Каллус первичный

Рис. 20-70. Культуры каллуса можно поддерживать в жидкой среде в виде суспензии одиночных клеток. На микрофотографии показаны две такие клетки из каллуса платана. Они сильно вакуолизированы, и от ядра отходят цитоплазматические тяжи. У этих клеток есть первичная клеточная

Частота клеток различной плоидвости в первичном каллусе (а) и в пассированной культуре (б) [c.118]

Из уравнений видно, что все факторы, за исключением Хь оказьшают прямое положительное или отрицательное действие на изучаемые процессы. Так, значение фактора Х2 в обоих уравнениях свидетельствуют о том, что добавление его в питательную среду стимулирует рост каллуса и образование адвентивных почек, а уменьшение концентрации зеатина и ИУК (Хз и Х4, соответственно) увеличивает выход адвентивных почек с одного каллуса. Таким образом, за один эксперимент были определены факторы, влияющие на образование каллуса и адвентивных почек, и определен оптимальный состав питательной среды для начального этапа клонального мнкроразмножения томатов через первичный каллус. [c.123]

Каллус можно механически разделить на одиночные клетки и небольшие комочки клеток и выращивать их затем в суспензионной культуре. В такой культуре клетки очень похожи друг на друга все они имеют тонкую первичную клеточную стенку и крупные вакуоли, пересеченные тонкими цитоплазматическими нитями (рис. 19-66). В ряде случаев из одиночных клеток, выделенных из суспензии, удавалось вырастить целое взрослое растение. Эта [c.205]

Для того чтобы не произошло старения, утраты способности к делению и отмирания каллусных клеток, первичный каллус, возникающий на эксплантах, через 4—6 недель переносят на свежую питательную среду. Эту операцию называют пассированием. При регулярном пассировании способность к делению может поддерживаться в течение десятков лет. [c.86]

Эксплант — фрагмент ткани или органа, инкубируемый на питательной среде самостоятельно или используемый для получения первичного каллуса. [c.468]

Суспензионную культуру можно получить и из фрагмента органа растения (диски запасающей паренхимы мясистых корней моркови, петрушки, клубней картофеля и др.), однако этот путь более трудоемкий и требует большего времени. Клетки экспланта должны при этом образовать первичный каллус, и только после этого поверхностные каллусные клетки, попавшие в жидкую среду и размножившиеся в ней, дадут начало линии, способной расти в суспензии. [c.22]

Отмечают регенерацию побегов из Кт - и контрольного каллусов. Как показано на рис. регенерация побегов из недифференцированных клеток — гораздо более редкое событие, чем формирование побегов из первичных эксплантатов. [c.138]

Следует заметить, что для успешной инициации первичного каллуса в питательную среду часто необходимо вводить антиоксиданты (глютатион — 5 мг/л, диэтилдитиокарбамат — 5, цистеин — 5, аскорбиновую кислоту — 10, поливинилпирролидон — 250—500 мг/л и др.), которые будут ингибировать ферменты, окисляющие фенолы. Продукты окисления фенолов токсичны и подавляют деление клеток эксплантата. [c.237]

Для получения культивируемых каллусных клеток фрагменты тканей разных органов высших растений (экспланты) помещают на искусственную питательную среду in vitro в пробирки, колбы, чашки Петри. Процесс получения первичного каллуса и поддержание пересадочной культуры требует строго стерильных условий. Для этого с помощью растворов, содержащих активный хлор или ртуть (гипохлориты, сулема, диацид), к которым для лучшего смачивания добавлены детергенты, стерилизуют экспланты, тщательно отмывая их затем от употребляемого раствора стерильной водой. Стерилизуют в автоклаве или фильтрованием через ультрафильтры питательную среду. В автоклаве при давлении 19,6- 10 Па (2 атм) в течение 1 ч или сухим паром в шкафах при 160°С в течение 1,5 ч стерилизуют посуду, инструменты, материалы, необходимые для работы. Манипуляции с культурами проводят в боксах микробиологического типа, облучаемых перед работой ультрафиолетом, или в ламинар-боксах, где асептика достигается постоянной подачей стерильного воздуха в рабочий объем (Р. Г. Бутенко, 1964). [c.14]

НИИ молекулярных механизмов дедифференцировки, действия гормонов и других факторов, индуцирующих деление, небезразлично, в какой фазе клеточного цикла данная клетка перешла к дифференцировКе, т. е. с какой фазы ей предстоит двигаться повторно по циклу. Часто эксплант, используемый для получения каллуса, является фрагментом органа и включает ткани, клетки которых различно дифференцированы. Так, взятый целиком фрагмент стебля имеет в своем составе клетки — эпидермальные, первичной коровой паренхимы, камбия и сосудистой системы, сердцевинной паренхимы. В разных условиях культивирования и в зависимости от различий в физиологическом состоянии исходного растения можно наблюдать преимущественную пролиферацию клеток камбия и его молодых дериватов, коры и сердцевинной паренхимы. Различное тканевое происхождение первичных каллусных клеток является одной из причин гетерогенности культуры каллусной ткани, так как некоторые функциональные особенности исходных дифференцированных клеток передаются в ряду клеточных поколений как стойкие модификации или эпигенетически наследуемые признаки. [c.15]

В клетках экспланта, состоящего из неделящихся, специализированных клеток, в самом начале культивирования могут наблюдаться изменения в метаболизме, вызываемые и травматическими синтезами, и дедифференцировкой, и подготовкой к процессу деления. Для разделения этих процессов можно рекомендовать прединкубацию эксплантов на среде без гормонов в течение 3—6 сут. Это позволяет исключить не только изменения, связанные с травмой, но и возможное не контролируемое влияние эндогенных гормонов экспланта на изучаемые процессы. При соблюдении указанного условия становится ясной роль в индукции клеточного деления фитогормонов группы ауксинов и цито-кининов, дедифференцировке специализированных клеток и в поддержании каллусных клеток в делящемся состоянии, приводящем к образованию первичного каллуса. При этом наблюдаются сложные взаимодействия между ауксинами и цитокинина-ми. Присутствие в среде одного ауксина определяет переход специализированной клетки из покоящейся фазы Со к вступлению в 5-фазу клеточного цикла. Однако для завершения фазы синтеза ядерной ДНК, синтеза белков, стимулирующих переход [c.15]

Первичный каллус, возникший на эксплантах через 4—6 недель (в зависимости от темпов роста), переносится на свежую питательную среду (субкультивируется). Размер транспланта (переносимого кусочка) при культивировании на агаризованной питательной среде обычно колеблется от 60 до 100 мг массы ткани на 30—40 мл питательной среды. [c.17]

Резюмируя, можно отметить, что техника культивирования тканей растений позволяет получить длительную, пересадочную каллусную культуру из любых живых тканевых клеток интакт-ного растения. Клетки различно дифференцированные (в том числе и меристематические) переходят in vitro к сложному процессу дедифференцнации, теряют присущую им структурную организацию и специфические функции и индуцируются к делению, образуя первичный каллус. [c.17]

Следует отметить, что тестирование активности NPT-II и блоттннг-гибридизация по Саузерну в случае Km -каллусов льна и регенерированных Кт -побегов обеспечивает строгое доказательство того, что в описанных выше условиях вырастающий на гипокотилях льна Кт -каллус представляет собой результат одного или очень небольшого числа первичных событий трансформации и, видимо, целиком состоит из клональных потомков первоначально трансформированных клеток [10]. [c.138]

Техника культивирования каллусных тканей. Большинство эксплантатов образуют первичный каллус, который можно субкультиви-ровать, через 6—8 нед. В асептических условиях каллус следует перенести пинцетом в стерильные чашки Петри, скальпелем отделить каллусную ткань от исходного эксплантата или некротических участков в центре и на нижней стороне каллуса и, разделив каллус на несколько кусочков (5X5 мм), перенести на свежую питательную среду. (Рекомендуется положить кусочек срезанной поверхностью на агар и осторожно прижать его к среде. Использованные пинцеты и скальпели опускаются в 96 %-ный спирт и в процессе работы обжигаются в пламени спиртовки и остужаются между листами стерильной бумаги. [c.240]

Клетьси для суспензионных культур получают из каллусных тканей, помещая последние в жидкие питательные среды и подвергая их перемешиванию с помощью разнообразных качалок или встряхивателей. Суспензионную культуру можно получить и из растительных тканей, однако это более трудоемьсий путь, требующий большего времени. Клетьси экспланта при этом способе должны сначала образовать первичный каллус, и лишь после попадания возникших на поверхности каллусных [c.96]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология