также метод бляшек

Практически все генетические эксперименты с фагами выполняются без непосредственного наблюдения над родителями и потомством. Для определения фенотипов изучаемых генетических вариантов используют косвенные методы. Как уже говорилось в гл. 4, присутствие фагов обычно устанавливают по их способности убивать заражаемые ими бактерии. О присутствии фагов свидетельствуют стерильные пятна (их называют также негативными колониями или бляшками) в сплошном слое бактериальных клеток на поверхности чашки Петри (рис. 6.1). Видимое на поверхности чашки прозрачное пятно - результат гибели бактериальных клеток-хозяев, зараженных потомством этого фага. Следовательно, прежде чем рассматривать генетику фагов, нам надо познакомиться с методами описания фенотипов мутантных фагов. Более углубленно генетика фагов будет рассмотрена в следующей главе. [c.160]

К фенотипическим особенностям вирусов гриппа относятся различия биологической активности в разных клеточных системах хозяина, включая различия в ареале хозяев, органоснецифично-сти и распространенности среди животных, а также в бляшко-образовании в разных культурах клеток. Разработаны надежные лабораторные методы, позволяющие определить происхождение отдельных сегментов РНК у реассортантных вирусов, возникших в естественных условиях или полученных в лаборатории. Это позволило получить ранее недоступную информацию о роли отдельных генов или их комбинаций в возникновении некоторых биологических различий, а также приступить к изучению ряда фундаментальных вопросов сложных молекулярных механизмов, [c.296]

Время бляшкообразования под бентонитовым покрытием для различных вирусов неодинаково. Результаты образования бляшек для энтеровирусов, например, учитывают через 36 — 48 ч. Культуральные сосуды переворачивают монослоем вверх, смывая средой дегенерировавшие клетки. Бляшки, образуемые различными типами энтеровирусов, отличаются по величине, интенсивности развития и характеру краев. Поскольку одна вирусная инфекционная частица (вирион) образует одну бляшку, метод бляшкообразования позволяет точно определить количество инфекцио чных единиц в материале, а также измерить нейтрализующую активность вирусных антител. [c.268]

Определение колифагов. Присутствие колифагов (бактериофагов, паразитирующих на Е. соИ) определяют в воде поверхностных источников и питьевой воде, подготовленной из нее, а также в сточных водах. Они являются индикаторами эффективности охраны грунтовых вод и очистки питьевой воды. Исследование проводят методом агаровых слоев по Грациа (см. рис. 1.10 и цв. вклейку, рис. 12). Для титрования колифагов исследуемую воду смешивают с расплавленным и остуженным питательным агаром, куда вносят также индикаторный штамм Е. соИ. Полученную смесь выливают вторым слоем на питательный агар в чашке Петри и после застывания среды чашку инкубируют при 37 °С 24 ч. В результате индикаторная культура образует равномерный сплошной рост, а при наличии колифагов в этом газоне образуются прозрачные бляшки ( негативные колонии бактериофагу 419 [c.419]

Разработка метода бляшек для вирусов гриппа в клетках фибропластов куриного эмбриона ( EF) [111 117] позволила идентифицировать одношаговые мутанты и установить частоту реверсии [117]. Она привела также к подтверждению более ранних исследований по кросс-реактивации вируса, инактивированного УФ-луча-ми [4, 19, 32, 64J, и, что особенно ван<но, к основанию методов клонирования некоторых бляшкообразующих штаммов вируса 1111]. Позднее использование перевиваемых человеческих клеточных линий расширило перечень вирусов, для изучения которых можно было применять метод бляшек и готовить рекомбинанты, различающиеся по типу образующихся бляшек [121, 122]. Только значительно позднее было установлено, что загадочная неспособность вирусов гриппа образовывать бляшки обусловлена главным образом необходимостью обязательного расщепления вирусного НА эндогенными протеазами клетки хозяина, без чего невозможны инфицирование клетки и репликация вируса [67, 76]. Возможность применения только тех нескольких вирусов (в основном WSN и RWS — вариантов оригинального штамма WS), которые образовывали отчетливые бляшки, значительно ограничивала проведение генетических экспериментов. К настоящему времени установлено, что образование бляшек вирусом WSN, по крайней мере [c.15]

J. Almond [4] выделял мутанты FPV методом увеличения бляшек или спонтанно (Sp-серии), выращиванием с 5-ФУ (mF- e-рии), обработкой вируса дикого типа 100 мкг/мл NTG (inN-серии) или 50 мкг/мл NTG (без обозначения). Он выделил также 5-ФУ-индуцированные мутанты путем сбора и исследования каждой бляшки (US-серии). Его результаты исследования 49 мутантов сводятся к следующему [c.193]

II. А. Фаг рассеивают штрихом точно так же, как культуры бактерий. Используйте для этого либо чашку для фага Я, либо чашку ЬВ. На чашках для фага к бляшки получаются большего размера. Размер бляшек увеличивается также, если использовать для газона меньше клеток. Поскольку предадсорбция фага не проводится, то акты, инфицирования, приводящие к образованию бляшек, могут быть сильно растянуты во времени. Поэтому размер бляшек может варьировать. В данном случае вариабельность размера бляшек не обязательно указывает на гетерогенность генотипа фага. Этот метод очень удобен для тех, у кого мало опыта, однако он имеет тот недостаток, что на каждой чашке можно провести очистку лишь одного фага. [c.59]

Применяя этот способ, авторы показали, что аттенуированные штаммы полиовируса типа I LS ab и Baylor AU имеют К = 0,22—0,33, а вирулентные штаммы и аттенуированный штамм HAT — К —3,8—4,3. Кроме того, ряд исследованных штаммов имел гетерогенные кривые противо-точного распределения Прингл и Слайд [675] подобным методом анализировали генетические свойства некоторых мутантов двух штаммов вируса ящура SAT 2. Мутант, образующий мелкие бляшки, имел кривую распределения, резко отличающуюся от кривой распределения мутанта, образующего нормальные бляшки. Также три мутанта вируса ящура и — имели гетерогенные кривые нро-тивоточного распределения в двухфазной системе, состоящей из 7% декстрансульфата и 1,2% полиэтиленгликоля в 0,01 М фосфатном буфере. [c.94]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология