Нуклеиновая кислота для осаждения белков

Распределение ДНК и РНК во фракциях, а также соотношения ДНК РНК и ДНК остаточный белок во фракциях резко отклоняются от нормы как непосредственно досле облучения, так и в последующие дни. При определенных условиях сразу после облучения обнаруживается уменьшение ДНК и РНК во фрак ции I и увеличение их во фракции II. Относительное количество РНК и остаточного белка по сравнению с количеством ДНК во фракции II тотчас после облучения уменьшается по сравнению с нормой примерно в два раза при дозе 2000 р. Полученные данные свидетельствуют о пониженной полимерности ДНК и РНК уже сразу после облучения in vivo. Непосредственно после локального облучения конечности животного дозой 2000 р отношения аденин цитозин и гуанин цитозин увеличиваются в ДНК фракции II облученного костного мозга на 40—41 % по сравнению с нормой. Изменения в составе оснований ДНК фракции II отмечены и сразу после локального облучения дозой 200 р. Через одни — шесть суток после облучения полимерность ДНК особенно сильно снижается, а относительное количество РНК и белка в нефракционированных препаратах нуклеиновых кислот по сравнению с нормой увеличивается. На основании полученных данных можно прийти, к заключению, что нарушение комплексов биополимеров весьма существенно для лучевого поражения организма. Разработанные нами методы фракционированного осаждения нуклеиновых кислот позволяют обнаружить их изменения сразу после облучения in vivo более отчетливо, чем ранее, применявшиеся методы. [c.54]

Не меньшей популярностью пользуется в настоящее время и метод электрофореза в полиакриламидном геле. Добавляя к раствору акриламида, налитому в стеклянные трубки, различные количества мономеров (например, метиленбисакриламид, этилендиакрилат), образующих в процессе полимеризации поперечные сшивки, можно получить гели с различной степенью связанности [137, 404]. Устойчивость к денатурирующим растворителям, например к 8 М раствору мочевины или 1 %-ному раствору додецилсульфата натрия, составляет еще одно важное преимущество этих гелей. При наложении разности потенциалов белки, пептиды, нуклеиновые кислоты и вирусы передвигаются в этих гелях на характерные расстояния, которые зависят главным образом от их молекулярного веса (или веса частицы), а также от степени связанности сшивок геля. Разделившиеся вещества образуют характерные полосы, которые можно выявить либо с помощью методов окрашивания или локального осаждения, либо (в случае разделения радиоактивных веществ) с помощью метода радиоавтографии (см. гл. XI, разд. Б). Разрешающая способность электрофореза в полиакриламидном геле такова, что с помощью этого метода можно обнаружить и идентифицировать приблизительно 37 видов рибосомных белков [508]. То, что разделение белка на многочисленные полосы происходит в силу действительного различия между белками, а не в результате каких-то артефактов, теперь уже не вызывает солшений. Однако известно, что разделяться на отдельные полосы могут не обязательно совершенно различные вещества, но и такие близкие между собой вещества, как, например, один и тот же белок, у которого часть молекул содержит одну лишнюю амидную (— СО — NH2 С00 ) группу, а другая часть — ацетильную (—NH+— NH — СОСН3) группу [136]. С помощью электрофореза в полиакриламидном геле [c.61]

После удаления нуклеиновых кислот в растворе могут остаться капсульные камедеподобные углеводы. Это создает трудности при использовании обычных методов осаждения белков. В присутствии этих веществ невозможно применение сульфата аммония и других методов фракционного осаждения. Лучше полностью осадить белок в надежде, что камедеподобные вещества останутся в растворе. Практически весь белок можно осадить при 80%-ном насыщении сульфатом аммония (разд. 3.3) или 55%-ной концентрации ацетона (разд. 3.4). В случае использования сульфата аммония для осаждения белка может понадобиться скоростное центрифугирование. Но даже после этого растворенный белковый осадок содержит вещества, снижающие воспроизводимость результатов при работе на колонке или при использовании других методов фракционирования. [c.50]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология