Непермиссивные штаммы

Между тем исследование первичной структуры белка фаговой головки дикого типа показало, что он представляет собой простую полипептидную цепь, которая в результате обработки трипсином и химотрипсином распадается на восемь фрагментов эти фрагменты отличаются различной подвижностью в электрическом поле и их легко можно отделить друг от друга с помощью электрофореза. Для того чтобы сравнить с нормальным белком дикого типа продукты гена белка головки, образуемые различными мутантами фага в отсутствие супрессоров, культуры непермиссивного штамма Е. соИ были заражены каждым из десяти исследуемых мутантов, [c.453]

Когда фаги с различными мутантными генотипами заражают клетку, в которой они могут размножаться, то в потомстве обнаруживаются фаги как с родительскими, так и с рекомбинантными генотипами. Скрещивание между двумя различными й-мутантами фага выполняют при пермиссивной температуре (30°С), а скрещивание между хи5-мутантами фага-в клетках -штамма. Суммарное число потомков всех генотипов определяют, высевая на чашки определенный объем культуры в пермиссивных условиях. Количество рекомбинантов дикого типа легко определить посевом такой же пробы в непермиссивных условиях, когда негативные колонии образуют лишь фаговые частицы дикого типа (см. рис. 6.2), точно так же, как это было с //-мутантами фага Т4. [c.197]

Бензер решил установить, не обусловлен ли фенотип гП-мутантов из его коллекции повреждениями более чем в одной функциональной единице. То обстоятельство, что два г11-мутанта при разнообразных экспериментальных условиях проявляют один и тот же фенотип, само по себе вовсе не гарантирует, что соответствующие мутационные изменения затрагивают одну и ту же функциональную единицу. Мы уже упоминали, например, что стерильные пятна типа г на обычных штаммах Е. соИ образуются при разных мутациях, удаленных друг от друга настолько сильно, что вряд ли они затрагивают одну и ту же функциональную единицу. И если разные гП-мутанты неспособны размножаться на непермиссивных штаммах К, то это не обязательно означает, что всем им свойствен один и тот же функциональный дефект генетического материала. Для выяснения принадлежности двух различных мутаций гП к одной и той же функциональной единице Бензер воспользовался так называемым цис-транс-те-стом, или тестом на комплементарность (фиг. 153), приспособив его для-работы с фагами. Этот тест был разработан ранее применительно к высшим организмам стой же целью, т. е. для изучения природы функциональной единицы. Комплементационный тест Бензера был основан на том, что на штамме К, зараженном одновременно гИ-мутантом и фагом дикого типа г, оба типа размножаются нормально. Это означает, что нормальный ген родительского фага дикого типа способен обеспечивать функцию, необходимую для размножения на штамме К не только фага дикого типа, но и дефектного гП-мутанта. На языке генетики можно сказать, что при смешанном заражении штамма К двумя фагами ген дикого типа г доминирует над мутантным аллелем гН. В тесте на комплементарность клетки штамма К заражают двумя гИ-мутантами (каждый из которых в одиночку не способен размножаться на штамме К), чтобы выяснить, смогут ли они при смешанном заражении помогать друг другу и образовывать инфекционное потомство. Если два мутанта способны к такому совместному размножению, то это означает, что две мутации этих мутантов локализованы в разных функциональных единицах фагового генома. Неспособность одного из мутантов размножаться на штамме К (иными словами, его фенотип гН) свидетельствует о том, что этот мутант неспособен осуществлять какую-то определенную функцию или вызывать синтез какого-то определенного белка, необходимого для размножения фага в зараженной клетке. Фенотип гП второго мутанта также свидетельствует о неспособности осуществлять какую-то необходимую функцию, но только другую, т. е. [c.310]

II. 1. Тест на комплементацию в жидкой среде проводят почти так же, как и скрещивания, за исключением того, что в качестве клеток-хозяев при этом выступает непермиссивный штамм бактерий. Здесь также важно заражать клетки равным количеством фагов (множественность заражения 5—10), определять количество неадсорбированного фага и число клеток в момент инфицирования, а также и выход фага, что в данном случае и составляет цель эксперимента. Чтобы понизить фон неадсорбированного фага, часто пользуются сывороткой против него. При комплементации в жидкой среде очень важно ставить в качестве контроля заражение каждым из родительских фагов по отдельности, а также определять частоту реком- [c.80]

Как упоминалось в гл. XII, в 1960 г. был открыт класс условно-летальных мутантов бактериофага Т4, названных amber- или ат-мутантами. Напомним, что а/тг ег-мутация может возникнуть в любом из многих генов бактериофага и приводит к тому, что нормальный продукт этого гена не синтезируется при заражении обычных непермиссивных клеток Е. соИ (вследствие этого мутантный бактериофаг не может размножаться в этом хозяине). Однако при заражении клеток пермиссивного штамма К, фаговый атЬег-мутапт способен синтезировать нормальный продукт мутировавшего гена (и в этом случае происходит размножение фага). Теперь рассмотрим природу этого странного фенотипа фаговых мутантов. [c.453]

Основная сложность при трансдукции вирулентными фагами заключается в создании условий для предупреждения гибели потенциальных трансдуктантов при заражении активными фагами. С этой целью можно использовать различные приемы. Это создание условий, подавляющих литическое действие фага (временное понижение температуры после адсорбции, использование голодающих культур в стационарной фазе роста, температурочувствительных мутантов фага), применение низкой множественности инфекции, облучение фага большими дозами УФ, использование в качестве реципиентов штаммов, непермиссивных для амбер-мутантов соответствующих фагов, удаление не-адсорбированного фага различными способами, предотвращение реадсорбции фага и лизиса клеток на чашках путем исключения катионов, необходимых для адсорбции. Следует отметить, что применение перечисленных методов повышает частоту появления трансдуктантов и при использовании умеренных фагов. [c.103]

Проверьте концентрацию ревертантов, высевая полученный препарат фага на штамм TR251 (пермиссивный для амбер-мутантов) и на штамм TR248 (непермиссивный для амбер-мутантов). [c.68]

Второй метод был рассчитан на изучение основной последовательности гомологов у соответствующих сегментов РНК различных штаммов. Основная последовательность гомологов была рассчитана для индивидуальных сегментов РНК штамма A/FPV, способного образовывать бляшки на клетках куриного эмбриона, и для комплементарных сегментов РНК других штаммов вируса гриппа, неспособных образовывать бляшки в этих клетках. Для получения рекомбинантов с бляшконеобразующим штаммом были использованы ts-мутанты вируса A/FPV с известным фенотипическим дефектом. Извлеченные бляшки, образованные рекомбинантом при непермиссивной температуре, были использованы для инфицирования клеток была выделена комплементарная РНК, которую использовали в опытах молекулярной гибридизации с меченными Р сегментами вРНК. При сравнении рибонуклеазо-резистентных фракций гомологичных гибридов и гетерологичного гибрида можно было определить родительскую принадлежность любого из сегментов 222, 224, 242]. [c.36]

При совместном заражении /s-мутантами- по S-сегменту штаммов L M ARM и L M WE [204] обнаружены также диплоидные вирусы. Потомство образует бляшки при непермиссивной температуре и содержит (по данным фингерпринтного анализа) S-сегменты как L M ARM, так и L M WE [204]. Тем не менее они дают большое количество /s-потомства, т. е. генетически нестабильны. Эти результаты можно понять, предположив совместную упаковку комплементирующих S-сегментов, которые при непермиссивной температуре синтезируют как N-белок, так и белок GP дикого типа [т. е. белки, представляющие собой продукты генов дикого типа (не ts) каждого из сегментов SJ. [c.400]

Смотреть страницы где упоминается термин Непермиссивные штаммы: [c.284] [c.312] [c.453] [c.61] [c.194] [c.36] [c.57] [c.187] [c.197] [c.198] [c.198] [c.228] [c.229] [c.229] [c.193] [c.57] [c.187] [c.197] [c.198] [c.198] [c.228] [c.229] [c.229]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология