Аминокислоты анализ методом

Как выполняют качественный анализ методом распределительной жидкостной хроматографии на бумаге а) смеси катионов б) смеси органических соединений (аминокислот) [c.278]

В работах Птицына [147, 148] на основании статистического анализа аминокислотного состава и последовательности участков полипептидной цепи с различной вторичной структурой были предложены классификация аминокислот и метод предсказания вторичной структуры глобулярных белков по их первичной структуре. Оказалось возможным приписать каждой аминокислоте некоторую индивидуальную способность встраиваться в спиральные участки ( спиральный потенциал ), в первом приближении не зависящую от ее соседей в цепи. [c.250]

В книге систематизированы как наиболее распространенные, так и менее известные методы газохроматографического анализа аминокислот, предусматривающие получение их летучих производных. Подробно рассмотрен каждый метод превращения аминокислот в летучие производные — форму, удобную для анализа — методом газо-жидкостной хроматографии. Много внимания уделено условиям анализа, жидким фазам и твердым носителям, дается критическая оценка возможных ошибок измерения. Обсуждаются результаты качественного и количественного анализа смесей аминокислот. Приводятся данные по точности количественного определения последних. [c.2]

Анализ. Методы анализа белковых макромолекул селективны и осуществляются в зависимости от того, какая структура является объектом исследования, и начинаются с определения аминокислотного состава. Для этого необходимо провести полный гидролиз пептидных связей и получить смесь, состоящую из отдельных аминокислот. Гидролиз проводят при помощи 6 М соляной кислоты при кипячении в течение 24 ч. Так как для гидролиза пептидных связей изолейцина и валина этого может быть недостаточно, проводят контрольный 48- и 72-часовой гидролиз. Некоторые аминокислоты, например триптофан, при кислотном гидролизе разрушаются, поэтому для их идентификации используют гидролиз при помощи метансульфоновой кислоты в присутствии триптамина. Для определения цистеина белок окисляют надмуравьиной кислотой, при этом цистеин превращается в цистеиновую кислоту, которую затем анализируют. Вьщеление и идентификацию аминокислот проводят при помощи аминокислотных анализаторов, принцип действия которых основан на хроматографическом разделении белкового гидролизата на сульфополистирольных катионитах, В основе количественного определения той или иной аминокислоты лежит цветная реакция с нингидрином, однако более перспективным следует считать метод, при котором аминокислоты модифицируют в производные, поглощающие свет в видимом диапазоне. Разделение смеси аминокислот проводят при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии, а само определение — спектрофотометрически. Следующим этапом является определение концевых аминных и карбоксильных [c.40]

Белки, см. также биуретовая реакция, аминокислоты анализ методом изотопных производных 7350 аналитическая химия (обзор) 7679 [c.351]

Существует два основных метода, пригодных для хроматографического анализа аминокислот. Один метод предназначен для анализа аминокислот белковых гидролизатов, другой — для анализа физиологических жидкостей. Описание этих методов приведено ниже. [c.33]

Позднее при анализах аминокислотного состава стали использоваться микробиологические методы, существо которых состоит в том, что отдельные микроорганизмы требуют для своего развития наличия в питательной среде определенных аминокислот. Внося в контрольную синтетическую среду все необходимые аминокислоты, а в опытную среду — все аминокислоты, за исключением какой-либо одной, и обеспечивая потребности микроорганизма в этой аминокислоте добавлением белкового гидролизата, определяют интенсивность роста микроорганизмов и рассчитывают содержание в белковом гидролизате данной аминокислоты. Этот метод также очень трудоемок. [c.216]

При определении кислых и нейтральных аминокислот двухколоночным методом прибору задается такая же программа, как и при одноколоночном методе, но анализ останавливают после того, как выходит пик фенилаланина. [c.184]

ФТГ-производные могут быть идентифицированы прямым или непрямым путем. Прямая идентификация достигается хроматографией ФТГ-фракций. При непрямой идентификации ФТГ-производные сначала разрушают добавлением Ва(ОН)г или 6 н. НС1, а затем определяют полученные свободные аминокислоты. Непрямой метод непригоден для количественного анализа, так как при такой обработке происходит сильное разрушение веществ. [c.283]

Для быстрого разделения липидов, содержащихся в небольших количествах во всех жидкостях организма и в больших количествах в экстрактах органов, в настоящее время нет какого-либо стандартного метода. Здесь существенную помощь оказывает анализ методом ХТС. Однако не только липиды, но и представляющие интерес с медицинской точки зрения классы гидрофильных веществ, например аминокислоты, нуклеиновые кислоты [c.337]

Одно из достоинств метода ТСХ — его быстрота. Анализ аминокислот этим методом требует значительно меньше времени, чем хроматографирование на бумаге. Так, двумерное хроматографирование на бумаге длится несколько дней, тогда как методом ТСХ его можно осуществить за 4—5 ч. Другое преимущество ТСХ — повышенная чувствительность. Например, чувствительность определения гистамина этим методом в 2 раза выше, а чувствительность определения цистеиновой кислоты в 50 раз выше [24]. При двумерном разделении различие в чувствительности еще больше и для отдельных кислот может возрастать в 250—500 раз. [c.478]

ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ, метод количеств, и качеств, определения ионов и хим. соед. по интенсивности или спектру хемилюминесценции. В X. а. использ. окисление в-в, дающих яркую хемилюминесценцию,— люмтаола, люцигенина и др. окислители — НзОа, Ог и др. Интенсивность хемилюминесценции измеряют фотоэлектрически (на хемилюминесцентном фотометре, спектрофотометре) и фотографически. В X. а. конц. в-в, влияющих на скорость р-ций, определяют по изменению интенсивности хемилюминесценции во времени. Так, разработаны методы определения ионов иек-рых металлов — Ре(П), Мп(П), Со(П), Си(П) и др. (по пх каталитич. действию предел обнаружения — неск. нг/мл), орг. в-в — оксихинолина, нафтолов, фенантролина, спиртов, производных анилина, глюкозы, аминокислот и др. (по каталитич. и ингибирующему действию предел обнаружения — неск. мкг/мл и больше, в нек-рых случаях — неск. нг/мл), а также озона, оксидов азота и серы, сероводорода в воздухе (пределы обнаружения 10- %). [c.642]

Свободные аминокислоты и пептиды являются резко выраженными гидрофильными соединениями, малорастворимыми в органических растворителях. Это следует учитывать при отборе проб и подготовке веществ, в случае анализа методом ХТС, а также при выборе растворителя. В табл. 99 проведено сравнение растворимостей. Кроме того, аминокислоты амфотерны [c.392]

Обычно поражает, что при анализе методом ХТС в одномерном варианте наибольшая величина Rf аминокислот не превышает 0,7. В случае всех исследованных нами растворителей было использовано для разделения только приблизительно /3 имевшегося в распоряжении пути. Увеличение содержания воды в растворителе приводило к большему росту малых величин Rf, чем больших, в результате чего уменьшался эффективный путь разделения. [c.402]

Бир и Тейтельбаум [8] описывают микрометод для окисления аминомасляной кислоты, валина и лейцина перед анализом методом ГЖХ. Аминокислоты обрабатывают нингидрином в запаянной ампуле и продукты экстрагируют растворителем, представляющим собой хлорированный углеводород. Затем раствор, содержащий альдегиды, анализируют на колонке с силиконом при 78°. Для количественного определения этих аминокислот строят стандартные кривые после хроматографического разделения соответствующих альдегидов при известной их концентрации. [c.538]

В зависимости от обстоятельств смесь аминокислот и пептидов приходится анализировать методом ХТС, используя двумерное разделение, отдельно элюировать разделенные вещества и проверять их однородность повторным анализом методом ХТС, [c.408]

Поскольку ДНФ-аминокислоты как карбоновые кислоты склонны в органических растворителях к ассоциации, то, как правило, в растворитель следует добавить небольшое количество ледяной уксусной кислоты, подавляющей ассоциацию и этим устраняющей основную причину образования хвоста. Следует отметить, что эффект уксусной кислоты наблюдается в растворителях, содержащих большое количество пиридина и поэтому рассматриваемых как основные. Наряду с этим ледяная уксусная кислота повышает элюирующую силу . Однако благоприятное действие ледяной уксусной кислоты при анализе методом ХТС (силикагель Г) эфирорастворимых ДНФ-аминокислот наблюдается только в области концентраций от 0,5 до 5 об.%. Более высокие концентрации действуют так же, как и большое содержание воды, т. е. ухудшают разделительные свойства растворителя. [c.418]

В последние годы широкое распространение получили электрометрические методы анализа. Нами ведутся исследования в области потенциометрии неводных растворов аминокислот [9]. Методы определения органических соединений в неводных растворах широко применяются в практике научно-исследовательских и заводских лабораторий [10] благодаря ряду их особенностей. Эти методы позволяют осуществлять дифференцированное определение смесей органических веществ как кислого, так и основного характера с достаточно высокой аналитической точностью. Методы быстры и просты. [c.229]

Они предусматривают точное определение количества аминокислот. Однако методы, о которых пойдет речь, в целом, как правило, предшествовали разработанному Муром с соавторами [44] способу хроматографии на колонке, который постепенно вытеснил микробиологические анализы, особенно после появле- [c.573]

Количественный анализ аминокислот может быть проведен при пропускании анализируемого раствора через колонки, заполненные ионообменными смолами разделение аминокислот при этом происходит вследствие различий в их способности к комплексообразова-нию с высокополярными участками смолы. Раствор, вытекающий из колонки, смешивают с раствором ниНгидрина и интенсивность возникающего синего окрашивания измеряют с помощью фотоэлектроколориметра. Затем строят график зависимости интенсивности от времени при постоянной скорости потока. Типичная хроматограмма, полученная при анализе смеси аминокислот этим методом, приведена на рис. 20-4. [c.111]

Использование хлоргидратов эфиров аминокислот по методу Т. Курциуса казалось совершенно невозможным из-за неудобств, связанных с дальнейшим переосаждением солей с точным количеством серебра. Но Фишер нашел очень простое, как кажется теперь, решение вопроса. Полученные по методу Курциуса хлоргидраты эфиров аминокислот обработкой концентрированной щелочью на холоду он переводил в свободные эфиры, которые заметно не омылялись [164]. Этот простой и изящный прием позволил Фишеру легко этерифицировать смеси продуктов гидролиза белковых молекул за исключением растворимого в щелочи тирозина. Курциус назвал эту работу поворотным пунктом белковой химии [257]. Действительно, возможность разгонки полученных эфиров впервые открывала путь к осуществлению полного анализа всех продуктов распада белковых веществ. [c.75]

Разделение продуктов расщепления аминокислот иодозобензолом методом газо-жидкостной хроматографии. (Анализ а-аминокислот после превращения их в нитрилы. НФ цианэтилированный глицерин.) [c.84]

Теоретически можно оценить точность каждого метода однако маловероятно, чтобы на практике когда-нибудь реализовались идеальные условия. В связи с этим каждый метод необходимо проверить и установить определяемые процентные количества аминокислот в смесях, аналогичных гидролизатам анализируемого белка. Оценка специфичности и точности может быль произведена при помощи анализа специально составленных аминокислотных смесей и сравнения одного метода с другим [38]. Если сравниваются два или большее число методов, основанных на использовании различных свойств или функций аминокислот (например, методы выращивания бактерий, определения коэффициента распределения и содержания изотопов), то предполагается, что свойственные этим методам ошибки неодинаковы. [c.227]

Несмотря на очевидные преимущества меченого ДНФБ как радиореагента, он не нашел широкого применения для определения аминов, что, возможно, объясняется его дороговизной по сравнению с уксусным ангидридом. Еще один недостаток ДНФБ- Н связан с возможностью потерь радиоактивности по Н за счет реакции водородного обмена, когда этот реагент или его производное оказываются в сильнокислой среде. Недостатком ДНФБ как радиореагента является и заметное гасящее действие нитрогрупп, которое проявляется при измерении радиоактивности жидкостными сцинтилляционными счетчиками. Эти недостатки приводят к особенно большим затруднениям в анализах методом с двумя изотопами, как, например, метод анализа аминокислот с тритием в качестве сравнительного изотопа и с С в качестве индикаторного изотопа. Однако эти трудности можно устранить, если перед измерением радиоактивности жидкостным сцинтилляционным счетчиком или газовым счетчиком сжигать образцы. [c.315]

Одной из основных причин применения дериватизации в ГХ является перевод нелетучих соединений в более летучие. Особое место здесь занимают методы получения летучих производных аминокислот, которые в натуральном виде не только нелетучи, но и термически нестойки и поэтому их прямой анализ методом ГХ невозможен. В то же время актуальность задач качественного и количественного определения аминоки слот в биологии, биохимии, медицине и микробиологии стимулирует развитие методов получения и анализа летучих производных аминокислот. Использование метиловых эфиров N-тpифтopaцeтил-пpoизвoдныx [c.193]

Белковые вещества пентозных дрожжей представлены протеинами (нуклеопротеин, фосфопротеин, лецитопротеин, гликопротеин), глобулинами, альбуминами и более простыми — пептонами, полипептидами и аминокислотами. Анализ белка хроматографическим методом показал, что он содержит все жизненно необходимые аминокислоты. Количество их- в пентозных дрожжах следующее (в % от сухого вещества) [c.572]

В настоящее время наиболее широко в ГХ используют методы защиты функциональных групп. Анализ аминокислот газохроматографическим методом стал возможным, в основном, благодаря химической защите их функциональных групп, что привело к повышению стабильности и увеличению летучести. Защита (трансформация) функциональных групп в более устойчивые является традиционным способом, широко используемым в методах ХОП. Естественно, что защита направлена, прежде всего, на те функциональные группы, присутствие которых в молекуле анализируемых соединений обуславливает их повышенную реакционную способность, термическую нестабильность и образование ассоциатов. Аналогичные проблемы давно решаются в препаративной органической химии, в которой часто прибегают к временной блокировке или защите тех функциональных групп, участие которых в реакциях, проводимых по другим функциональным группам молекулы, возможно, но нежелательно. Обширный, хорошо систематизированный материал по известным до настоящего времени методам защиты групп приведен в монографии, написанной под редакцией Дж. Мак Оми [12]. [c.14]

С введением газожидкостной хроматографии (ГЖХ) в качестве метода анализа аминокислот, пептидов и родственных соединений значительно возросли возможности новых достижений в области пептидной химии. Значительные усилия были направлены на развитие аминокислотного анализа методом ГЖХ, для чего исследовались различные типы производных. Однако в количественном анализе всем ГЖХ методам приходилось конкурировать с хорошо разработанными методами ионнообменной хроматографии, отличающимися высокой степенью автоматизации, точности и даже скорости анализа (например, метод ли-гандного анализа). По этой причине ГЖХ аминокислот в последние годы нашла практическое применение в большей мере для некоторых специальных задач, где она могла даже превосходить другие хроматографические методы, а не для количественного определения аминокислот в сложных смесях. Однако теперь ГЖХ можно использовать в качестве дополнительного метода и для этой цели благодаря аналитическому подходу, разработанному главным образом Герке и сотр. [1]. [c.142]

Для исследования рацемизации в синтезе высших пептидов из более коротких пептидов достаточно ограничиться соответствующим трипептидом. Трипептид синтезируется из аминозащищенного дипептида 2-ь-акз-ь-ак2-ОН и эфира аминокислоты Н-ь-а/СгОК, что приводит к трипептиду 2-ь-акз-ь-ак2-1-акгОЯ. В пептиде, который служит аминокомпонентом, не следует ожидать рацемизации, поэтому его может заменить просто эфир аминокислоты. Подходящие методы анализа возможного содержания рацемической аминокислоты ак2 в этом трипептиде были разработаны в лаборатории Вейганда. Ранее в соответствующих работах было найдено, что подходящей моделью является три-пентидное производство 2-ь-Ьеи-ь-РЬе-ь-Уа1-0Ви. Оно готовилось реакцией 7-ь-Ьеи-ь-РЬе-ОН (2-бензилоксикарбонил или [c.176]

Остановимся па количественном определении аминокислот в виде наиболее часто применяемых их летучих производных, а именно сложных эфирах К-ТФА- и алкилсилилпроизводных аминокислот. Для получения количественной информации при газохроматографическом анализе аминокислот применяется метод внутреннего стандарта, основанный на добавлении к исследуемой смеси известного количества определенного вещества — внутреннего стандарта. На основании обработки хроматограмм ряда смесей с различным соотношением количеств внутреннего стандарта и определяемого компонента строят калибровочный график, выражающий зависимость отношения площадей пиков определяемого вещества и внутреннего стандарта от отношения их концентраций. При анализе многокомпонентных смесей с широким интервалом температур кипения иногда применяют несколько внутренних стандартов. [c.69]

Шрам и Ломберт [8] использовали кювету, изготовленную из отрезка прозрачной полиэтиленовой трубки с внутренним диаметром 2,2 мм (рис. 6.3). Кювету заполняли антраценом и помещали в прозрачный сосуд с силиконовым маслом. Оптимальный размер кристаллов антрацена составляет 300 мкм при регистрации С и 150 мкм при регистрации Н. Эффективный объем кюветы составляет 1 мл, а эффективность регистрации С и Н — 44 и 2% соответственно фон равен 60 имп/мин. Шрам и Ломберт использовали эту систему при анализе методом ионообменной хроматографии меченых аминокислот из биологических образцов. Преимуществами такой системы являются высокая степень стабильности и постоянная величина эффективности при минимальных эффектах гашения. [c.161]

Детальное кинетическое и структурное исследование а-химотрипсина позволило построить молекулярную модель трансформации веществ под действием этого катализатора. Значительную роль в создании этой модели сыграл метод рентгеноструктурного анализа. Методами химической модификации было найдено, что каталитическая активность определяется функционированием целого ряда остатков аминокислот. На рис. 36 представлен фрагмент белковой молекулы а-химотрипсина, составляющей активный центр фермента (Blow, Birktoft, Hartley, 1969), (см. также рис. 31). [c.91]

К нелетучим или слабо летучим компонентам, выделяемым из растительных и животных тканей, относят аминокислоты, другие органические кислоты и сахара. Перед проведением анализа методом ГЖХ следует увеличить давление их паров и уменьшить полярность, удаляя или заш,ищая функциональные группы путем окисления, ацетилирования, алкилирования или другими методами. После этого, проводя хроматографическое разделение в паровой фазе, можно получить о данных соединениях такую полную информацию, какую только удается собрать относительно более летучих соединений. Кроме того, усовершенствуя этот метод, можно определить состав и в меньшей степени строение некоторых продуктов конденсации, а именно белков, полисахаридов и гликозидов. До сих пор не появилось сообщений о нуклеотидах и нуклеиновых кислотах, но почти с уверенностью можно сказать, что метод ГЖХ. будет неоценимым при анализе фосфатных и сахарных компонентов, а вероятно, и азотсодержащих оснований, входящих в эти соединения. [c.528]

В некоторых особых случаях метод Байера можно применять для разделения аланина, пролина, валина, лейцина, изолейцина, метионина, ( нил-аланина и аспарагиновой и глутаминовой кислот. Сюда не входят серин, треонин, лизин, аргинин, тирозин, оксипролин и гистидин. Вероятно, видоизменив рабочие условия, можно выделить дополнительно ряд эфиров. Однако нет никакой уверенности, что таким образом можно хроматографически проанализировать все аминокислоты. Поэтому метод Байера, так же, как и некоторые другие методы, рассмотренные ниже, применим только в том случае, если частичный анализ аминокислот удовлетворяет требованиям данной конкретной задачи. [c.532]

Окисленные и малоосновные кислоты перед анализом методом ГЖХ следует переводить в сложные эфиры для увеличения упругости пара. Теоретически это можно осуществить любым методом метилирования, используемым для высших жирных кислот (см. гл. 7). На практике, однако, применения диазометана следует избегать, если только смесь не состоит исключительно из насыщенных неокисленных кислот, таких, как янтарная или глутаровая. Оказалось, что, например, малеаты и фумараты можно выявить методом ГЖХ только при осторожном метилировании стехиомет-рическим количеством реактива. При добавлении избытка диазометана на хроматограмме не получают пиков, вероятно, вследствие образования нелетучего пиразолина в результате присоединения диазометана по двойным связям кислот. Винная и а-кетоглутаровая кислоты и некоторые аминокислоты реагируют с диазометаном, но методом газовой хроматографии не удалось обнаружить пиков этих продуктов [41]. Хауз и др. [20] изучали реакцию диазометана с различными кетонами. [c.543]

В литературе приводятся случаи, когда применялись загрязненные аминокислоты. Например, Смит и Грин [35] пользовались для микробиологического определения изолейцимом, который, как было позже обнаружено, содержал аллоизолейцин [36]. Между тем ясно, что наличие примесей в бактериальной среде и меченых аминокислотах может носить серьезные погрешности. Шемин и Фостер [9] подсчитали, что 1 % примеси азотсодержащего соединения яри анализе методом изотопного разбавления вносит ошибку до 9%. [c.215]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология