Контроль качества препаратов антител

В практическом отношении антитела преимущественно применялись для решения проблем идентификации и количественного определения веществ. Здесь имеется в виду использование белков как природных маркеров некоторых сырьевых материалов с целью распознавания их в продуктах питания для контроля качества. С этой целью изготовлены специфические иммунные сыворотки этих белков. Так, например, методы преципитации в геле послужили для обнаружения в пшеничной муке примесей ячменной муки [76] или в муке из твердой пшеницы примесей муки из мягкой пшеницы [90, 91]. Они могут быть использованы также для проверки отсутствия клейковины в кормовых рационах [7]. В такой стране, как ФРГ, где законодательство разрешает использовать в производстве пива только солод из ячменя и хмель, исключая особенно зерно риса и кукурузы как более дешевые источники крахмала, для контроля поступающего в продажу пива применили метод иммунохимической идентификации [98]. Иммунохимический подход (метод преципитации и RIA) также использовали для контроля запрещаемых законом в некоторых странах добавок в пиво препаратов протеаз как средства стабилизации [32]. В этих двух последних случаях проблема распознавания сложна, поскольку изготовление пива предусматривает вспенивание сусла при перемешивании, пастеризацию при стерилизации, т. е. происходит в условиях денатурации белков. Задача распознавания денатурированных бел- [c.112]

Реагенты этой товарной позиции представлены либо на подложке, либо в форме препаратов и содержат более одной составляющей. Например, они могут содержать примеси из двух или более реагентов или единичных реагентов, растворенных в растворах, кроме воды. Они могут также быть представлены в форме бумаги, пластиков или других материалов (используемых в качестве подложки или основы), пропитанных или покрытых одним или более диагностических или лабораторных реагентов, таких как лакмусовая, pH или pole-finding бумага (бумага для определения полярности) или предварительно покрытые иммуно-контрольные пластинки. Реагенты этой товарной позиции могут также быть упакованы в виде наборов, состоящих из нескольких компонентов, даже если один или более компонентов являются отдельными химически определенными соединениями группы 28 или группы 29, синтетическим красящим веществом товарной позиции 3204 или любым другим веществом, которое будучи представленным отдельно классифицируется в другой товарной позиции. Примерами таких наборов являются такие, которые используются для контроля глюкозы в крови, кетонов в моче и т.п., или такие, которые основаны на ферментах. Однако диагностические наборы, имеющие основные свойства продуктов товарной позиции 3002 или 3006 (например, основанные на моноклональных или поликлональных антителах), исключаются из этой товарной позиции. [c.391]

Исключительно важен иммуноферментный анализ при производстве препаратов медицинского назначения, в том числе из животного сырья и донорской крови. Примеси сопутствующих веществ или вирусных антигенов могут оказаться исключительно вредными для организма. Так, например, актуальной является проблема обнаружения в донорской кр.ови, используемой для переливания или получения медицинских препаратов, вируса гепатита В. Наличие белковых примесей в препаратах инсулина, который, как известно, длительно вводится в организм, приводит к выработке антител, в результате чего эффективность его действия резко снижается. Именно поэтому необходим эффективный контроль за наличием примесей, которые не должны превышать 10 %. Иммуноферментный анализ позволяет обеспечить соответствующий контроль качества препаратов инсулина. [c.122]

Контроль качества клеточные линии и препараты антител [c.146]

Работа с антителами зачастую требует от исследователя самостоятельного получения реагентов, в связи с чем в первую очередь возникает задача получения иммуногена. В случае растворимых простых иммуногенов для достижения хороших результатов молекулы должны быть как можно лучше очищены. Поэтому первый рассматриваемый метод — это оценка чистоты антигенного препарата. После сбора антисыворотки необходимо оценить ее качество. В зависимости от характера тест-системы, используемой на заключительном этапе, сыворотку необходимо проверить на специфичность, титр и параметры связывания. Это требует знания процедур контроля качества, в некоторых случаях включающих в себя определение изотопического спектра антител. На заключительном этапе важен правильный выбор теста (табл. 1.2)—.например, выбор между иммунофлуоресцентным и иммунопероксидазным методами в случае тканевых и клеточных антигенов либо между агглютинацией, ELISA, РИА и реакциями преципитации в случае растворимых антигенов. При использовании некоторых тест-систем может потребоваться очистка антител для последующего мечения либо получение и мечение антиглобулинового реагента. К оценке преимуществ и недостатков тест-систем следует подходить осторожно. [c.30]

Для каждого фильтра, анализируемого с помощью описанного оборудования, в качестве меры ферментативной активности выступает скорость нарастания сигнала, выражаемая обычно в милливольтах в минуту. Типичный набор кривых для серий калибровочных стандартных препаратов дигоксина показан на рис. 20-5. Наибольшая скорость реакции соответствует минимальной концентрации дигоксина в препарате с ростом концентрации скорость постепенно уменьшается. На основании этих данных строят калибровочную кривую. Определение скорости реакции характеризуется высоким отношением сигнала к фону и линейностью нарастания сигнала на протяжении интервала в несколько минут. Обычно измерение для каждого фильтра продолжается в течение 30 с. Особенно важно отметить чрезвычайно низкую скорость реакции, наблюдаемую для отрицательного контроля (рис. 20-5). Этот контроль представляет собой фильтр, покрытый слоем антител, отличных от антител к дигоксину. Специфическое связывание с таким фильтром невозможно. Чрезвычайно низкая скорость реакции в отрицательном контроле свидетельствует о том, что в системе практически не происходит неспецифического связывания. Стекловолокнистая фильтровальная бумага сама по себе в отношении адсорбции фактически инертна, а после покрытия анти- [c.306]

Для каждой системы необходимо установить величину порогового уровня, позволяющую надежно различать сигналы, соответствующие нормальным (т. е. отрицательным) и аномальным (т. е. положительным) образцам сыворотки. С этой целью методом ELISA в подобранных стандартных условиях тестируют широкий набор препаратов сыворотки, которые по данным других общепринятых методов анализа не содержат искомых антител. Обычно за величину порогового уровня, разделяющего нормальные и аномальные сыворотки, принимают полученное в подобной серии тестов среднее значение, плюс 2—3-кратное значение стандартного отклонения S. В некоторых случаях разрыв между сигналами нормальных и аномальных препаратов оказывается настолько велик, что в качестве порогового уровня можно использовать среднее значение в серии отрицательных контролей -1-45. Это наблюдалось при работе с системами для тестирования инфекционного мононуклеоза (гетерофильные антитела Пауля — Бюннелла) и определения антител, специфичных к тиреоглобулину. Было установлено, что для некоторых тестов имеет смысл выделять некоторую область пограничных (промежуточных) значений, которые нельзя, с уверенностью отнести ни к нормальным, ни к аномальным. [c.198]

ФСБ-Т), и разливают по 200 мкл в лунки илатА (каждому препарату сыворотки соответствует ряд лунок по вертикали) таким образом, чтобы каждая сыворотка тестировалась с восемью различными антигенами. Инкубируют I мин при 37 С. Затем удаляют растворы из лунок, заполняю/ их нагретым до 37 С раствором ФСБ-Т, инкубируют 5 мин Упри 37 °С, промывают 0,15%-ным раствором твина-20. В к дую лунку добавляют раствор ферментного конъюгата (на снове козьих антител против IgG человека, разведенный ФСБ-Т в 1500 раз) и инкубируют 15 мин при 37 С. Промывают так же, как и на предыдущей стадии, добавляя промывку водой, и затем обрабатывают раствором, содержащим Субстрат (0,03% Н2О2) и хромоген (0,1% о-фенилендиамина) на основе 0,07 М. ФСБ, pH 5,0. Реакцию останавливают добавлением 8 и. серной кислоты (50 мкл/лунку), контролируя время инкубации по развитию окраски в положительном и отрицательном контролях. При проведении рутинных диагностических тестов в качестве внутренних стандартов сравнения для всей мультиантигенной платы использовали амебные антигены. Измеряют поглощение при 492 нм. Содержимое лунок с оптической плотностью выше 2,0 разводят 1 5 раствором субстрата в смеси с кислотой и после этого снова измеряют А492- [c.370]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология