Центрифугирование скоростное

В седиментационном анализе можно проводить два типа экспериментов. При анализе методом скоростной седиментации проводят определения скорости оседания и диффузии частиц при бioльшиx скоростях вращения ротора, тогда как при анализе методом седиментационного равновесия выжидают установления равновесия между процессами седиментации и диффузии в процессе центрифугирования при меньших скоростях вращения ротора. Теоретически неоднородность распределения по молекулярным весам в образце можно охарактеризовать с помощью обоих указанных методов, получая методом скоростной седиментации распределение по коэффициентам седиментации, а методом седиментационного равновесия — распределение по молекулярным весам. Распределение по молекулярным весам легче интерпретировать хими-ку-полимерщику, не имеющему специальной подготовки. Было показано, что детализированный характер распределения по коэффициентам седиментации можно получить методом скоростной седиментации в отсутствие дополнительных предположений о форме кривой распределения. Такие дополнительные предположения, как правило, необходимы при анализе методом седиментационного равновесия. Скоростное ультрацентрифугирование приобрело, следовательно, наиболее широкое распространение при исследовании неоднородности распределения но молекулярным весам полученные этим методом данные обычно комбинируют с результатами других измерений, преобразуя кривую распределения по коэффициентам седиментации в кривую распределения по мол екулярным весам, в ряде случаев более подходящую для целей исследования. Метод седиментационного равновесия применяется в основном в качестве способа определения абсолютных величин средних молекулярных весов, но применение этого метода для растворов в смешанных растворителях ультрацентрифугирование в градиенте плотности), как недавно было показано, позволяет оценить распределение полимера по плотности. [c.216]

Характеристика работ. Ведение процесса осветления (отбеливания) загрязненных жидкостей или твердых продуктов, разделения плохо фильтрующихся неоднородных смесей с небольшим содержанием твердой фазы или отделения жидкости от твердых продуктов при помощи центробежных сил на осадительных (отстойных) скоростных или сверхскоростных центрифугах периодического или непрерывного действия с автоматической, механизированной и ручной выгрузкой (ножевой или скребковый съем, шнековая или пульсирующая выгрузка). Загрузка, промывка, пропаривание или выгрузка под действием центробежной силы. Регулирование по показаниям контрольно-измерительных приборов загрузки продукта и подачи воды по количеству уровня, удельному весу выгрузки измельченного или промытого осадка. Уплотнение продукта с выжиманием. Наладка центрифуг ка заданный режим. Пуск и остановка центрифуги, насосов и транспортирующих устройств. Промывка отжатых осадков. Проведение контрольных анализов определения окончания процесса центрифугирования. Руководство аппаратчиками 2 разряда (при их наличии). [c.123]

Аналитическое ультрацентрифугирование полимеров [1, 2, 4, 12] включает в себя три следующих экспериментальных метода скоростную седиментацию, изучение седиментационного равновесия и процесса приближения к нему. Скоростная седиментация позволяет определить константу седиментации и полидисперсность образца. Седиментация макромолекул в зоне (зонное ультрацентрифугирование) — ценный метод обнаружения гетерогенности высокомолекулярного образца. Метод приближения к равновесию позволяет рассчитать молекулярную массу М и получить сведения о неоднородности полимера, а изучение седиментационного равновесия (состояния, достигаемого транспортным переносом макромолекул, хотя сам метод и не является истинно транспортным) — молекулярную массу (надежнее, но с большей затратой времени, чем в предыдущем методе) различных типов усреднения. Метод центрифугирования в градиенте плотности заключается в исследовании седиментации, состояния равновесия и приближения к нему в условиях искусственно создаваемого в кювете градиента плотности это — широко используемый метод определения молекулярной массы, наличия неоднородности и ее типа, служащий и для препаративных разделительных целей. [c.14]

Седиментационный анализ включает следующие три основных экспериментальных метода скоростную С., изучение седиментационного равновесия и процесса приближения к равновесию. Скоростная С. позволяет определить константу С. полимера и полидисперсность образца изучение седиментационного равновесия — мол. массу различных типов усреднения изучение приближения к равновесию — мол. массу (менее надежно, но и с меньшей затратой времени, чем в предыдущем методе) и неоднородность состава полимера. Процесс С., состояние равновесия и приближение к нему м. б. исследованы также в условиях искусственно создаваемого в кювете градиента плотности центрифугирование в градиенте плотности — важный метод определения мол. массы, наличия неоднородности и ее типа служит также для разделения. [c.198]

Пути происхождения атомов азота, занимающих в пуриновом кольце положения 1, 3 и 9, были установлены в отдельной серии экспериментов [6]. Еще в 1936 г. было обнаружено [7], что в срезах печени голубя из соответствующих предшественников может синтезироваться гипоксантин (мочевая кислота не образуется из-за отсутствия в этой ткани ксантиноксидазы). Синтез гипоксантина может быть осуществлен также в гомогенате из печени голубя [8] и в надосадочной жидкости, полученной в результате скоростного центрифугирования гомогенатов [9]. [c.168]

До недавнего времени наиболее надежным средством разделения белков с разными молекулярными весами являлось скоростное центрифугирование в ультрацентрифугах, применявшееся как для определения констант седиментации (осаждения) белка в аналитических исследованиях, так и для препаративного получения некоторых белков. [c.55]

После работы сефадекс можно отмыть от белков, подключив колонку к сосуду Мариотта. Чтобы не загрязнять сефадекс микро-сомами и митохондриями, присутствующими в экстракте, желательно перед хроматографией подвергнуть экстракт скоростному центрифугированию для освобождения от этих компонентов. [c.58]

В среднем имеется всего около 80 мононуклеотидов), их можно отделить друг от друга посредством скоростного центрифугирования. [c.75]

ВЫБОР РОТОРОВ И МЕТОДОВ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ Незональный скоростной метод [c.189]

Роторы с 4 и 6 подвесными стаканами, оптимальное разрешение, разделение более широких пиков при скоростном зональном центрифугировании [c.192]

Некоторые ферменты, находящиеся в растворенном виде в желудочном и кишечном соке, в сыворотке крови и в других жидкостях тела, представляют собой типичные глобулины, растворимые в разведенных растворах нейтральных солей. Подобные же ферменты, находящиеся в клетках, могут быть экстрагированы при помощи тех же методов, какими экстрагируются другие растворимые клеточные белки. При кратковременном скоростном центрифугировании можно удалить из этих мутных экстрактов митохондрии или другие клеточные гранулы, содержащие некоторые ферменты. Другие ферменты содержатся [c.274]

Фракционирование полиэтилена можно проводить также методом скоростного центрифугирования. При этом также удаляются частицы геля и высокомолекулярная фракция [43]. [c.396]

Великие достижения физики XX столетия с успехом использованы для совершенствования микроскопической и микротом-ной техники. Широкое внедрение электронной и фазовоконтрастной микроскопии, методов получения ультратонких срезов, методов скоростного центрифугирования позволило приступить к изучению тонкого строения всех составляющих клетку структурных элементов, к выяснению характера участия последних в жизнедеятельности клетки. [c.19]

В используемых в настоящее время методах [60] применяется и ряд других предосторожностей, например гомогенизация ткани проводится в глициновом буфере (pH 10,4) с хлороформом при 2—4°. Обработка для освобождения от белка применяется повторно и проводится, как и скоростное центрифугирование, при низкой температуре. Конечной стадией очистки является осаждение этанолом. [c.186]

Существуют два варианта этого метода. В первом проводят зонально-скоростное центрифугирование, при этом используют градиент с небольшим диапазоном концентраций. Его функция состоит главным образом в предотвращении перемешивания фракций при центрифугировании вследствие конвекции. Нанесенный на градиентный раствор гомогенат или грубую фракцию мембран центрифугируют непродолжительное время. Частицы распределяются в соответствии со скоростями их седиментации. При достаточно большом времени центрифугирования все фракции поочередно осаждаются на дно пробирки. [c.66]

Скоростное центрифугирование. Для выделения и изучения частиц, входящих в состав цитоплазмы, применяют метод скоростного центрифугирования. Он основан на различной скорости осаждения частиц из раствора при сильном его вращении. Измельченные клетки в растворе сахарозы при температуре 0°С помещают в скоростные центрифуги, в которых достигается очень большая скорость вращения — до 40 тыс. и более оборотов в минуту. При небольших скоростях центрифугирования осаждаются, так самые тяжелые, клеточные ядра при увеличении скорости отделяются митохондрии — частицы, которые едва заметны в световом микроскопе при еще больших скоростях осаждаются частицы, невидимые в обычных микроскопах,— рибосомы и полисомы при самых больших скоростях выделяются содержащиеся в цитоплазме белки и остается однородная вязкая жидкость — гиалоплазма. [c.18]

Особенно ценные результаты дало объединение методов скоростного центрифугирования и авторадиографии. Передвижение и [c.18]

Благодаря использованию метода скоростного центрифугирования удалось установить химический состав хромосом. Для этого из них выделяют хроматин. Очищенный хроматин имеет химический состав и свойства, характерные для хромосом. Химический анализ показал, что хроматин состоит из ДНК, РНК и сопутствующих им белков. Основную массу белков составляют гистоны — [c.30]

Осветленный и концентрированный вирус еще недостаточно чист для большинства биохимических и биофизических исследований. Дополнительной очистки достигают зональным (скоростным) или равновесным (изопикническим) центрифугированием. Теоретические и практические аспекты центрифугирования детально изложены в другом руководстве [7]. Для вирусов растений можно использовать следующие методы дополнительной очистки. [c.16]

Зональное (скоростное] центрифугирование [c.16]

Система порционной подачи растворителя была осуш ествлена на депарафинпзационных установках Новокуйбышевского НПЗ А. Е. Альтшуллером, Е. М. Варшавером и Г. И. Ястребовым совместно с М. Г. Митрофановым и дала положительный эффект [8]. Лабораторные исследования системы порционной подачи растворителя применительно к условиям депарафинизационных установок восточных заводов выполнены во ВНИИ НП [9]. На процессе кристаллизации парафина весьма отрицательно сказывается присутствие в сырье механических загрязнений и коллоидных примесей. Они вызывают появление большого числа центров кристаллизации парафина. Проведенные нами исследования и наблюдения показали, что удаление этих примесей и загрязнений значительно улучшает кристаллическую структуру продуктов и повышает их фильтруемость. Примеси можно удалять отстоем, скоростным центрифугированием, электроосаждением, тонкой фильтрацией и другими средствами. [c.116]

Дефекты, возникающие при центрифугировании, можно обычно определить по тому, что они распределены радиально. Случайные дефекты бывают вызваны изменениями температурного и скоростного режима нанесения раствора, а также работой дозирующего и отсасывающего устройств. При. ганесении слоя резиста частицы из воздуха легко налипают на его поверхность. Центрифугирование следует проводить в абсолютно чистом помещении с совершенной системой фильтрования воздуха. Точность поддержания температуры нанесения должна быть прн этом 1°С. С этой целью подложку и раствор резиста перед нанесением следует [c.20]

Коллоидный плутоний (IV) существует в виде катионных агрегатов гидроокиси или градратированной окиси, состоящих из частиц большого молекулярного веса с небольшим положительным зарядом. Для осаждения плутония из таких полимеров осадителем типа оксалата, иодата, фосфата достаточно лишь 0,15 эквивалента осадителя. Это свидетельствует о небольшом числе остаточных зарядов в коллоидных агрегатах. Полимер, осажденный из солянокислого раствора, может быть легче отмыт от хлорид-ионов, которые, следовательно, не входят в решетку полимера. Связи в полимере осуществляются главным образом кислородными и гидроксильными мостиками. Определение молекулярного веса полимеров методом скоростного центрифугирования дает значение порядка сотен тысяч и даже миллионов. Коллоидная природа полимеров проявляется в сильной адсорбции их на стекле, бумаге, вате, по-ьирхность которых в воде обладает отрицательным зарядом. [c.336]

Молекулярный вес образца может быть определен по одновременному измерению скорости седиментации в очень больших полях центробежной силы и коэффициента диффузии полимера в растворе. Ультрацентрифугирование нашло широкое применение при определении молекулярных весов таких компактных макромолекул, какими являются белки. Для статистических клубков применение метода скоростной седиментации осложняется тем, что при конечной концентрации раствора макромолекулы, перекры-ваясь, оказывают взаимное влияние друг на друга при седиментации. Это затрудняет интерпретацию экспериментальных данных. Средневесовой молекулярный вес полимеров, макромолекулы которых представляют собой статистические клубки, обычно определяют методами равновесного центрифугирования или методом Арчибальда. Однако для определения молекулярных весов кристаллических полиолефинов метод ультрацентрифугирования не применялся быстрый и удобный метод скоростной седиментации с успехом может быть применен для оценки молекулярно-весового распределения полиолефинов. [c.156]

В принципе, реальные эксперименты можно вести при фиксированном (или исключенном) времени, но переменной координате, или при фиксированной координате, но переменном времени. Возможность подобной перестановки координата время — отличительный признак истинно транспортных методов однако, в некоторых вариантах использования ультрацентрифуг или электрофореза получаются равновесные, неподвижные кривые распределения концентрации ( полосы ), например, при изоэлект-рической фокусировке, зонном и скоростном центрифугировании в градиенте плотности и т. п. [c.4]

Весьма интересным оказалось применение метода скоростной седиментации к исследованию взаимодействующих [42] ассоциирующих частиц. Большие центробежные поля в ультрацентри-фуге являются одной из причин диссоциации рибосомных белков при их выделении методом зонного центрифугирования. Это интересное явление, обнаруженное Бреслером [43], указывает на влияние гидростатического давления на диссоциацию олигомерных белков и рибосом на субъединицы. [c.22]

Развитие техники высокотемпературного скоростного центрифугирования и методов фильтрации с использованием мелкопо-ристых фильтров позволило получить степень очистки растворов полиолефинов, сравнимую со степенью очистки для растворов виниловых полимеров при комнатных температурахОднако даже при этих улучшенных методах очистки необходимо принимать особые меры предосторожности, чтобы избежать фракционирования полимера с широким молекулярно-весовым распределением. В первую очередь это относится к полиэтилену высокого давления. [c.15]

Аналогичное явление имеет место и в конических роторах осадительных центрифуг с ленточным шнеком, который здесь играет роль, подобную кольцевым вставкам в описанных экспериментах. Так, в результате центрифугирования суспензии маршалита на скоростной осадительной центрифуге НОГШ-200 была получена [c.139]

При описанном выше ультрацентрифугировании пики, наблюдаемые при помощи шлирен-системы, отвечают границам между раствором и растворителем. Первые, быстрые пики отвечают компонентам, движущимся в окружении более медленных компонентов (фиг. 8). В биохимических смесях некоторые из этих медленных компонентов (например, рибосомы при анализе бактериального экстракта) создают большую вязкость. Измеряемые коэффициенты седиментации могут при этом очень сильно отличаться от приведенного к стандартным условиям значения Поэтому полученные при помощи скоростной седиментации значения s не всегда можно непосредственно использовать при планировании и анализе данных препаративного зонального центрифугирования в градиентах плотности. При зональном ультрацентрифугировании анализируемая смесь наносится в виде слоя на раствор с увеличивающейся по направлению ко дну плотностью (что предотвращает конвекционное перемешивание) и различные компоненты седиментируют в градиенте плотности в виде отдельных зон. Для наслоения смеси можно использовать специальную аналитическую ячейку, в которой техника наслоения принципиально не отличается от обычного препаративного наслоения на градиент. Одна из таких ячеек (Be kman Instruments In .) приведена на фиг. 15. Преимущества применения такой ячейки, как отмечают Виноград и Брунер [11], состоят в том, что она требует меньше исследуемого материала, анализируемые компоненты в ней пространственно разобщены, медленные примеси отстают от быстрее движущихся зон и седиментацию последних можно осуществлять в любом растворителе, не прибегая к предварительному диализу. Растворитель должен быть более плотным по сравнению с [c.67]

Значения параметра к (и fe) для скоростного зонального центрифугирования, вычисленные для сахарозного градиента 5—20% при 5 °С (данные фирмы Be kman Instruments In .) [c.197]

Протромбин превращается в активный фермент тромбин под влиянием тромбопластина — вещества, присутствующего в кровяных пластинках, в легких, мозге и других органах. В качестве источника тромбопластина при клинических анализах крови на содержание в ней протромбина используется обычно мозг кролика. Тромбопластин содержится, повидимому, в клеточных гранулах, так как при скоростном центрифугировании он обнаруживается в осадке [54]. Тромбопластин представляет собой рыхло связанный комплекс белка с рибонуклеиновой кислотой и ацетальфосфатидом [55]. Этот комплекс может быть расщеплен на растворимый в воде белок и нерастворимый липоид. Хотя последний во многих отношениях подобен кефалину, однако при замещении его синтетическим кефалином процесс превращения протромбина в тромбин идти не может [55]. [c.181]

Авторы особое внимание уделили методу скоростной седиментации, в частности влиянию угловой скорости, определению времени центрифугирования, учету давления. С повышением М и сужением распределения точность результатов, получаемых с помощью ультра-ц№трифуги, повышается. Наоборот, для образцов с широким МВР MJM — 2), содержащих относительно низкомолекулярную фракцию, предпочтительно использовать ГПХ. Систематических отклонений в результатах, полученных различными методами, обна )ужить не удалось. [c.20]

Другой эффективный метод контроля заключается в отборе проб по ходу разрушения и их центрифугировании в таком временном и скоростном режиме, который достаточен для осаждения интактных клеток. Надосадочную жидкость проверяют затем на содержание белка и других поглощаюших в ультрафиолете веществ (т. е. нуклеиновых кислот) или специфических цитоплазматических ферментов таким образом определяют степень выхода этих компонентов из подвергаемых разрушению клеток. [c.140]

Третий период в развитии генетики, начавшийся после 1953 г., связан с использованием методов и принципов исследований точных наук химии, физики, математики, кибернетики и т. д. Стали широко применять электронную микроскопию, рентгеноструктурный анализ, скоростное центрифугирование, метод радиоактивных изотопов, чистые препараты витаминов, ферментов и аминокислот и т. д. Анализ материальных основ наследственности перешел на молекулярный зфовень изучения структурной организации живой материи. [c.8]

При скоростях ротора, много меньших, чем те, при которых проводят опыты по скоростной седиментации, в результате центрифугирования устанавливается равновесное распределение макромолекул. Форма этого распределения самым тесным образом связана с молекулярной массой и не зависит от фрикционных свойств молекулы. При наличии смеси компонентов с помощью равновесного центрифугирования получают средневесовое значение молекулярной массы. В ряде случаев можно проанализировать равновесное распределение взаимодействующих макромолекул и определить константу связывания. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности является чрезвычайно эффектив- [c.265]

Разделение клеток с помощью скоростного центрифугирования проводится как на основе плавучей плотности клеток, так и их диаметра. Седиментация в поле силы тяжести является удобным и технически простым методом, и существенным преимуществом этого метода является возможность использования недорогого оборудования, такого как аппараты Станут [8] или камера ЦелСеп [9] (Du Pont Ltd). [c.167]

Хранящиеся при 4 °С стерильные антисыворотки длительное время сохраняют свои. свойства, но тем не менее рекомендуют глубокое замораживание, минимально до —20°С. Чтобы избежать повторных оттаиваний, порции должны иметь возможно меньший объем особо ценны е контрольные антисыворотки хранят аликвотами по 100 мкл в пробирках с крыш-, ками. При длительном хранении при —20 °С вода возгоняется ц вновь замерзает в виде льда в верхней, части образца. Концентрированные белки агрегируют, образуя нерастворимый преципитат на дне пробирки. Размороженные образцы перед началом работы должны быть тщательно перемешаны и подвергнуты скоростному центрифугированию до разделения на порции. Фермент1Ы. содержащиеся в сыворотке продолжают дазрушать белки и при —20°С. Идеально хранить сыворотки при —60 °С дли ниже, однако такую роскошь можно позволить лишь в отношении самых. ценных реагентов. [c.91]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология