Летучие буферные растворы

Летучие буферные растворы для высоковольтного электрофореза [c.370]

Принцип метода. Ионообменная хроматография проводится в летучих буферных растворах, что позволяет избежать специальных стадий обессоливания фракций. [c.199]

Хорошее разделение можно получить при хроматографии в летучем буферном растворе пиридин — уксусная кислота pH 5, который готовят на деионизованной воде, смешивая 40 мл уксусной кислоты и 40 мл пиридина и доводя конечный объем до 10(50 мл. В этом буферном растворе в отличие от цитратного Тир и Фен меняются местами (фиг. 50), а аминокислоты в направлении от линии старта к фронту растворителя движутся в следующем порядке Арг, Гис, Лиз, Тир, Фен. [c.251]

Разработаны и другие системы элюирования, основанные на применении летучих буферных растворов в частности, такие системы необходимы при детектировании меченых аминокислот в сцинтилляционных жидкостях [92]. [c.357]

Этот метод основан на образовании множества электростатических связей между заряженными группами пептида и несущими противоположный заряд ионогенными группировками поверхности ионита. Благодаря амфотерному характеру пептидов в этом методе можно использовать катиониты или аниониты. Единственным ограничением является слабая растворимость пептидов в той или иной области pH. Если же смесь пептидов вообще не растворяется в обычных буферных растворах, то применяют буферы с высокой концентрацией мочевины или солянокислого гуанидина. Применение летучих буферных растворов в ионообменной хроматографии позволяет миновать стадию обессоливания. Б настоящее время ионообменная хроматография пептидов полностью или частично автоматизирована, а метод стал настолько универсальным, что позволяет разделить практически любую смесь пептидов. [c.389]

Б. Очистка растворителей, входящих в состав летучих буферных растворов [c.403]

Фракционирование пептидов Препаративная хроматография с применением летучих буферных растворов Отделение пептидов и аминокислот от мочевины Автоматический колоночный анализ Обессоливание пептидов [c.316]

Методы переноса вещества с пластинки на бумагу и непосредственной экстракции можно использовать для элюирования микропрепаративных количеств нуклеотидов. Во многих случаях желательно выделить нуклеотиды в обессоленном виде. Для этой цели используют летучие буферные растворы или же разбавленные кислоты и аммиак, если нуклеотид устойчив к действию кислоты или щелочи. Большинство нуклеотидов можно количественно элюировать 0,5 М карбонатом аммония с pH 8,6. Концентрация используемого для элюирования буфера зависит от прочности связывания нуклеотидов с НЭИ-целлюлозой. Нуклеотиды можно элюировать при О—4°. При экстракции веществ методом переноса [6] элюирование производят в направлении, перпендикулярном направлению хроматографии. Пластинки в ходе элюирования можно высушивать и, просматривая в УФ-свете, следить за перемещением вещества. Для ускорения процесса часть слоя, на которой уже нет вещества, удаляют, выскребая его лезвием безопасной бритвы, и продолжают элюировать оставшуюся более короткую часть слоя. [c.41]

Гидролиз трипсином проводят при 37° С в щелочной среде (pH 8,0— 8,6). Для гидролиза удобно пользоваться летучими буферными растворами (после высушивания гидролизаты не содержат солей), например, раствором бикарбоната аммония. Постоянство pH среды поддерживают подщелачиванием 2 н. раствором NaOH. Время гидролиза (от 2 до 12 ч) зависит от природы анализируемого белка. Иногда время гидролиза увеличивают до 24 ч. Отношение фермента к белку 1 100 или 1 50 (по весу). При длительном гидролизе во избежание автолиза фермент нередко добавляют к субстрату двумя или тремя порциями. [c.140]

Для колориметрического анализа большого числа фракций целесообразно использовать механические автоматические пипетки и автоматический отбор аликвотов. На рис. 511 представлены результаты колориметрического анализа фракций, полученных при разделении смеси пептидов на колонке, наполненной ионитом дауэкс 50 х 2. На рис. 512 изображены хроматограммы, полученные при проявлении аликвотных частей из каждой фракции. Последний способ анализа особенно выгоден в тех случаях, когда применяют летучие буферные растворы. В отличие от колориметри- [c.563]

Множество широко применяемых интерфейсных систем для ЖХ-МС позволяет работать в широком диапазоне полярности исследуемых веществ и использовать потоки частиц для ионизации неполярных и средней полярности веществ, термораспылительную и химическую ионизацию при атмосферном давлении для определения полярных соединений, проточную бомбардировку быстрыми атомами и электрораспылительную ионизацию для сильнополярных, ионных и высокомолекулярных веществ. За исключением проточного варианта ББА, все эти устройства работают при скоростях потока от 0,2 до 1 мл/мин со всеми растворителями, обычно используемыми в обращенно-фазовой хроматографии, и летучими буферными растворами, такими, как ацетат аммония. Далее мы обсудим устройство интерфейсных блоков ЖХ-МС, схематичное изображение которых приведено на рис. 9.4-8. [c.280]

Г. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ ПЕПТИДОВ НА КОЛОНКЕ С ДАУЭКСОМ 50X2 В ЛЕТУЧИХ БУФЕРНЫХ РАСТВОРАХ [c.199]

Для хроматографии удобно пользоваться аммонийформиатным или каким-либо другим летучим буферным раствором, поскольку полученные при этом фракции после лиофилизации можно использовать без предварительного обессоливания. [c.202]

При разделении биохимических проб нередко получаются продукты, загрязненные значительными количествами нелетучих электролитов. В некоторых случаях достаточно провести деионизацию, как описано выше, но образование сильных кислот или оснований на первой стадии ионного обмена обычно вызывает заметное изменение pH среды, что в свою очередь приводит к видоизменениям компонентов пробы. Этого можно избежать, если применять смешанные смолы, однако это неэкономично и усложняется тем, что многие органические соединения адсорбируются на поверхности смолы. Для решения подобной задачи можно использовать ионообменную хроматографию с летучими буферными растворами (аммиак или карбонат аммония). В этом случае можно подобрать такие условия, чтобы компоненты пробы хроматографически отделялись от загрязняющих их электролитов. [c.595]

Пептиды наносят на колонку в 0,1—0,2 н. уксусной или муравьиной кислоте, в 0,2%-ном карбонате или бикарбонате аммония. Тип геля выбирают так, чтобы пептид появлялся на выходе колонки вблизи свободного объема. Для этой цели наиболее всего подходят сефадексы 0-10, 0-15, 0-25 и биогели Р-2 и Р-6. Объем образца не должен превышать 7з—74 от объема столбика геля (например, в случае сефадекса 0-25). Элюировать удобно летучими буферными растворами, хотя выбор буфера зависит от растворимости пептида. В случае необходимости обессоливание ведут в дистиллированной воде, однако при этом происходит расширение зон, которое может привести к их перекрыванию. Для достижения полного обессоливания необходимо увеличить столбик геля. В зависимости от объема выхода пептида, нагрузки на колонку и объема образца скорость элюирования составляет примерно 7—20 мл/ч см . При работе на сильиосшитых гелях рекомендуется несколько увеличить высоту столбика геля (по сравнению с сефадексом 0-25). Пептиды обнаруживают в элюате колориметрически, спектрофотометрически, а выделяют упариванием при пониженном давлении или лиофилизацией. [c.397]

Чтобы разделение осуществлялось строго по размерам молекул, необходимо свести к минимуму электростатическое взаимодействие между пептидами и матрицей. С этой целью применяют буферные растворы с высокой ионной силой и соответствующей величиной pH. Удобно работать с летучими буферными растворами, упомянутыми в предыдущем разделе. В качестве примера успешного разделения пептидов по размерам молекул следует указать получение фрагментов сывороточного альбумина человека [20]. Смесь трех пептидов в виде малеилпроиз-водных фракционировали в 0,1 М растворе бикарбоната натрия на колонке длиной 250 см с сефадексом 0-100. Как и следовало ожидать, первый пик соответствовал наиболее крупному фрагменту, а последующие — среднему и наиболее короткому (рис. 34.1). [c.398]

Разделение пептидов обычно проводят в летучих буферных растворах. Для аналитических целей, не связанных с последующим выделением пептидов, удобно использовать нелетучие буферные растворы на основе неорганических солей. В качестве компонентов летучих буферных растворов служат органические основания и кислоты 3-метилпиперидин, пиридин, сг-пиколин, 2,4,6-лутидин, Ы-этилморфолин, уксусная и муравьиная кислоты. Наличие примесей приводит к повышению фона при последующем анализе злюатов, поэтому следует применять тщательно очищенные реактивы соответствующей квалификации. [c.403]

При фракционировании белков обычно применяют иониты, содержащие карбоксиметильную и диэтиламиноэтильную функциональные группировки, однако эти иониты не вполне подходят для разделения пептидов. Как правило, почти все кислотные пептиды адсорбируются на катионите при pH 3,0—3,5 в буфер ном растворе с низкой ионной силой, откуда могут быть элюи рованы при рн 6—9 и при более высокой ионной силе. Карбо ксилсодержащие иониты слабо диссоциированы при pH 3, и следовательно, обладают пониженной емкостью. Кроме того в разбавленных электролитах, т. е. в условиях проведения сорб ции, слишком велика буферная емкость ионита. Скачкообразное изменение pH элюента приводит на практике к одновременному элюированию группы пептидов. Аналогичные недостатки свойственны ионитам с ВЕАЕ-группой, особенно при работе с летучими буферными растворами. Изменение ионной силы и значения pH во время элюирования вызывает сжатие столбика сорбента, нарушение скорости потока и искажение профиля элюирования. В наибольшей степени этот эффект выражен у ионитов на основе слабосшитых гелей, однако в какой-то степени это свойство характерно и для модифицированных целлюлоз. И тем не менее некоторые типы ионитов на основе целлюлозы находят применение для разделения небольших пептидов. К ним относятся фосфоцеллюлоза, ЗЕ-целлюлоза, 8Р-целлюлоза и РАЕ-сефадекс. [c.411]

На фосфоцеллюлозе успешно разделяли пептиды из пептического и химотриптического гидролизатов лизоцима куриного яйца. Хроматографию проводили в градиенте pH и ионной силы летучих буферных растворов [38]. [c.412]

НИЯ частичного гидролизата поли-А на DEAE-целлюлозе в сложном градиенте летучего буферного раствора. Смеси олигонуклеотидов, образующиеся при ферментативном гидролизе природных полинуклеотидов, следует фракционировать в присутствии 7 М мочевины, подавляющей вторичные взаимодействия олигонуклеотидов с сорбентом (см. разд. Разделение компонентов нуклеиновых кислот ). [c.89]

В лаборатории авторов главы успешно используется нисходящий бумажный электрофорез без охлаждения, разработанный Микешом [70]. Принципиальная схема прибора для такого разделения показана на рис. 12.5. Этот прибор используется в основном для аналитического и препаративного разделения пептидов, содержащихся в ферментативных гидролизатах белков. Оптимальное разделение достигается при применении таких буферных растворов, электропроводность которых соответствует 1/150 М фосфатному буферному раствору Соренсена (3,63 г КН2Р04-Ь 14,32 г На2НР04-12Н2О в 10 л воды, pH 7). Летучие буферные растворы более удобны, если во время их испарения концентрация ионов на бумаге не увеличивается. Например, для разделения пептидов обычно используется пиридин-ацетат-ный буферный раствор, pH 5,6 (4 мл пиридина +1 мл уксусной кислоты, вода до 1 л). Нейтральные, незаряженные, соединения остаются в центре бумаги, т. е. на старте, и образуют узкую смешанную зону. В верхней части бумаги располагаются зоны пептидов основного характера, а в нижней части — кислотного. [c.291]

При более тщательном исследовании Флодин [19] установил следующие моменты. Действие колонки можно повысить наиболее эффективно путем уменьшения размера частиц декстранового геля. Вязкость исследуемого образца ставит некоторый предел применимости метода фильтрования через гели, однако эффекты разделения не зависят от концентрации растворенных веществ. Из раствора белка можно полностью удалить соли, используя для элюирования воду, но так как в этих условиях некоторые белки склонны выпадать в осадок, элюирование, видимо, лучше проводить при помощи летучего буферного раствора. Декстраны, помимо эффекта молекулярного сита, слабо адсорбируют ароматические и гетероциклические соединения кроме того, в зависимости от ионной силы и pH геля [20] может наблюдаться сильная адсорбция некоторых основных веществ. [c.219]

Приготовление образцов для гидролиза. Пробирки или ампулы, которые могут быть изготовлены путем запаивания коротких трубочек из стекла пирекс, в целях очистки следует обработать, как описано в разд. 8.2. Берут навеску (1—5 мг) высушенного на воздухе или лиофилизованного белка (взвешивают прямо в ампуле) можно использовать и раствор белка, при >том лиофилизацию аликвотной части раствора проводят также в ампуле. Анализируемый образец не должен содержать солей, поэтому используют летучие буферные растворы. [c.250]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология