Трансформация плазмидная бактерий

Рекомбинантная ДНК проникает в клетки бактерий, характеризующихся низкой частотой трансформации, таким же образом, как плазмидная ДНК из донорской клетки в реципиент-ную в естественных условиях. Некоторые плазмиды обладают способностью создавать межклеточные контакты, через которые они и переходят из одной клетки в другую. Образование контактов между донорной и реципиентной клетками обеспечивается конъюгативными свойствами плазмид, а сам перенос ДНК - мобилизационными. Большинство плазмид, которые используются в работах с рекомбинантными ДНК, не обладают конъюгативными функциями и поэтому не могут переходить в реципиентные клетки путем конъюгации. Однако проникновение в клетку некоторых плазмидных векторов все-таки происходит при наличии в этой клетке второй плазмиды, обладающей конъюгативными свойствами. Таким образом, введя в клетку, несущую мобилизуемый плазмидный вектор, плазмиду с конъюгативными функциями, можно трансформировать клетки-реципиенты, с трудом поддающиеся трансформации другими способами. [c.77]

В то же время в последние годы в связи с развитием генной инженерии широко применяется плазмидная, или векторная, трансформация, которая заключается во введении в клетки бактерий, а также эукариот генов, интегрированных в естественные или искусственные плазмиды (см. гл. И). [c.209]

В подавляющем большинстве работ используют именно конъюгационный перенос плазмидных (космидных) молекул ДНК в клетки грамотрицательных бактерий различных таксономических групп, а не трансформацию. Это обусловлено рядом причин. Во-первых, для [c.219]

У некоторых бактерий, в особенности грамположительных, существует процесс естественной трансформации (см. раздел 4 этой главы). Находясь в особом, ко.мпетентно.м, состоянии, эти бактерии способны получать ДНК, оказавшуюся в среде (напри.мер, ДНК из погибших клеток), в частности плазмидную ДНК. Это еще один путь перемещения плазмид из клетки в клетку. При трансформации грамположительных бактерий в клетку проникает лишь одна линейная цепь ДНК. Поэтому для восстановления кольцевого плаз- [c.111]

На первых порах плазмидную трансформацию коринеформных бактерий осуществляли, используя протопласты клеток. В последз ощие годы была продемонстрирована возможность применения для этих целей метода электропорации. [c.282]

Плазмидная ДНК прочно интегрируется в хромосомную ДНК растительных клеток и вызывает их опухолевый рост. Путем прививки таких клеток можно передать опухоль здоровому растению таким образом, после того как клетки претерпели опухолевую трансформацию, бактерия и ее плазмида становятся уже ненужными. Интегрированная ДНК плазмиды ответственна также за способность клеток вырабатывать новые ферменты, с помощью которых синтезируются аминокислоты октопин и нопалин, так называемые опины. Эти аминокислоты могут использоваться бактерией А. tumefa iens в качестве источника углерода и азота. Благодаря Ti-плазмиде Agroba terium получает, таким образом, преимущественный доступ к продуктам фотосинтеза растения Ti-плазмида обеспечивает образование аминокислот, которые могут быть усвоены только этой бактерией. [c.152]

Мандель и Хига [28] обнаружили, что обработка клеток Е. oli СаСЬ с последующими инкубацией на холоду и тепловым шоком приводит к включению ДНК, добавленной в среду. Их результаты дали толчок к разработке ряда приемов, позволяющих индуцировать состояние компетентности у бактерий различных родов и тем самым осуществлять трансформацию хромосомной и плазмидной ДНК, а также реализовать возможность трансфекции с помощью ДНК бактериофагов. [c.75]

Для идентификации бактерий иногда используют также метод ДНК-зондов (генных зондов), являющийся разновидностью метода молекулярной гибридизации ДНК—ДНК. Реакция гибридизации ведется в этом случае не между двумя препаратами тотальной ДНК, а между фрагментом нуклеотидной последовательности ДНК (зондом), включающим ген (генетический маркер), ответственный за какую-то определенную функцию (например, устойчивость к какому-нибудь антибиотику), и ДНК изучаемой бактерии. Самым распространенным способом создания генных зондов является выделение специфических фрагментов путем молекулярного клонирования. Для этого вначале создают банк генов изучаемой бактерии расщеплением ее ДНК эндонуклеазами рестрикции, а затем отбирают нужный клон из суммы фрагментов ДНК методом электрофореза с последующей проверкой генетических свойств этих фрагментов методом трансформации. Далее выбранный фрагмент ДНК с помощью фермента лигазы вводят в состав подходящей плазмиды (вектора), а эту комбинированную-плазмиду вводят в удобный для работы штамм бактерий (например, Es heri hia соН). Из биомассы бактерии, несущей ДНК-зонд, выделяют плазмидную ДНК и метят ее, например, радиоизотопной меткой. Затем осуществляют гибридизацию ДНК зонда с ДНК бактерии. Образовавшиеся гибридные участки проявляют методом ауторадиографии. По относительной частоте гибридизации генетического маркера с хромосомой той или иной бактерии делают заключение о генетическом родстве этих бактерий с исследуемым штаммом. [c.197]

Таким образом, с точки зрения введения плазмид в клетки протопласты бацилл, как и других грамположительных бактерий, имеют ряд несомненных преимуществ перед компетентными клетками. Протопласты с высокой эффективностью трансформируются мономерной формой плазмидных ДНК, что очень важно при конструировании гибридных молекул ДНК in vitro. Кроме того, используя протопласты, часто удается вводить плазмиды в штаммы грамположительных клеток, не обладающих физиологической компетентностью. Недостатками данного методического приема являются его относительная сложность, многоэтапность и, как следствие, слабая воспроизводимость по параметру эффективности трансформации. [c.239]

Более прост и )шиверсален метод электропорации, который начиная с 1988 г стали использовать для бактерий рода Ba illus. По эффективности электропорация примерно соответствует методу протопластов, но значительно проще и быстрее в исполнении. Тем не менее для каждого вида (штамма) процедуру электропорации необходимо оптимизировать, чтобы добиться наибольшего уровня плазмидной трансформации. [c.239]

Смотреть страницы где упоминается термин Трансформация плазмидная бактерий: [c.118] [c.219] [c.162] [c.111] [c.122] [c.176] [c.189] [c.61] [c.162] [c.62] [c.202] [c.236] [c.219] [c.237] [c.238] [c.238] [c.239] [c.273] [c.111] [c.207]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология