Изотопное разбавление, метод аминокислотного анализа

Аминокислотный состав белков. — Анализ гидролизата белков, содержащего до двадцати различных аминокислот (см. табл. 39), является чрезвычайно сложной задачей. Риттенберг (1940) разработал метод изотопного разбавления, согласно которому радиоактивную кислоту определенной удельной активности, например меченую глутаминовую кислоту, добавляют в известном количестве к анализируемой смеси, после чего выделяют глутаминовую кислоту обычным образом. Так как химические свойства природной и меченой кислоты одинаковы, то выделяемое вещество является смесью добавленной аминокислоты и первоначально присутствовавшей в пробе. Количество кислоты в гидролизате вычисляют по изотопному составу выделенной кислоты. Если добавляется рацемическая меченая кислота, то аминокислоты гидролизата перед выделением рацемизуют или же из выделенного рацемата отделяют чистую -форму. Точность анализа не зависит от метода выделения, выхода кислоты или концентрации ее в гидролизате. [c.655]

Первая часть этой задачи решается с помощью процессов гидролиза, происходящих под влиянием энзимов или сильных щелочей и кислот. Особенно хорошие результаты получаются при использовании в качестве гидролизующего агента 6 н. НС1. В этом случае для полного расщепления белковых молекул на аминокис-, лоты необходима обработка белка 6 н. НС1 при температуре 100° С в течение 10—15 ч. Вторая часть этой задачи — анализ образующихся весьма сложных смесей аминокислот — сопряжена с более серьезными трудностями. Обычные методы анализа подобных смесей, связанные с необходимостью количественного выделения всех компонентов смеси, очень трудоемки и приводят к большим погрешностям. Этим объясняются сильные расхождения — в несколько десятков процентов, — при анализе аминокислотного состава различных белков. Метод изотопного разбавления позволяет достигать точности до нескольких десятых долей процента. В этом случае к гидролизату добавляется одна из входящих в его состав аминокислот, меченная углеродом-14. После этого из раствора осаждается некоторое количество определяемой аминокислоты и проводится тщательная очистка ее от примесей. Зная [c.115]

Метод изотопного разбавления в органической химии. Метод изотопного разбавления (см. гл. VI, 3, 2) широко используется при анализе сложных и трудно разделимых смесей органических веществ, в особенности близких по свойствам. Например, определение аминокислотного состава белков в значительной мере облегчилось благодаря применению метода изотопного разбавления. [c.313]

Предположим, что мы определили аминокислотный состав белкового гидролизата и хотим установить количество содержащегося в нем валина. С этой целью к смеси добавляют небольшое точно взвешенное количество меченого С-валина известной удельной радиоактивности, после чего смесь тщательно перемешивают. Затем с помощью заранее отработанного метода выделяют из гидролизата чистый валин, измеряют удельную радиоактивность разбавленного валина и вычисляют коэффициент разбавления. Предположим, он оказался равным 75. Зная вес меченого валина, первоначально добавленного к гидролизату, можно легко вычислить вес валина, содержащегося в исходном гидролизате. До изобретения аминокислотного анализатора ]Мура и Штейна метод изотопного разбавления широко применялся для анализа аминокислот в белковых гидролизатах. Этот метод и сейчас довольно часто используется в тех случаях, когда необходимо установить, является ли данное соединение предшественником другого соединения в процессе его биосинтеза. Так, например, в последовательности реакций [c.476]

Введенные в последние годы современные микрометоды, базирующиеся на ряде новых принципов (изотопное разбавление, выращивание бактерий, хроматография), привели к кардинальным успехам в области аминокислотного анализа, и многие белки сейчас проанализированы полностью. В настоящее время имеются веские основания считать, что точность некоторых новых методов так велика, что данные по аминокислотному составу можно использовать для получения сведений, имеющих важное значение в исследовании структуры белка. Все эти методы можно применять и в исследованиях, связанных с вопросами питания, где не требуется максимальная точность (см. табл. 1). [c.209]