Микропрепаративное элюирование

Методы переноса вещества с пластинки на бумагу и непосредственной экстракции можно использовать для элюирования микропрепаративных количеств нуклеотидов. Во многих случаях желательно выделить нуклеотиды в обессоленном виде. Для этой цели используют летучие буферные растворы или же разбавленные кислоты и аммиак, если нуклеотид устойчив к действию кислоты или щелочи. Большинство нуклеотидов можно количественно элюировать 0,5 М карбонатом аммония с pH 8,6. Концентрация используемого для элюирования буфера зависит от прочности связывания нуклеотидов с НЭИ-целлюлозой. Нуклеотиды можно элюировать при О—4°. При экстракции веществ методом переноса [6] элюирование производят в направлении, перпендикулярном направлению хроматографии. Пластинки в ходе элюирования можно высушивать и, просматривая в УФ-свете, следить за перемещением вещества. Для ускорения процесса часть слоя, на которой уже нет вещества, удаляют, выскребая его лезвием безопасной бритвы, и продолжают элюировать оставшуюся более короткую часть слоя. [c.41]

Принципиальными отличиями эксклюзионной хроматографии от других вариантов являются заранее известная продолжительность анализа в конкретной используемой системе, возможность предсказания порядка элюирования компонентов по размеру их молекул, примерно одинаковая ширина пиков во всем диапазоне селективного разделения и уверенность в выходе всех компонентов пробы за достаточно короткий промежуток времени, соответствующий объему У . Хотя данный метод применяют, главным образом, для исследования ММР полимеров и анализа макромолекул биологического происхождения (белки, нуклеиновые кислоты и т.д.), указанные особенности делают его чрезвычайно перспективным для анализа низкомолекулярных примесей в полимерах и предварительного разделения проб неизвестного состава. Получаемая при этом информация существенно облетает выбор наилучшего варианта ВЭЖХ для анализа данной пробы. Кроме того, микропрепаративное эксклюзионное разделение часто используют в качестве первого этапа при разделении сложных смесей путем комбинации различных видов ВЭЖХ. [c.42]

В области разделения малых молекул с помощью аналитической ЖХ градиентное элюирование стало ценным средством при исследовании сложных смесей или групп соединений с неизмеримой хроматографической полярностью. Успехи приборостроения, в частности создание систем подачи растворителя и систем смешения, совершенствование конструкции детекторов, а также контроль работы приборов на основе микропроцессоров сделали возможным высокий уровень воспроизводимости в схемах разделения с непрерывным градиентом. Микропрепаративное ЖХ-разделение, выполняемое на аналитическом оборудовании, может реализовать эти возможности. Однако при переходе в область препаративной и макропрепаративной хроматографии значительно уменьшаются возможности создания сложных градиентов и контрольных устройств, пригодных для работы с большими объемами и высокими скоростями подвижной фазы, которые бы воспроизводили точно градиенты, характерные при работе с аналитическими приборами. В таких ситуациях обычно рекомендуют использовать подходящую последовательность изокра-тического и ступенчатого градиентного элюирования, если оно вообще возможно (см. разд. 1.6.2.2.5). Выгоды такого подхода [c.67]

ЖХ с градиентным элюированием Обогащение примесей Микропрепаративная ЖХ Макропрепаративная ЖХ [c.121]

При микропрепаративном выделении следует обратить особое внимание на способ элюирования фракций. Бумага Ватман позволяет проводить элюирование дистиллированной водой, поэтому фон в измеряемых пробах довольно низкий. В то же время элюиро- [c.188]

Микропрепаративная техника улавливания газохроматографических фракций в растворителе для последующих измерений их УФ- или ЯМР-спектров показана на рис. XI.15. Обогреваемый вывод из хроматографа снабжен конусом для подсоединения к инжекционной игле, которая использовалась в качестве впускного капилляра в приемнике на выходе хроматографа. Иглы могут легко заменяться при отборе любой фракции, что позволяет исключить загрязнение при затяжном элюировании вещества. Подобные меры предосторожности особенно важны при приготовлении образцов для измерения УФ-спектров, поскольку здесь даже следы примесей, поглощающих в УФ-об-ласти, могут в существенной мере снизить информативность спектров. На рис. XI. 16 в качестве примера представлены УФ- [c.273]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология