Окрашивание гелей комплексами серебра

Чувствительность метода 0,045 мкг белка в полосе геля. См. также в работе [380] окрашивание белков комплексами серебра в агарозных гелях. [c.309]

Для окрашивания гелей применяют также реагенты общего типа кумасси голубой [14], комплексы серебра [47, 48, 52] или более специфичные, например для идентификации гликопептидов [17, 28, 69] — реагент Шиффа [32], модифицированный вариант окрашивания комплексами серебра [16], лектины, содержащие радиоактивную [39] или флуоресцентную метку [23] (см. также гл. 8). [c.229]

Крупнопористые ПААГ [295, 244]. Крупнопористые гели используются для электрофоретического фракционирования макромолекул с молекулярными массами >10 Агарозные гели становятся темными при обработке комплексами серебра, поэтому описанная выше методика окрашивания не может быть к ним применена [35]. Ниже приводится методика окрашивания крупнопористых гелей, приготовленных на основе 2,55%-ного полиакриламида с 2,75% сшивок с метилен бис акрил амидом. [c.307]

Двойное окрашивание кумасси и комплексом серебра [176]. Предварительная обработка кумасси с одновременной фиксацией формальдегидом повышает интенсивность окрашивания и облегчает идентификацию полос на геле. [c.310]

Однако в 100—200 раз чувствительнее реакция обнаружения белков посредством окрашивания их в гелях аммиачными комплексами серебра. [c.28]

Окрашивание растворами солей серебра. Наиболее чувствительный метод обнаружения белковых зон заключается в пропитывании геля раствором нитрата серебра затем гель обрабатывают восстановителем и раствором соды. При этом комплексы полипептид — серебро обнаруживаются в виде черных полос. Проявления солями серебра можно проводить после окрашивания красителем кумасси, который предварительно отмывают смесью метанол — уксусная кислота [138]. Наборы реактивов для окрашивания гелей солями серебра выпускаются компаниями Upjohn (гелькод) и Bio-Rad. Оба набора повышают чувствительность обнаружения с помощью кумаси в 250 и 50 раз соответственно. Гелькод позволяет обнаруживать белки при содержании 5—10 нг [154]. Как оттенок, так и интенсивность окрашивания солями серебра зависят от свойства анализируемого белка. Это свойство можно использовать для контроля за выделением исследуемого белка из сложной смеси. (Относительно методов обнаружения в геле см. разд. 8.19.) Поскольку метод обладает высокой чувствительностью, необходимо очень [c.19]

Впервые окрашивание комплексами серебра разделенных в электрофоретических гелях белков было применепо в 1972 [197], по потенциальные возмож1ЮСти этого метода были открыты позднее [359]. Методы окрашивания белков комплексами серебра в 100—200 раз более чувствительны, чем основанные на применении кумасси бриллиантового голубого. Из шести предложенных методик с этим реагентом наилучшие характеризовались пределом обнаружения 0,5 нг белка/мм поверхности ПААГ [282]. Чувствительность окрашивания комплексами серебра несколько варьирует в зависимости от свойств и природы белка, как показано в сравнительном исследовании четырех различных методик применительно к белкам секрета околоушной железы человека, причем выбор оптимального варианта [c.302]

С помощью комплексов серебра удалось обнаружить пептиды в ДСН — ПААГ, получеппые из нанограммовых количеств белка [222]. В работе сделан вывод, что метод более быстр, дешев и безопасен, чем радиоактивное мечение и приготовление авторадиограмм или флуореграмм. Были использованы коммерческие наборы реагентов фирмы Upjohn Diagnosti s для гелей толщиной 1,5 мм [324] и рекомендован для окрашивания более тонких гелей по методике, описанной в работе [408] (набор фирмы Bio-Rad). [c.303]

Окрашивание комплексами серебра — первый 11адежпый метод обнаружения гистонов в гелях, содержащих тритон, кислоту и мочевину, с близкой к линейной зависимостью интенсивности окраски от количества белка при его содержании О—50 нг [259]. [c.303]

Окрашивание белков в гелях с помощью красителей уступает по чувствительности описанным выше методикам с применением комплексов серебра, но его проще осуществлять в повседневной практике. Наиболее широко используется краситель кумасси бриллианговын голубой, но существует и много других модификаций метода. Окрашенные кумасси полосы белков могу г быть сфотографированы при освещении лампой дневного свега иа иоляроидную пленку типа 665 (фокусное расстояние 32, экспозиция 0,5 с) с желтым светофильтром [353], [c.304]

Агарозные гели после изоэлектрофокусирования. Метод окрашивания комплексами серебра в течение 10 мин в 20 раз более чувствителен, чем окрашивание кумасси R250, и может применяться после окрашивания красителем [211]. [c.308]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология