Разделение цепей ДНК фага

IV. Разделение цепей ДНК фага X [c.87]

Разделение комплементарных цепей ДНК фага X при образовании комплекса с поли-ИГ (смешанный полимер инозиновой и гуаниловой кислот). [c.339]

Если роль расплетающего белка в репликационной вилке приписывается белку Rep правильно, то возникает вопрос, каким образом мутанты гер реплицируют бактериальную ДНК, не обладая способностью разделять цепи ДНК фага фХ174. Жизнеспособность фага М13 также ависит от R p-белка в мутантных клетках гер потомство (одноцепочечной) фаговой ДНК не может быть получено из кольцевой молекулы, имеющей репликативную форму. Однако если в ДНК фага М13 внедрен фрагмент Е. соН, содержащий область инициации, то ДНК реплицируется, Следовательно, ДНК двух указанных фагов нуждается в белке Rep для репликации, а ДНК бактериальной клетки способна реплицироваться без него. У Е. соИ, по-видимому, существует какой-то другой (неизвестный) механизм, с помощью которого происходит инициация разделения цепей и далее цепи поддерживаются в разделенном состоянии. [c.425]

ДНК-полимераза фага Т7 использует в виде вспомогательного белка продукт фагового гена 4, в котором объединены функции раскручивания двухспиральной матрицы и синтеза РНК-затравки. ДНК-полимераза вместе с белком гена 4 способна завершить репликацию in vitro, хотя in vivo при удалении РНК-затравки в процесс может также вовлекаться экзонуклеаза, кодируемая фаговым ге- ном 6. Репликационная вилка содержит, по-видимому, в расчете на одну растущую цепь 10 молекул белка гена 4 и одну молекулу ДНК-полимеразы. Продукт гена 4 гидролизует NTP свыше того количества, которое используется в качестве субстрата для синтеза РНК. На каждое основание, включаемое в ДНК, может приходиться до четырех дополнительных гидролитических событий. Вероятно, этот гидролиз обеспечивает энергией процесс разделения цепей. [c.429]

Подавляющее большинство ДНК состоит из двух одиночных цепей одинаковой длины с комплементарными последовательностями, что приводит к спариванию оснований по всей длине молекулы. Иногда различие в содержании нуклеотидов в этих цепях позволяет разделять их и исследовать по отдельности. Разделение цепей in vitro показывает, что некоторые ДНК имеют одноцепочечные разрывы. Наиболее изучена в этом отношении ДНК фага Т5, в которой одна цепь является целой, а другая, комплементарная ей, состоит из четырех фрагментов, точно подогнанных к первой цепи. Одни природные ДНК являются кольцевыми, а другие — линейными. Иногда наблюдаются даже сцепленные кольцевые ДНК. [c.156]

Гейдушеком и др. [26]. Используя в качестве затравки ДНК из бактериофага Т2, синтезировали РНК, меченную по фосфору, и выделили ее центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия. К ней добавили ДНК из фага Т2. Затем смесь нагревали в течение 10 мин до 100°, чтобы вызвать разделение двух цепей ДНК. Потом ее медленно охлан дали и оставили при 40° на 12 час. Об образовании гибрида в ходе отншга говорили результаты центрифугирования в градиенте плотности. Была получена всего одна полоса этот факт подтверждается как данными оптических измерений, так и измерениями радиоактивности. В контроле на холоде (12 час при 0°) была обнаружена только [c.233]

В последние годы разработаны методы разделения комплементарных цепей ДНК при ренатурации отдельных нитей ДНК фага Я, каждая из которых не обладает биологической активностью (ке более 10% исходной), наблюдается восстановление биологической функции примерно наполовину Важно отметить, что взаимодействуют с образованием двухспиральнон молекулы только комплементарные цепи цепи одного типа не способны к ренатурации. [c.274]

Нельзя себе представлять делецию как истинный химический разрыв в ДНК фага. Скорее, это отрезок цепи ДНК, утративший генетическую информацию, т. е. ставший бесполезным, функционально несостоятельным. Можно себе представить множество химических реакций, приводящих к такому результату, например денуринизацию (отщепление пуриновых оснований на некотором протяжении цепи сделало бы ее бесполезной). В итоге оказывается, что различие в плотностях между Я и Adg не столь значительно, хотя и вполне достаточно для их разделения в градиенте s l, по Месельсону, оно составляет в среднем 0,01. Любопытна следующая деталь. Когда Adg образуется в лизогенной культуре, то отдельные частицы имеют довольно различные плотности, т. е. существенно отличаются друг от друга по размерам хромосомной делеции. [c.392]

Вскоре после того, как Стрезингер предположил наличие в геноме Т-четных фагов циклических перестановок, Томас показал, что и в нукле-тидной последовательности ДНК Т-четных фагов, как и следует из модели, имеются циклические перестановки. Он обнаружил, что после разделения комплементарных цепей линейных молекул ДНК Т-четных фагов в результате плавления они вновь соединяются с образованием кольцевых двойных спиралей (фиг. 145). [c.298]

Чтобы установить соответствие между реакцией синтеза, охарактеризованной для ДНК фага фХ174, и репликацией двухцепочечной ДНК, мы должны рассмотреть, каким образом одноцепочечная матрица готовится к синтезу отстающей цепи. По-видимому, по мере продвижения репликационной вилки, белок SSB связывается с ДНК, удерживая две родительские цепи разделенными. В результате обе цепи (или по крайней мере отстающая) оказываются в условиях, необходимых для их использования в качестве матриц. Белок SSB в репликационной вилке должен присутствовать в стехиометрических количествах. [c.424]

Какой белок ответствен за первоначальное расплетание двух цепей родительской молекулы Эту функцию связывают с мутациями гер, которые замедляют движение репликационной вилки. Белок Rep представляет собой АТРазу, зависимую от одноцепочечной ДНК. В присутствии АТР совместное действие белков Rep и SSB приводит к разделению двухцепочечной репликативной формы ДНК фага фХ174, несущей разрыв в одной из цепей, на составляющие ее отдельные цепи. Вероятно, белок Rep расплетает цепи, а белок SSB затем фиксирует их в одноцепочечном состоянии. [c.424]

Рис. 14.2. А. Разделение фаговых частиц (фага X,), состоящих целиком из легких (ЬЬ) и целиком из тяжелых (НН) цепей в градиенте плотности раствора СзС . Содержимое центрифужной пробирки распределяется по фракциям, в каждой из которых с помощью обычного чашечного теста подсчитывают количество фаговых частиц. Б Г. Распределение по плотности дочерних фагов, образующих на легкой среде в клетках, инфици-

Пример 11-А. Структура ДНК фага Т7 Е. oli. ДНК бактериофага Т7 Е. соИ дает границу, изображенную на рис. 11-9, Л. Эта ДНК дает одну четкую границу при всех исследованных концентрациях, так что ее можно считать гомогенной с точки зрения молекулярной массы. Если ДНК центрифугировать при pH 12,5, когда происходит разделение двух цепей, получается граница, показанная на рис. 11-9,5, которая состоит из двух частей — четкой (гомогенной) и широкой (гетерогенной). Расстояние а/ а + Ь) равно 0,5 это означает, что 50% одиночных цепей ДНК осаждается медленнее, чем гомогенный компонент. Отсюда можно заключить (поскольку в этом случае известно, что меньший коэффициент седиментации соответствует меньшей молекулярной массе), что 50% одиночных цепей ДНК должно быть расщеплено. Так как более медленно движущийся материал осаждается достаточно гетерогенно, расщепленные цепи имеют различный размер, и поэтому разрывы могут происходить в разнообразных местах молекулы, скорее всего со случайным распределением. [c.285]

Рис. 2.24. Различные подходы к мечению новосинтезируемой цепи ДНК I - концевое мечение (5 -конца новосинтезируемой цепи ДНК) посредством использования олигонуклеотидного праймера, предварительного меченного по 5 -концу с помощью [у-32р] АТФ и полинуклеотидкиназы фага Т4 11(a) - внутреннее мечение с помощью присутствующего в терминирующей смеси меченного [а-32р] дНТФ 11(6) - квазиконцевое мечение (около 5 -конца) растущей цепи ДНК с помощью присутствующего в смеси для мечения меченного [а- Р] дНТФ, достигаемое путем разделения

Справочник химика 21

Химия и химическая технология