Зонный электрофорез при постоянном значении

Зонный электрофорез является самым простым из описанных здесь способов разделения. Так как многие методы анализа, которые будут обсуждаться ниже, основаны на КЗЭ, необходимо детально рассмотреть его основные принципы. При зонном электрофорезе буфер, значение pH, а также напряженность поля во всем пространстве разделения остаются постоянными. Пробы разделяются за счет их различных подвижностей. Они вводятся в виде отдельной зоны на входе в капилляр и обнаруживаются в виде дискретных, отделенных друг от друга зон на конце детектора. Назначение буфера при этой технике разделения - поддерживать постоянное значение pH и обеспечивать транспортный поток. Выбор pH буфера определяет заряд ионов пробы. Концентрация буфера влияет на ЭОП. Для дальнейшей оптимизации могут использоваться добавки к буферу. [c.48]

Зависимость подвижности белка от pH определяет его поведение в процессе электрофореза, осуществляемого одним из описанных методов. Если при заданном значении pH сумма всех положительных зарядов равна сумме всех отрицательных зарядов и общий заряд, следовательно, равен нулю, белок находится в своей изоэлектрической точке. При любом другом значении pH общий заряд белка отличается от нуля, и в зависимости от знака заряда белок перемещается к отрицательному или положительному электроду. Подбирая соответствующие буферные растворы, можно добиться того, чтобы белки перемещались с различной скоростью при данных значениях pH (зонный электрофорез при постоянном значении pH), могли располагаться друг за другом в последовательности, определяемой их подвиж- [c.118]

Зонный электрофорез при постоянном значении pH [c.119]

Носителями в данном случае чаще всего служат ацетат целлюлозы [26] и гели агарозы [4]. Разрешающая способность таких систем очень низка из-за чрезмерного диффузионного размывания зон. Применение в качестве носителя крахмального или полиакриламидного геля значительно повышает разрешающую способность прежде всего благодаря молекулярно-ситовому эффекту. Иммуноэлектрофорез [56] является одной из разновидностей зонного электрофореза при постоянном значении pH после разделения белки диффундируют навстречу специфическим антителам и их взаимодействие приводит к образованию дуг иммунопреципитации. Полуколичественную оценку каждого антигенного компонента можно выполнить методом электроиммунодиффузии [57]. После разделения методом зонного электрофореза антигенные белки электрофоретически мигрируют в направлении, перпендикулярном прежнему пути, в гель, содержащий равномерно распределенные антитела. Высота образующихся пиков преципитации является мерой относительной концентрации белков в смеси. [c.120]

Термином зонный электрофорез при постоянном значении pH называют метод разделения при одинаковом значении pH во всей электролитической системе, т. е. в резервуарах с анодным и катодным буферами, в зоне разделения и в образце (рис. [c.119]

Как уже отмечалось, для сокращения продолжительности разделения и уменьшения диффузии зон электрофорез желательно вести при максимальном напряжении. Его начальное значение ограничивается требуемой вначале силой тока и максимально допустимой для данного прибора мощностью. По мере роста сопротивления в геле сила тока снижается, и напряжение можно увеличивать. Современные источники напряжения делают это автоматически, поддерживая заданный постоянный уровень мощности, рассеиваемой в геле. От опасного (с точки зрения надежности изоляции) повышения напряжения при этом можно застраховаться, ограничив максимально допустимую его величину. Достигнув ее, прибор переключается на режим поддержания постоянного напряжения, поэтому при дальнейшем возрастании сопротивления сила тока и расходуемая в геле мощность начинают снижаться. [c.43]

В зависимости от типа электролитических систем различают а) зонный электрофорез при постоянном значении pH, или просто электрофорез 48—57] б) изоэлектрическое фокусирование в градиенте pH [58—64] в) изотахофорез с ведущими и за- [c.111]

В кислой среде, если отсутствуют предпосылки для укрупнения коллоидных частиц, вязкость с изменением значений pH близка к постоянной величине. В противоположность этому, в щелочной среде (см. рис. 7.10,6), в зоне pH 10,5—11,5 имеет место аномальный рост вязкости, а при обратном подкислении образуется гистерезис вязкости. Причины возникновения этой аномалии и ее обратимости еще не установлены. Известно, однако, что такое увеличение вязкости лигносульфонатов не сопровождается их явной коагуляцией. Это является следствием расширения двойного электрического с оя вокруг укрупненных частиц. Действительно, характер изменения электрофоретической скорости в этой зоне pH совпадает с кривой вязкости. В точке максимума вязкости скорость электрофореза сульфитно-дрожжевой бражки достигла 8 мкм/с против 5 мкм/с при pH 7. [c.237]

М H l. Индикацию зон на бумаге осуществляли свежеприготовленным 5/Z-HHM раствором Sr I bH I, содержащимК Лтобы иметь возможность сопоставить подвижности ионов в различных электролитах, электрофорез вели при соблюдении постоянного значения произведения напряжения на время (Б-мин), в наших экспериментах эта величина сохранялась равной 20 ООО (В мин). [c.164]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология