Мутационный анализ

Применение мутационного анализа [c.470]

Гибридизация нуклеиновых кислот, диагностические процедуры, способы детекции при использовании ПЦР, мутационный анализ [c.535]

Рис. 14.8. Мутационный анализ гена lad идентифицирует области, ответственные за выполнение различных функций. Протяженность гена пронумерована числом кодонов. На верхней карте показано распределение мутации lad " по всей длине гена и наличие мутаций lad только в N-концевом участке. Мутации lad , нарушающие

Мутационный анализ сегмента длиной 72 п.н. и последовательности, фланкирующей его слева, показал, что эта область протяженностью примерно 90 п. н. СОСТОЙ из субэлементов нескольких разных типов (рис. 8.29). Как правило, по отдельности эти субэлементы-слабые стимуляторы, но, действуя вместе в разных сочетаниях, они обеспечивают высокий уровень транскрипции. [c.51]

Как сравнение аминокислотных последовательностей, так и мутационный анализ гормон-акцеп-торных промоторов выявили необходимые для гормональной регуляции короткие палиндромные последовательности, находящиеся на разном расстоянии перед сайтом начала транскрипции. Гены, транскрипция которых регулируется одними и теми [c.74]

Расщепление предшественников с образованием активных пептидных медиаторов катализируют специфические протеазы. Возможно, изменение их концентрации в клеточных компартментах (например, в аппарате Гольджи и секреторных гранулах), содержащих медиаторы, служит способом контроля скорости образования пептидных медиаторов. К сожалению, идентифицировать и охарактеризовать эти протеазы весьма непросто. В частности, возникают проблемы с отделением специфических протеаз от неспецифических протеолитических ферментов, находящихся в лизосомах. Наиболее успешные эксперименты были проделаны на дрожжах у них с помощью мутационного анализа был выявлен ген, кодирующий протеазу, которая катализирует расщепление предшественника феромона а-фактора. Такая же протеаза ответственна за созревание других пре-белков, а ее аналог, по-видимому, присутствует в клетках млекопитающих. [c.358]

Позиционно-кандидатное картирование состоит в определении хромосомной локализации гена болезни, продукт которого неизвестен, и последующем анализе современных генетических и транскрипционных карт, с тем чтобы выявить кодирующие последовательности (гены, внутригенные EST), находящиеся в этом же районе (рис. 20.30). Весьма вероятно, что одна из этих последовательностей и окажется геном данного заболевания. Если какой-либо из генов-канди-датов охарактеризован, можно провести его мутационный анализ. Как альтернативу можно использовать кандидатные EST в качестве зондов, отобрать с их помощью геномный клон и секвенировать его, а затем также провести му- [c.476]

В селекции растений на устойчивость к заболеваниям большое значение имеет хорошая изученность генетики возбудителя заболевания, спектра его изменчивости по вирулентности, механизмов расообразовательного процесса. В исследовании этих вопросов важную роль может сыграть применение индуцированного мутагенеза. В настоящее время мутанты фитопатогенных микроорганизмов успешно используются как для изучения частной генетики патогена, так и для изучения взаимодействий в системе паразит — хозяин [1]. Мутационный анализ признака вирулентности позволяет до некоторой степени оценить возможность появления в природе определенных рас фитопатогена в результате спонтанного мутирования. Применение мутантов с измененной вирулентностью, возможно, позволит вести упреждающую селекцию растений к расам паразита, которые могут появиться в будущем. [c.334]

Данные, подтверждающие существование гипотетического репрессора, получены при исследовании мутаций гена extra sex ombs (es ). Ген es был впервые идентифицирован благодаря рецессивной мутации с частичной потерей функции, которая приводит к замене пар ног сегментов Т2 и ТЗ на пары ног сегмента Т1. Однако мутационный анализ, приведенный Штрулем, выявил аллели с полной потерей функции es ), а также температурочувствительный аллель (es ). Исследование этих мутаций показало, что ген es действует в течение первых нескольких часов эмбриогенеза, инициируя активность комплекса ВХ-С сегмент-специфическим образом. Мутация es приводит к тому, что все эмбриональные сегменты развиваются по типу А8, т.е. имеет фенотип, ожидаемый для мутации, инактивирующей репрессор генов ВХ-С. [c.273]

Зрелые Т-клетки, имеющие D8, узнают антиген, связанный с белками МНС класса II. Первые - это клетки-киллеры или Т-цитотоксические клетки, вторые - Т-хелперы [283-285]. Итак, функционирование белка D8 обусловлено его ассоциацией с неполиморфными областями молекул МНС-1 клетки-мишени [286, 287]. С помощью мутационного анализа бьша идентифицирована гептапеп-тидная последовательность аЗ домена МНС класса I, с которой связывается D8 [288, 289]. Экспериментально показано, что белки DS и T R узнают различные домены молекулы МНС-1. Следовательно, Т-клеточная активация может включать образование тройного комплекса, в котором находящиеся на Т-клеточной поверхности D8 и T R ассоциированы с одной и той же молекулой МНС-1 клетки-мишени. По всей видимости, взаимодействие D8 с молекулами МНС-1 запускает внутриклеточную сигнальную систему через белок рЗб , sr -связанную тирозинкиназу, непосредственно ассоциированную в липоид-ных клетках как с D4, так и D8 [290]. В этом случае комплекс D8-р56 может функционировать практически тем же путем, что и рецепторы фактора роста, в которых связь с внутриклеточным доменом активирует внутриклеточную тирозинкиназу. [c.70]

Стехиометрия и характер взаимодействия субъединиц, образующих компоненты рецепторного комплекса Т-клетки, остаются предметом многостороннего изучения. С помощью мутационного анализа in vitro установлено, что заряженные аминокислотные остатки в составе трансмембранных участков полипептидных цепей имеют решающее значение для сборки и экспрессии полного рецепторного комплекса на поверхности клетки. Как предполагается, при сборке воз- [c.116]

С продуктами МНС класса II связаны коре-цепторные молекулы D4. Результаты мутационного анализа HLA-DR1 указывают на то, что D4 присоединяется к Рз-домену. Предположительно ассоциация D4 с ТкР-комплек-сом важна для мобилизации киназы р5б , которая связывается с цитоплазматическим сегментом D4 и индуцирует тем самым активацию Т-клеток. [c.122]

Если принять во внимание частоту, с которой встречаются сайты связывания Spl в генах млекопитающих, то относительная избыточность Spl не кажется удивительной. Например, в одной клетке HeLa (часто используемая линия клеток, полученная из опухоли шейки матки человека) содержится от 5000 до 10000 молекул Spl. Благодаря высокой концентрации Spl удается получать этот белок в почти гомогенном виде, а также клонировать кодирующую его ДНК. Размер белковой молекулы, оцененный исходя из нуклеотидной последовательности клонированной ДНК, равен 80 кДа. хотя выделенный белок Spl имеет эффективную мол. массу 90- 100 кДа. Возможно, это связано с гликозилиро-ванием Spl in vivo, хотя для ядерных белков такая модификация не характерна. Мутационный анализ различных участков последовательности, кодирующей Spl, показал, что один из доменов этого белка необходим для присоединения к ДНК, а другие для активации транскрипции (рис. 8.34). Домен связывания ДНК находится вблизи С-конца и имеет три участка. Каждый участок содержит расположенные определенным образом остатки цистеина и гистидина, которые образуют хелатную связь с Zn (так называемые цинковые пальцы разд. 8.7.а). Изме- [c.55]

Регуляторные элементы, контролирующие транскрипцию промотора металлотионеина II человека, были идентифицированы при помощи мутационного анализа и исследования транскрипции с [c.83]

Транскрипция инициируется при образовании стабильного комплекса между холоферментом и специфической последовательностью, называемой промотором и располагаюшейся в начале всех транскрипционных единиц (рис. 3.7). Изучение нуклеотидной последовательности более чем 50 разных промоторных сайтов прокариот и мутационный анализ выявили только два консервативных участка, по-видимому Ифаюших ключевую роль в узнавании и функционировании промотора. Одна из этих последовательностей состоит из шести или семи пар оснований и расположена на расстоянии примерно 10 оснований до того нуклеотида, с которого начинается транскрипция (+1) этот сигнал обычно обозначают как -10-последовательность, или Прибнов-боЕС в честь ее открывателя. Сравнительный анализ -10-последовательностей примерно 50 промоторов прокариот показал, что все они немного отличаются от консенсус-последовательности ТАТААТ (рис. 3.8). Подчеркнутый Т присутствует почти во всех промоторах, тогда как по другим позициям в каждом промоторе может наблюдаться от одного до нескольких вариантов. [c.123]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология