Антитело поляризация флуоресценции

Рис. 7.9-14. Принцип иммунного анализа по поляриза цнн флуоресценции. Связывание антитела с антигеном, мечег1ым флуорофором, увеличивает поляризацию флуоресценции.

Вторая группа включает методы, базирующиеся на изменении физико-химических свойств антигенов (или меток, связанных с антигеном) при комплексообразовании с антителами тушении или усилении флуоресценции, изменении степени поляризации флуоресценции, ингибировании ферментативной активности. [c.42]

В анализах такого типа при отсутствии или очень низкой концентрации лекарственного препарата в пробе большая часть меченного ФИТЦ лекарственного препарата связывается антителами, что приводит к высоким значениям шР. При увеличении концентрации определяемого вещества в п бе наблюдаемая поляризация флуоресценции уменьшается. Компьютер прибора сравнивает найденную величину шР пробы с соответствующими величинами стандартных образцов результаты сравнения регистрируются принтером. Обычно граничная концентрация между положительным в отрицательным результатами анализа равна 1 мг/л, что соответствует величинам, рекомендуемым другими исследователями [23]. [c.147]

Большие молекулы и при эмиссии частично сохраняют ту же молекулярную о жентацию, которую они имели при поглощении света, поэтому их флуоресценция поляризована. Если такие молекулы ассоциированы в молекулярный комплекс, то степень поляризации флуоресценции возрастает. Так как в поляризации флуоресценции важную роль играют размер и форма молекул, то это явление особенно полезно при контроле реакций антиген-антитело. Как показано на рис. 10.1, когда маленькая молекула антигена, меченного флуоресцентной меткой, образует комплекс с большой молекулой антитела, то вращение флуоресцентной метки замедляется и поляризация флуоресценции возрастает. [c.141]

Аналогичным образом от гибкости молекулы антитела зависит, вероятно, и способность к образованию специфического преципитата. Антитела свинеи в ходе иммунизации ДНФ-группои теряют свою способность преципитировать с ДНФ-белком. При изучении методом поляризации флуоресценции оказалось, что так называемые ранние антитела, способные к преципитации, имеют более гибкую структуру, чем поздние антитела той же специфичности, но неспособные к образованию преципитата. [c.29]

Для данного флуорофора изменение поляризации флуоресценции зависит от молекулярной массы антигена и природы комплекса с антителом должно иметь место надлежащее изменение молекулярной массы, а этого нельзя добиться с большими антигенами. В целом, хфинято считать, что иммунный анализ ло поляризации флуоресценции неприменим к антигенам с молекулярной массой выше 20000. [c.592]

Метод деполяризации флуоресценции основан на измерении поляризации флуоресценции антигена, меченного красителем, до взаимодействия с антителами и после комплексообразования. Поляризация флуоресценции определяется молекулярным объемом частицы и степенью ее асимметрии. Комплексообразование антигена с антителом сопровождается резким изменением поляризации флуоресценции красителя (например, дансила), который играт роль метки антигена или антитела. Предел обнаружения антигена этими методами достаточно мал (10 —10 ° М). [c.43]

Если в такую систему добавить немеченый антиген (определяемое вещество), он будет конкурировать за связывание с любым центром связывания аитител, который освобождается молекулой меченого антигена. Степень связывания последнего будет уменьшаться во времени в силу его диссоциации, осуществляющейся по первому порядку. Уменьшение количества связанного меченого ан-гигена и, следовательно, снижение поляризации флуоресценции зависят от количества добавленного немеченого антигена. Если константа аффинности антител равна примерно 10 л/моль, то иечеиый антиген диссоциирует быстро, т.е. константа 2 высока [20 ]. В случае антисыворотки против фенобарбитала поляризация [c.145]

В указанных методиках 10 мкл мочи добавляют к 1,5 мл соответствующего смешанного реагента (комплекса меченого антигена с антителами) и после установления равновесия измеряют поляризацию флуоресценции. Поляризационный флуориметр LS-20 фирмы Perkin-Elmer (рис. 10.4) в сочетании с приспособлением для автоматического забора образцов (автосамплером), позволяет автоматизировать такие анализы. [c.146]

Правильность нашей интерпретации процессов, происходящих с молекулой IgG при образовании иммунного комплекса с антигеном, подтверждается также работами по изучению кинетики этой реакции. Исследовали интенсивность и поляризацию флуоресценции в процессе реакции между гаптеном флуоресцеином (Г) и гомологичным антителом (АТ) (Levison е. а., 1975) в статическом режиме и методом остановленного потока. При этом обнаружено, что процесс идет в два этапа [c.34]

Для того чтобы отличить сигнал от фона, а в некоторых случаях разделить сигналы связанного и несвязанного меченого антигена, можно использовать и другие молекулярные свойства. Нгшример, ксгда антиген мал, меченный флуоресцеином аналог способен вращаться с высокой скоростью, а комплекс с антителом имеет значительно меньшую скорость вращения. При возбуждении популяции флуоресцентных молекул линейно поляризованным светом, вероятность возбуждения любой отдельной молекулы определяется ее ориентацией. Если заморозить молекулу в опредэленном ноложении, так что вращения не происходит, то в результате наблюдают флуоресценцию в плоскостях поперечного электрического (ТЕ, ) и поперечного магнитного (ТМ, ) полей по отдельности, а максимальное значение поляризации Р ргшно 0,5 [c.590]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология