в агар добавляют антибиотик — или ампициллин, или тетрациклин в зависимости от того, какой из генов (Ыа или tet) остался интактным после введения чужеродной ДНК. На такой среде клоны образуют клетки только с плазмидами. Для отделения рекомбинантных бактерий часть материала каждого клона переносят на другую чашку Петри, содержащую антибиотик, ген устойчивости к которому был разрушен при создании рекомбинантов. На этих чашках Петри дают клоны только те бактерии, которые содержат исходную плазмиду, а рекомбинантные бактерии их не образуют. Такая тщательная селекция клонов по устойчивости к антибиотику позволяет идентифицировать рекомбинантные клоны. При поиске рекомбинантных клонов успешно применяют метод авторадиографии. [c.121]

Одно из существенных свойств тимуса амфибий состоит в его способности осуществлять положительную селекцию клонов тимоцитов, распознающих чужеродный антиген в комплексе с собственными антигенами главного комплекса гистосовместимости. Эта ситуация гомологична той, которая известна для млекопитающих. [c.424]

Не следует рассчитывать, что, прибегая только к методам случайного перебора, удастся составить полную карту. В некоторых случая-х может оказаться необходимым прибегнуть к предварительной селекции клонов. В зависимости от особенностей рассматриваемого случая отобранные после этой процедуры клоны могут быть как идентичными, так и отличными от клонов в исходном банке. [c.50]

Современные теории антителообразования подразделяют на три группы I) инструктивные — теории прямой и непрямой матрицы 2) селекционные — теории непрямого отбора и селекции клонов антителообразующих клеток и 3) дерепрессии генов, , [c.49]

Теория Разработанная Ф. Бернетом в 1959 г. теория селекции клонов [c.50]

Объяснение полученных данных строится на том представлении, что в процессе примирования происходит селекция клона Т- [c.172]

Эксплантаты Т — въфащеиный в теплице материал, С — стерильные проростки, Р — размножаемые растения. К.К — селекция клонов трансформированых клеток путем роста косматых корней =) [40] [71 ) [77] [06] ) 149] Ц [I7I ) [69] Аномальный фенотип [c.188]

Культуру клеток в полужидкой или вязкой среде широко используют для селекции клонов, подсчета потомства специфически реагирующих клеток и изучения механизмов, контролирующих пролиферацию и дифференцировку клеток. При различных вариантах метода в качестве поддерживающей среды применяют свернутую плазму (M Leod et al., 1974), агаровый гель или раствор метилцеллюлозы. В этой главе будут описаны экспериментальные методики, в которых используются агар и метилцеллюлоза. [c.391]

Сушносгь теории селекции клонов в формулировке Бёрнета состоит в следующем Ни один участок связывания антигена не адаптирован в эволюционном смысле в какой-либо определенной антигенной детерминанте. Структура участка, связывающего антиген, сушествует как таковая, и если она оказывается подходящей в том смысле, что сродство к данной антигенной детерминанте превышает какой-то определенный уровень, то инициируется иммунологически значимая реакция. Отбор предсу шествующих вариантов, возникающих случайным образом,- это не [c.257]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология