микропрепаративная

При необходимости выполнения иных химических реакций, не приводящих к выпадению осадков или изменению окраски, а также с целью повышения чувствительности определения прибегают к микропрепаративному улавливанию компонентов пробы. [c.191]

Если ремонт не дает ожидаемого восстановления разделительных характеристик и эффективности колонки, ее оставляют для проведения менее квалифицированной работы (прикидочный анализ неизвестных образцов, анализ загрязненных проб, микропрепаративная работа и т.д.) или заполняют новым сорбентом суспензионным методом, предварительно удалив отработанный старый сорбент. [c.126]

С помощью БХ можно разделить и анализировать практически все классы хим. соед., в т. ч аминокислоты, сахара, стероиды. Кроме того, БХ в сочетании с двумерным электрофорезом используется как микропрепаративный метод разделения природных в-в, в частности пептидов. [c.325]

Для микропрепаративных целей были предложены специальные мешалки [9, 26]. [c.59]

В качестве аналитического или микропрепаративного метода в последнее время используют хроматографию в тонком слое. [c.354]

Этот новый метод объединяет в себе ряд достоинств хроматографии на бумаге и адсорбционной хроматографии. При хроматографии в тонком слое адсорбента, нанесенном на стеклянную пластинку, так же как и при хроматографии на бумаге, удается быстро разделить небольшие количества смесей, причем на одной пластинке можно одновременно хроматографировать несколько образцов. Вместе с тем хроматография в тонком слое имеет по сравнению с хроматографией на бумаге ряд преимуществ. К ним относятся короткое время проявления (10—30 мин), образование сравнительно небольших, отчетливо различимых пятен и простота оборудования,-Большая емкость тонких слоев адсорбентов позволяет применять этот вид хроматографии и для микропрепаративных целей. Для обнаружения пятен, помимо способов, применяемых в хроматографии на бумаге, можно благодаря большей устойчивости неорганических адсорбентов использовать и ряд других методов. [c.365]

Микропрепаративная тонкослойная хроматография [c.368]

По сравнению с хроматографией на бумаге хроматография в тонких слоях значительно удобнее для проведения микропрепаративных работ. [c.368]

ПРОВЕДЕНИЕ ХРОМАТОГРАФИИ НА БУМАГЕ В МИКРОПРЕПАРАТИВНОМ МАСШТАБЕ [c.474]

Область применения. Качественное и полуколичественное определение аминокислот, получение пептидных карт (метод отпечатков пальцев), микропрепаративное разделение и очистка пептидов. [c.187]

Процесс хроматографирования в микропрепаративном масштабе включает следующие операции измерение небольших объемов растворов, наносимых на бумагу, вымывание полос отдельных разделенных веществ небольшим объемом растворителя, выпаривание элюатов и, наконец, химические превраш ения остатков, количество которых часто не превышает нескольких микрограммов. Обычные методы органической химии в этих случаях непригодны. Поэтому были разработаны специальные методики для работы с микроколичествами. [c.474]

Проведение хроматографии на бумаге в микропрепаративном масштабе 477 [c.477]

Для предварительного разделения пептидов на фракции часто применяют так называемый четырех- или пятикамерный электрофорез. Он позволяет отделить основные, кислые н нейтральные пептиды друг от друга. Каждую из фракций можно подвергнуть затем разделению яри помощи ионообменной хроматографии, микропрепаративным электрофорезом на бумаге или противоточным распределением, ограничиваясь при этом несколькими миллиграммами вещества. В качестве примера представлена схема разделения химотрипсиногена, проведенная Шор-мом с сотрудниками (см. схему на стр. 517). Прекрасные результаты дает метод Хирса, Мура и Штейна— автоматическое разделение пептидов на смоле Дауэкс-50. Строение пептидов, полученных в результате разделения, устанавливают. описанными выше методами. [c.519]

Анализ ферментативных гидролизатов белков. В 1957 г. Ингрэм [61 впервые показал, что двухэтапным разделением с помощью хроматографии и электрофореза на бумаге можно анализировать сложные пептидные смеси, ферментативные гидролизаты и т. п. Такой анализ выявляет самые незначительные различия, с которыми можно встретиться, например, при изучении видовой специфичности или в других сравнительных исследованиях. Метод отпечатков пальцев можно назвать одним из важнейших методов современной биохимии, молекулярной биологии и иммунохимии, так как он позволяет выделить в чистом виде определенный пептид или провести микропрепаративное разделение сложной смеси. [c.103]

Микропрепаративная хроматография. Подлежащий фракционированию материал наносят на бумагу Ватман 3 или Ватман 3 ММ вдоль стартовой линии, длина которой не должна превышать 20 см. Максимально можно наносить 3—4 мг на 10 см. По окончании хроматографии хроматограмму высушивают, отрезают с обеих сторон полоски бумаги шириной 0,5 см и окрашивают их для того, чтобы установить положение зон, которые должны быть элюированы (см. фиг. 17) затем вырезают эти зоны и элюируют фракции. [c.191]

Область применения. Фракционирование крупных пептидов для аналитических или микропрепаративных целей. [c.200]

Область применения.. Аналитическое и микропрепаративное фракционирование крупных полипептидов. [c.202]

Рис. П1.8. Микропрепаративное улавливание отдельных фрак> ций элюата в охлаждаемом жнд> КИМ азотом стеклянном капнлля> ре и осуществление направленных химических превращений сконденсированных веществ а — сочленение стеклянного капилляра до 1,5 мм) с обогреваемым штуцером выходной линии хроматографа б —г — введение в капилляр раствора реагента, образование и извлечение реакционной смеси

Принципиальными отличиями эксклюзионной хроматографии от других вариантов являются заранее известная продолжительность анализа в конкретной используемой системе, возможность предсказания порядка элюирования компонентов по размеру их молекул, примерно одинаковая ширина пиков во всем диапазоне селективного разделения и уверенность в выходе всех компонентов пробы за достаточно короткий промежуток времени, соответствующий объему У . Хотя данный метод применяют, главным образом, для исследования ММР полимеров и анализа макромолекул биологического происхождения (белки, нуклеиновые кислоты и т.д.), указанные особенности делают его чрезвычайно перспективным для анализа низкомолекулярных примесей в полимерах и предварительного разделения проб неизвестного состава. Получаемая при этом информация существенно облетает выбор наилучшего варианта ВЭЖХ для анализа данной пробы. Кроме того, микропрепаративное эксклюзионное разделение часто используют в качестве первого этапа при разделении сложных смесей путем комбинации различных видов ВЭЖХ. [c.42]

ВОДЯТ, приближая раскаленную проволоку к краю пластинки. Отдельные адсорбционные зоны в случае закрепленного слоя вырезают шпателем, а в случае незакрепленного слоя отсасывают при помош,и водоструйного насоса и специальной трубки, изображенной на рис. 340. Вещества элюируют подходящим растворителем. Фракции, полученные при микропрепара-тивной тонкослойной хроматографии, бывают, как правило, относительно более чистыми, чем при микропрепаративном разделении веществ на бумаге, так как в последнем случае они часто загрязняются веществами, которые экстрагируются из самой бумаги. [c.369]

Метод микропрепаративной газовой хроматографии в сочетании с УФ-спектроскоппей [15] позволил отнести большинство неидентифицированных углеводородов к тому или иному структурному типу и подтвердить данные хроматографии на капиллярной колонке. Микропрепаративпую хроматографию ароматических углеводородов проводили на приборе Цвет-4 . Использовали колонку длиной 2 м и диаметром 3 мм с 20% жидкой фазы SE-30 на хроматоне при линейном программировании температуры со скоростью 5° С/мип от 100 до 250° С. Раствор пробы в бензоле объемом 10 мкл вводили в испаритель, а элюируемые из колонки фракции углеводородов улавливали в металлических трубках диаметром 2,5 мм. Углеводороды затем вымывали изооктаном и исследовали па УФ-спектрофотометре. [c.161]

В этой главе термин препаративная ЖХ будет использован в общем смысле. Как указано в табл. 1.1, наиболее часто при препаративных ЖХ-разделениях в лаборатории имеют дело с образцами от 0,1 до 100 г. При препаративных разделениях, выполняемых в меньших или больших масштабах, будут использованы термины микропрепаративная ЖХ и макропрепара-тивная ЖХ (табл. 1.1). [c.13]

Если электрофорез и хроматографию на бумаге можно отнести к микропрепаративным методам, то метод разделения смеси пептидов с помощью ионообменной хроматографии следует, пожалуй, считать макропрепаративным. Его главное преимущество заключается в том, что он позволяет обрабатывать большие количества материала и получать несомненно большие выходы фракций. Применение при ионообменной хроматографии летучих буферов дает возможность избежать трудоемкой процедуры обессоливания, которая осложняла ранее предложенные методики [49, 92]. Большим достижением в области ионообменной хроматографии является введение сферических смол. Их применение способствует увеличению скорости потока фракционируемых веществ через колонку и значительно сокращает продолжительность препаративного разделения. Сферические смолы в автоматических аминокислотных анализаторах обеспечивают воспроизводимую сравнительную хроматографию пептидов с высокой разрешающей способностью, т. е. позволяют автоматически проводить анализ методом отпечатков пальцев . [c.38]

Количество. Этот элемент разделения имеет несколько аспектов. Если концентрация интересующего компонента в образце мала, то для получения требуемого количества соединения должны быть переработаны большие количества образца. В этом случае техника разделения и масштаб аппаратуры, которую следует использовать для разделения, определяются количеством образца, подлежащего переработке. Степень извлечения ценных компонентов должна быть высокой по отношению к общему переработанному количеству. Если в наличии имеется только оборудование для маломасштабных разделений и продукт необходимо получить только один раз, то большой образец может быть разделен на удобные части и подвергнут многоцикловому хроматографическому разделению. Если требуются чистые препаративные или макропрепаративные ЖХ-разделе-ния, особенно в случае получения коммерческих продуктов, то, по-видимому, оправданы затраты на приобретение крупномасштабного оборудования. Для микропрепаративной ЖХ может [c.15]

В области разделения малых молекул с помощью аналитической ЖХ градиентное элюирование стало ценным средством при исследовании сложных смесей или групп соединений с неизмеримой хроматографической полярностью. Успехи приборостроения, в частности создание систем подачи растворителя и систем смешения, совершенствование конструкции детекторов, а также контроль работы приборов на основе микропроцессоров сделали возможным высокий уровень воспроизводимости в схемах разделения с непрерывным градиентом. Микропрепаративное ЖХ-разделение, выполняемое на аналитическом оборудовании, может реализовать эти возможности. Однако при переходе в область препаративной и макропрепаративной хроматографии значительно уменьшаются возможности создания сложных градиентов и контрольных устройств, пригодных для работы с большими объемами и высокими скоростями подвижной фазы, которые бы воспроизводили точно градиенты, характерные при работе с аналитическими приборами. В таких ситуациях обычно рекомендуют использовать подходящую последовательность изокра-тического и ступенчатого градиентного элюирования, если оно вообще возможно (см. разд. 1.6.2.2.5). Выгоды такого подхода [c.67]

Возрастающая важность микропрепаративной ЖХ как средства очистки биологически важных макромолекул делает, однако, необходимым создание средства для провеления крупномасштабных разделений в условиях непрерывного градиента. Это особенно справедливо для новых разделений, в основе которых лежат гидрофобные или смешанные взаимодействия и используются высокоэффективные подвижные фазы. Классические ионнобменные, ситовые (гельпроникающие) и аффинные методы, традиционно применяемые в колонках большого диаметра при низком давлении, и подача растворителя за счет гравитационных сил могут быть быстро вытеснены современными методами, когда станут доступны подходящие материалы и оборудование. Новейшие приборы для ЖХ открывают хорошие перспективы использования в дальнейшем градиентных разделений в крупном масштабе. Однако в настоящее время опыт работы с такими системами очень ограничен. [c.69]

ЖХ с градиентным элюированием Обогащение примесей Микропрепаративная ЖХ Макропрепаративная ЖХ [c.121]

Выбор фильтровальной бумаги. Для качественного и полу-количественного хроматографического анализа обычно используют бумагу Шляйхер-Шуль 20436 и Ватман 1. Микропрепаративное выделение пептидов лучше всего проводить на бумаге Ватман 3 и Ватман 3 ММ. Наиболее четкая картина пептидных карт получается на бумаге Ватман 3 ММ. [c.188]

При микропрепаративном выделении следует обратить особое внимание на способ элюирования фракций. Бумага Ватман позволяет проводить элюирование дистиллированной водой, поэтому фон в измеряемых пробах довольно низкий. В то же время элюиро- [c.188]

О)вершенно очевидно, что число необходимых для превращения стадий должно быть минимальным, так как в результате многочисленных операций могут происходить большие потери и воспроизводимость экспериментов будет ухудшаться. В идеале было бы желательно производить модификацию аминокислот в одну стадию, но в случае полифункциональных аминокислот, как правило, на это рассчитывать не приходится. Большое число реакций при модификации не выгодно и с другой точки зрения обычно в аминокислотном анализе используются очень небольшие количества материала — несколько микромолей или даже меньше. Следовательно, превращение аминокислот необходимо проводить на микроуровне. С помощью газохроматографических детекторов с обычной чувствительностью определять такие небольшие количества довольно легко. К тому же вполне возможно, по крайней мере теоретически, увеличить чувствительность методов детектирования. Поэтому в настоящее время основные трудности связаны не с газохроматографическим детектированием производных аминокислот, а с микропрепаративным превращением аминокислот. [c.310]

При увеличении диаметра, наоборот, отклик детектора на данное количество вещества становится меньше и одновременно возрастают максимально допустимые объем и масса пробы. Больщинство фирм в качестве основного типоразмера выпускают колонки внутренним диаметрохм 4,6 мм, и, вероятно, на таких колонках выполняется сейчас не менее 90% аналитических разделений. В то же время несколько более дорогие колонки внутренним диаметром 6,2 мм, как нам кажется, наиболее целесообразны, когда необходимо масштабирование аналитического разделения до микропрепаративного уровня. Для этих [c.220]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология