Вставки в нуклеиновых кислотах

Особый интерес представляет взаимодействие нуклеиновых кислот с некоторыми полициклическими ароматическими (основными) красителями, катионы которых имеют плоское строение. Примером таких соединений могут служить акридины (профлавин, акридиновый оранжевый и т. д.). Красители этого типа уже давно используются для окрашивания биологических объектов. Избирательно связываясь с ДНК или РНК, они переводят их в видимую форму. Этот эффект легко наблюдать по поглощению или флуоресценции красителей. В последнее время такие красители приобрели исключительно важное значение как мутагены, обладающие селективным действием, а именно способностью вызывать вставки или делеции (т. е. включение или выпадение единичных нуклеотидов) при репликации ДНК и таким путем специфически подавлять эту репликацию (см. стр. 492). [c.148]

Рестриктазы вырезают участки ДНК, убирая нежелательные вставки, а лигазы обеспечивают сшивку фрагментов нуклеиновой кислоты. ДНК-полимеразы ответственны за репликацию дочерней ДНК по материнской. ДНК-зкависимые-РНК-полимеразы отвечают за транскрипцию, осуществляют построение РНК на матрице ДНК. [c.19]

Поскольку в экспериментальных условиях невозможно работать с одной копией гена, создание необходимого числа идентичных копий гена (или его частей) является первой и одной из основных задач генной инженерии. Для ее решения используют метод молекулярного клонирования [61]. Сущность метода заключается в том, что нуклеотидная последовательность, которую необходимо выделить или размножить, ковалентно встраивается в самореплицирующиеся молекулы нуклеиновой кислоты, называемые векторами. Далее такая последовательность нуклеотидов в составе вектора вводится в клетки про- или эукариотического организма, и эти гибридные клетки в селективных условиях, обеспечивающих сохранение вектора внутри клеток, выращивают на питательной среде. В результате образуется клон клеток, теоретически содержащих идентичные векторные молекулы с одной и той же вставкой чужеродной последовательности нуклеотидов. Объединение молекул клонируемой последовательности нуклеотидов и вектора является не чем иным как рекомбинацией ш vitro, поэтому такие гибридные молекулы называют рекомбинантными молекулами. [c.39]

Щелочные фосфатазы бактерий (ВАР) и кишечника теленка ( IAP) катализируют удаление 5 -фосфатных групп ДНК или РНК, а также расщепление макроэргических связей рибо- и дез-оксирибонуклеозидтрифосфатов. Их используют при подготовке фрагментов нуклеиновых кислот к введению З -концевой радиоактивной метки З2р а также для предотвращения лигирования векторных молекул ДНК самих на себя. Как уже упоминалось выше, ДНК-лигаза способна образовывать фосфодиэфирные связи в одноцепочечных разрывах лишь при наличии в них 5 -концевого фосфата. Удаление 5 -концевых фосфатных групп молекул вектора, линеаризованных с помощью одной рестриктазы во время подготовки его для клонирования соответствующего фрагмента ДНК, предотвращает образование кольцевых молекул вектора (без вставки), а также его олигомеров во время лигирования с клонируемой последовательностью. Необходимые для лигирования со вставкой фосфатные группы содержатся в самих клонируемых фрагментах ДНК, а остающиеся в результате неполного лигирования два одноцепочечных разрыва репарируются in vivo после введения вектора со вставкой в бактериальные клетки. Гены секретируемых щелочных фосфатаз находят применение и в качестве высокочувствительных генов-репортеров при исследовании функционирования регуляторных элементов различных генов в прокариотических и дрожжевых системах экспрессии, а также в клетках млекопитающих [91]. [c.65]

Особый интерес представляют работы [57] по связыванию нуклеиновых оснований с линейным полиэтиленимином с помощью оптически активной вставки . Результатом введения хиральных центров должна стать спиральная структура макромолекул поликатионных САНК в комплексе друг с другом или с полинуклеотидами. Были синтезированы САНК общей формулы (1.21), содержащие несколько рядом расположенных хиральных центров [58] аналогично моделируемым нуклеиновым кислотам [c.29]

САНК (1.21 %)астворимы в воде, а некоторые из них по оптическим характеристикам напоминают нативные нуклеиновые кислоты, что указывает на наличие спиральных структур. Введение остатка Ь-пролина во вставку разрушает эти структуры. Некоторые из полученных полимеров, например полимер (1.21) си = 1, Н = НиН = СНз, В = урацил-1, у - 100 и X = О, обладают значительной противовирусной активностью. Этот полимер взаимодействует с поли-(А). [c.29]

Выбравр = 0,99 и зная средний размер вставок, можно рассчитать необходимый объем библиотек для разных геномов (табл. 2.1). Библиотеки такого объема называют представительными. Их можно использовать для процедуры, получившей название прогулка по хромосоме . Суть этого подхода состоит в том, что при помощи гибридизации нуклеиновых кислот выявляют клоны гибридов, вставки у кото- [c.103]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология