спектры ренатурация

Рис. 9.5. На рисунке в виде спектра изображена частота последовательностей ДНК мыши с различной повторностью. Число копий каждого типа последовательности оценивали по кинетике ренатурации ДНК мыши.

Относительно быстрая реставрация структуры ферментов по сравнению с медленным восстановлением их биологической активности показывает, что промежуточные конформационные состояния образуются в заметных концентрациях. Тот факт, что полученные на разных стадиях ренатурации спектры ДОВ и спектры флуоресценции не имеют изосбестической точки, совпадающей с пересечением спектральных кривых состояний N и О, свидетельствует о том, что все промежуточные состояния одновременно присутствуют в растворе и находятся в равновесии. Условия окружения, а именно наличие или отсутствие специфических субстратов или кофакторов, их концентрация, значения pH раствора, ионной силы и концентрация белка, существенно влияют на скорость пространственной организации молекулы и на ее биологическую активность. Анализ полученных данных привел авторов к выводу, что свертывание фумаразы, энолазы и альдолазы определяется прежде всего термодинамическими факторами, а у трех других белков существенно влияние также кинетических факторов. У предста- [c.354]

С. Шаффер [87], исследуя процесс ренатурации рибонуклеазы с помощью 8-8-глутатиона, обнаружил, что образование моно- и ди-8-З продуктов практически не сказывается на кривых кругового дихроизма, при последующем появлении и накоплении продуктов с большим числом дисульфидных связей они приближаются к спектру нативного белка. В связи с тем, что в данном случае изменения в спектрах кругового дихроизма, как и в случае изменений поглощения и флуоресценции, отмеченных Р. Хантгеном и соавт. [81], происходили раньше восстановления ферментативной активности рибонуклеазы, то, как полагает Крейтон, они связаны главным образом с формированием у три- и тетра-8-8-производных вторичных структур и гидрофобного окружения у ароматических остатков, а не с завершением образования нативной конформации. С. Шаффер и соавт. [88] исследовали влияние среды на скорость свертывания белковой цепи рибонуклеазы с использованием окисленного и восстановленного глутатиона. Обнаружено, что действие нейтральных солей на скорость ренатурации [c.377]

Были сняты также спектры ЯМР водных растворов белка при кислых pH (pH 3,3). Эта методика позволяет достичь хорошего разрешения линий, отвечающих протонам NH-rpynn индола. При таких pH обмен атомов водорода этих групп с HjO происходит достаточно медленно, чтобы можно было четко зарегистрировать соответствующие линии. На рис. 21.17 приведены спектры ЯМР в области как слабых, так и сильных полей, снятые 1фи температурах от 56 до 73° С. Спектры, полученные при 73° С, характерны для денатурированного состояния всем шести остаткам триптофана отвечает единственный пик при 2190 Гц. В ходе ренатурации происходит расщепление этой линии на шесть линий единичной интенсивности. На рис. 21.17 видны пять линий, расположенных в области 2200 — 2400 Гц, а шестая линия, очевидно, сдвинута в область, где расположены линии от протонов амидных групп (примерно от 1700 до 2140 Гп). Это расщепление отражает неэквивалентность окружения индольных групп в нативной структуре. [c.232]

КД спектры нативной ДНК в 0,01 М Na l и в 0,5 М Na l отличаются мало. После кипячения ДНК (для ее денатурации) сила вращения существенно уменьшается. В каком растворителе уменьшение будет больше Поясните. (Возможность ренатурации исключить.) [c.480]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология