Мутанты температурочувствительные

Пример фенотипической супрессии — восстановление жизнеспособности условно летальных мутантов (температурочувствительных, чувствительных к повышенному осмотическому давлению, pH и т. д.) в пермиссивных условиях. Явление фенотипической супрессии используют при изучении действия гена. Это перспективный подход к расшифровке молекулярного механизма модификационных изменений. [c.444]

ТЕМПЕРАТУРОЧУВСТВИТЕЛЬНЫЙ МУТАНТ. Не способен развиваться при повышенной температуре. [c.527]

ДНК-полимераза III — фермент, обнаруженный в экстрактах из кишечной палочки. Этот фермент более термолабилен, чем ДНК-полимераза II, и легче ингибируется солями. Известны двойные мутанты кишечной палочки, биосинтез ДНК в которых весьма чувствителен к температуре. Эти мутанты не обладают активностью ДНК-полимеразы I, но имеют нормальную активность ДНК-полимеразы II и температурочувствительную активность ДНК-полимеразы III, что служит доказательством участия ДНК-полимеразы III в процессе репликации ДНК. [c.52]

Первый тип-это температурочувствительные мутанты (ts). Боль-щинство фагов способно инфицировать хозяина и размножаться в широком интервале температур. Температурочувствительные мутанты многих фагов Е. соИ способны размножаться при 30°С (пермиссивные условия), но теряют эту способность и обнаруживают свой мутантный фенотип при температуре 40-42°С (непермиссивные условия). При такой температуре негативные колонии не образуются. Известны также мутанты, чувствительные к холоду ( s). Появление температурной чувствительности почти всегда свидетельствует о том, что в каком-то участке ДНК, кодирующем некоторый белок, произошла мутация, повлекшая за собой аминокислотную замену. В результате белок становится нестабилен при непермиссивной температуре и утрачивает активность. [c.194]

Ряд рибосомных белков был идентифицирован благодаря изменениям в их структуре у температурочувствительных мутантов. Температурочувствительные мутации приводят к тому, что при повышенной температуре рост бактерий замедляется-эффект, обусловленный каким-то повреждением в рибосомном белке, функция которого при непермиссивной температуре, по-видимому, нарушается. СЗбщий характер таких мутаций не дает ключа к выяснению и функции данного белка. [c.111]

Проведены скрещивания температурочувствительных мутантов мелкого фага с кольцевым геномом. Проанализируйте таблицу и постройте карту хромосомы фага. [c.223]

Изобразите предполагаемую кинетику включения Н-тимина в ДНК до и после изменения температуры от 30° до 42° при культивировании температурочувствительных мутантов Е. соН, содержащих мутации (а) в гене dna Л и (б) в гене dna Е. Известно, что рифампицин ингибирует РНК-полимеразу. Изобразите ожидаемый кинетический профиль включения Н-тимина в ДНК до и после добавления рифампицина к культуре Е. соН дикого типа. [c.129]

Перевернутые чашки инкубируют при постоянной температуре в хорошо термостатируемой комнате или камере (разд. 6.3). Лучше использовать закрытые контейнеры, однако их не следует перегружать чашками. Если тем не менее без этого не обойтись, увеличивают время для выравнивания температуры чашек и камеры, что особенно важно при работе с температурочувствительными мутантами. Инкубация в закрытых контейнерах позволяет также избежать токсического воздействия вредных газов, которые могут присутствовать в атмосфере термостатируемых помещений общего назначения (например, паров уксусной кислоты, используемой для обесцвечивания гелей). Непрозрачные контейнеры защищают светочувствительные компоненты сред и красители от инактивации светом. Наконец, в контейнерах среда в чашках не высыхает, и поэтому такие чашки пригодны для наблюдения за медленно развивающимися или поздно появляющимися колониями. Еще одной проблемой является поддержание необходимой концентрации СОг, поскольку в СОг могут нуждаться даже организмы, выделяемые обычно в отсутствие высоких концентраций этого газа. Эта зависимость особенно наглядно выявляется в случае нанесения на агар отдельных редких клеток из разбавленных суспензий и при инкубации в обыч- [c.463]

Если нужно получить мутант, генетический дефект которого нельзя компенсировать добавками питательных веществ (например, дефекты ферментов, участвующих в репликации ДНК и РНК, дефекты в каком-либо элементе белоксинтезирующего аппарата), его следует искать среди условно летальных мутантов, которые жизнеспособны лишь при определенных условиях. Примерами таких мутантов могут служить температурочувствительные мутанты и штаммы, несущие супрессорные нонсенс-мутации. В табл. 13.1 приведены свойства мутаций различных типов она может служить ключом для выбора наиболее подходящего типа мутанта в соответствии с определенной целью. [c.10]

Подобно температурочувствительным мутантам, amber- и o hre-мутанты могут быть получены практически для любого гена бактериофага. Мутантов с терминацией цепи, у которых утерянные гены не имеют жизненно важного значения для бактерий, можно распознать, обеспечив перенос генов либо путем скрещивания, либо путем вирус- [c.254]

Несмотря на то что сейчас выяснены лишь некоторые ключевые моменты тех химических процессов, которые лежат в основе всех этих явлений, использование температурочувствительных мутантов и тестов на комплементацию поможет установить суммарное число генов, принимающих участие в этих процессах, а также локализацию этих генов в хромосоме Е. oli. В ряде случаев это может способствовать более полному пониманию биологического явления. [c.255]

Важную информацию удалось получить при изучении процесса репликации прн помощи генетических методов [196, 198]. Была получена серия температурочувствительных мутантов Е. соИ. не способных к синтезу ДНК. С их помощью в разных точках хромосомной карты удалось идентифицировать гены dnaA, В, С, D, Е, F и G. Продукты генов А [c.276]

Удобный объект для изучения сплайсинга-температурочувствительные мутанты дрожжей, у которых не удаляются интроны, и в ядре накапливаются предшественники тРНК, имеющие прерывистое строение. Процессинг фланкирующих последовательностей может происходить обычным способом. Молекулярный механизм возникновения этого дефекта неясен, но известно, что он специфичен для прерывистых генов, поскольку тРНК, кодируемые непрерывными генами, могут созревать и транспортироваться в цитоплазму. [c.318]

Время основного фосфорилирования гистона Н1 навело на мысль о том, что он может участвовать в митотической конденсации хромосом. Это согласуется с данными о необходимости гистона Н1 для образования нитей хроматина размером 30 нм (гл. 29). Некоторые температурочувствительные мутанты, дефектные по Н1-фосфори-лированию, не способны закончить репликацию ДНК и завершить деление клетки. Но такая корреляция не говорит ничего о том, является ли фосфорилирование причиной или сопутствующим событием митотической конденсации. [c.385]

Инициация репликации плазмиды R1 Е. сой регулируется белком-репрессором, кодируемым одним из генов R1. Были получены мутантные плазмиды, которые кодируют аномальный репрессор или же имеют несовершенный механизм регуляции его образования. Некоторые из этих мутантов т-температурочувствительные (репрессор неактивен при 43 °С). При 30 °С репликация идет нормально, и на клетку образуется 1—2 плазмидные копии, а при 43 °С репликация инициируется гораздо чаще, так что в клетке накапливается по нескольку сот плазмид. Небольшой сегмент R1, содержащий участок начала репликации и связанные с ними регулирующие элементы, был использован для создания плазмид-векторов, п-рименяемых при клонировании разнообразных генов. -Преимущество таких векторов заключается в том, что при повышенной температуре с их помощью можно получать множества копий клонируемого гена, а следовательно, и много белка, кодируемого этим геном. [c.306]

ГтЛуВ таблице представлены результаты Гмплементационного теста между различными температурочувствительными фаговыми мутантами ч- означает присутствие негативных колоний при непермиссивной температуре. Распределите мутации по группам комплементации. [c.222]

С культивируемыми клеточными линиями млекопитающих можно проводить генетические эксперименты, используя подходы, аналогичные тем, которые применяются при генетическом исследовании микроорганизмов. Например, можно отобрать температурочувствительные мутанты, растущие при 34° С, но не при 40°С. При обработке мутагенами культуры клеток яичника китайского хомячка удалось получить целый ряд мутантных линий с фенотипом чувствительности к температуре. Клетки некоторых из этих линий не растут при 40°С из-за нарушения способности к синтезу белков. Этот же дефект проявляется и в опытах in vitro при 40°С. Однако мутантные клетки приобретают способность к росту при 40°С на среде с 10-100-кратным превышением концентрации одной из 20 содержащихся в обычной среде аминокислот. Для каждого типа мутантов спасительным оказывается избыток только одной определенной аминокислоты. На основании ваших знаний о механизме биосинтеза и об особенностях функционирования белков ответьте на вопрос [c.64]

Известны температурочувствительные мутации гена su3 Е. соН. Предложите метод обнаружения таких мутаций. По аналогии с известными температурочувствительными белками предложите интерпретацию феномена чувствительности к повышенной температуре этих тРНК -мутантов. [c.102]

Рис. 13.5. А. Включение Н-тимина (черные кружки) и С-лейцина (цветные кружки) в клетки температурочувствительного мутанта (1паЕ при рестриктивной температуре. После температурного сдвига до 42,5° синтез ДНК практически немедленно прекращается, в то время как синтез белка продолжается с нормальной скоростью. Сравните это с поведением клеток температурочувствительного мутанта (1паА (включение Н-тимина-черные квадратики включение С-лейцина-цветные

Первые указания на то, что в системе репликации ДНК участвует целый ряд важных генетических функций, были получены благодаря выделению широкого набора условно-летальных температурочувствительных мутантов Е. соН (dna ), комплементационный анализ которых позволил соотнести их с мутациями в ряде различных генов. Среди них можно выделить два класса мутантов, которые при рестриктивной температуре (1) немедленно прекращают синтез ДНК или (2) в течение относительно протяженного временного интервала постепенно прекращают синтезировать ДНК (рис. 13.5). Первый фенотип связан с нарушением процесса синтеза ДНК в репликативной вилке, а второй-с исчезновением способности инициировать новый цикл репликации хромосомы. (В несинхронизированной культуре индивидуальные клетки мутантов второго класса, находящиеся на различных стадиях репликации, начавшейся еще при пермиссивной температуре, не прекращают синтезировать ДНК после повышения температуры до полного завершения цикла репликации хромосомы.) После сопоставления выделенных мутаций с определенными белками, на которых сказываются эти мутации, можно начать изучение функциональной роли этих белков in vivo. Локализация генов, ответственных за репликацию ДНК, на хромосоме Е. соИ показана на рис. 13.6. [c.112]

На первый взгляд казалось, что это наблюдение свидетельствует о функциональной заменимости ДНК-полимеразы I. Однако дальней-щие исследования показали, что мутация pol А не затрагивает 5 З -экзонуклеазной активности Pol I. Удалось получить добавочные температурочувствительные мутации гена polA, подавляющие 5 -> З -экзонуклеазную активность и летальные при рестриктивной температуре. На основании этих данных был сделан вывод о том, что 5 З -экзонуклеазная активность Pol I является жизненно важной функцией, необходимой для удаления РНК-затравок при репликации, т.е. для обеспечения нормального синтеза полноценной отстающей цепи ДНК (рис. 13.3). В действительности для исходного ро/Л-мутанта было показано, что фрагменты Оказаки встраиваются в протяженные участки цепи ДНК с некоторым запаздыванием, и это свидетельствовало о возможном участии ДНК-полимеразы I в заполнении пустот, возникающих после удаления РНК-затравок из отстающей цепи. В то же время эту функцию Poll нельзя назвать жизненно важной, поскольку в polA-мутантном штамме с ней вполне успешно справляется фермент Pol 1П. [c.116]

Используя температурочувствительные мутанты дрожжей, легко клонировать гены этого организма, ответственные за транспорт. Такой подход чрезвычайно плодотворен, т. к. позволяет напрямую выявить главные белки транспортного механизма, не зная даже, как происходит секреция. Один из дрожжевых генов, отвечающих за секрецию, который был выявлен таким образом - это ген se 4. Полагают, что он кодирует GTP-связывающий белок из семейства ras (см. разд. 12.3.11 и 13.4.6). Биохимические эксперименты на клетках млекопитающих свидетельствуют о ТОМ- что сходный GTP-связываюший белок участвует в везикулярном транспорте и у высщих эукариот Возможно, он регулирует раздевание неклатриновых окаймленных пузырьков перед их связыванием с мембранами. [c.84]

Доказательством независимой репликации се ментов РНК послужили также данные, что все сегменты имек рррА на 5 -копце и У-ОН на З -конце [157, 303]. Последующа генетические свидетельства сегментированного генома были o6ei печены выделением температурочувствительных мутантов [9, [c.34]

В то же время F. Fenner и J. Sambrook 55], занимаясь проблемами генетики вирусов животных, обратили внимание на важную роль условно-летальных мутантов при изучении физиологии вирусной репликации. В том же (1964) году появилось первое сообщение о выделении температурочувствительных (ts) мутантов вируса животных (Синдбис) 32]. Использовав эти результаты, а также доступность бляшкообразующего вирусного штамма (WSN), [c.186]

Смотреть страницы где упоминается термин Мутанты температурочувствительные: [c.253] [c.253] [c.223] [c.230] [c.130] [c.284] [c.244] [c.58] [c.234] [c.8] [c.14] [c.16] [c.21] [c.74] [c.97] [c.190] [c.194] [c.201] [c.204] [c.206] [c.215] [c.220] [c.223] [c.232]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология