Агар для метода преципитации в геле

Принцип метода. Растворимый антиген диффундирует в агаровом геле, содержаш ем иммунную сыворотку. В том участке геля, где возникает его относительный избыток, в агаре образуется полоса преципитации. [c.127]

Иммунодиффузию в агаре можно проводить по методу Хансона [14]. После гель-фильтрации на пластинках 10-20 см гель сефадекса удаляют механическим путем, оставляя только полоску шириной 3—5 см, содержащую разделяемые белки. Затем пластинку заливают расплавленным агаром (охлажденным до 50 °С), который при застывании образует гель толщиной 1 мм. При аккуратном выполнении этой операции агар покрывает полоску сефадекса, не нарушая слоя. Таким путем удается получить хорошие зоны преципитации, однако следует заметить, что эта методика требует большого экспериментального навыка. Иммунодиффузию в геле агара можно также выполнять после переноса белков на ацетилцеллюлозные мембраны [57] или полоски фильтровальной бумаги [13]. Полоски помещают на агаровый гель, где осуществляют иммунодиффузию. [c.271]

С этой точки зрения вряд ли имеет смысл использовать для контроля за развитием иммунного ответа и описанные ниже методы, основанные на диффузии и преципитации иммунных комплексов в гелях агарозы или агара, хотя это и встречается нередко в научной литературе. Чувствительность диффузионных методов того же порядка, что и для преципитации в жидкости. Возможность окрашивания преципитатов в геле дает относя-тельно небольшой выигрыш в чувствительности, поскольку лимитирующим фактором является образование пространственной сетки преципитата. Вместе с тем, все диффузионные методы требуют много времени. [c.124]

После затвердения агара в геле вырезают лунки и заполняют их раствором антигена или антисыворотки. Диффундируя в геле, антиген или антитела встречаются с соответствующим специфичес-, КИМ партнером, что приводит к весьма быстрому появлению колец преципитации вокруг лунок. Реакцию можно учитывать уже через 30 мин, но окончательную оценку следует проводить через 24 ч инкубации при 37°С во влажной камере. Ошибка этого метода количественного определения антигенов й антител составляет 25%. Точность метода повышается, если ставить много параллельных проб. [c.158]

В качестве поддерживающей среды можно применять и агаровый гель, но размер пор в нем гораздо больше, и движение белковых частиц происходит беспрепятственно (гель с низкой разрешающей способностью ). Большая скорость диффузии и прозрачность геля были использованы Грабаром и Уильямсом, которые создали так называемый иммуноэлектрофорез , являющийся развитием ранее существовавшего метода имму но диффузии . Суть иммуноэлектрофореза состоит в том, что для проявления электрофореграммы и идентификации белковых компонентов применяется преципитация их иммунной сывороткой крови. После предварительного электрофореза на бумаге из последней вырезают продольную полоску, не проявляя зон. Еще влажную бумагу прижимают к поверхности агарового геля. Параллельно этой полоске вырезают канавку в агаре и наливают в нее иммунную сыворотку. В результате встречной диффузии антитело встречается с антигеном происходит преципитация, и в прозрачном геле образуются дугообразные ясно видимые полосы, которые можно еще окрасить. [c.99]

Самым распространенным методом определения антигена и антител является преципитация в агаре (реакция двойной диффузии в геле по Оухтерлони). Преимуществами данной реакции являются относительная простота, высокая специфичность, отсутствие ложноположительных и ложноотрицательных ответов, небольшой расход материалов и возможность определения полноты антигенной идентичности. Недостатками реакции являются низкая чувствительность, длительность получение предварительного ответа через 24 ч, а окончательного—лишь спустя 48—72 ч. Для исследования берут кровь больного в количестве, необходимом для получения 0,3 мл сьшоротки. Реакции ставят на пластинах, в 1% агаре, в котором вырезают лунки для ингредиентов реакции. В качестве тест-системы используют стандартный австралийский антиген и соответствующую специфическую антисьшоротку. Учет реакции проводят через 1—3 дня по появлении дуг преципитации между лунками. [c.248]

Большинство преципитирующих антител относится к классу иммуноглобулинов О (1дО), обладающих лишь очень слабым отрицательным зарядом при pH 8—9. Поэтому электроосмоти-ческий поток смещает 1 0 к катоду. Электроэндосмос заметно уменьшается при замене агара агарозой. Путем подбора определенных соотношений агара и агарозы можно регулировать скорость эндосмоса, создавая тем самым оптимальные условия для электросинереза. Очевидно, что антитела следует помещать ближе к аноду, а антиген — ближе к катоду. Если расположить рядом несколько лунок с антигенами, то последние можно сравнивать между собой подобно тому, как это делается в методе двойной иммунодиффузии [186]. Видимые линии преципитации образуются в течение 1—2 ч. Избыток реагентов удаляют, продолжая электрофорез после образования преципитатов. При этом нет надобности отмывать гель перед окрашиванием, что позволяет в течение 3—4 ч получить полную картину окрашенных полос преципитации. [c.247]

Реакция преципитации в геле Преиипитац11я комплекса антиг ен-антитело непосредственно в инертном геле (как правило, агаре или агарозе) нашла широкое применение для анализа антигенов. Совреме1шые модификации метода основаны на том, что взаимодействие антигена и антитела происходит непосредственно в толще геля, куда реагирующие соединения поступают за [c.253]

Принцип совмещения электрофоретической миграции антигена в агаре с его преципитацией под действием антител был развит в 1966 г. Лореллом [И], который разработал метод ракетного иммуноэлектрофореза для быстрой оценки количества индивидуальных антигенов в смеси с помощью моноспецифических антител, введенных в гель, а также двумерный (перекрестный) иммуноэлектрофорез, позволяющий оценить как качественный, так и количественный состав сложной смеси антигенов с помощью полиспецифических антисывороток. [c.12]

В основу метода определения токсигенпости положен принцип взаимодействия дифтерийного токсина и антитоксической противодифтерийной сыворотки, диффундирующих в толщу агара и образующих в нем зоны преципитации (рис. 28). Однако при испытании дифтерийных культур на токсигенность нужно иметь в виду, что появление преципитатов в агаровом геле у дифтерийных культур возможно за счет взаимодействия не только токсина с антитоксином (специфические преципитаты), но и антибактериальных антител с соответствующим антигеном микробной клетки (неспецифические преципитаты). Неспецифические преципитаты могут образовываться у токсигенных и нетоксигенных дифтерийных культур. От специфических эти преципитаты отличаются слабой выраженностью, нечеткостью контуров и более поздним обра- [c.284]

Реакция преципитации может проводиться в агаровом геле. Схематически этот метод изображен на рис. 10-2, А. Пробирку частично заполняют агаром, содержащим антисыворотку, а сверху наносят антиген. Антиген диффундирует в агар с образованием движущегося фронта образования преципитата. В данном случае преципитат представляет собой зону вследствие обратимости реакции преципитации, о чем упоминалось в предыдущем разделе. Таким образом, в верхней части пробирки из-за избытка антигена наблюдается небольшое количество преципитина (рис. 10-1). При продолжающейся диффузии антигена зона преципитата перемещается. Это происходит потому, что в передней части зоны преимущественно содержится антитело, тогда как в задней имеется избыток антигена избыток антигена растворяет преципитат (рис. 10 1). Если и антиген, и антитело представляют собой смеси некоторых реагирующих веществ, то в результате будет наблюдаться несколько зон, предположительно по одной на каждый комплекс антиген — антитело. Разделение этих зон зависит от коэффициентов диффузии антигенов и относительных концентраций антигенов и антител таким образом, если два антигена имеют однаковые коэффициенты диффузии, а концентрации антигенов [c.251]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология