Градиент плотности хлористого цезия

Рис. 23.2 (отв.). Схемы, объясняющие две теории репликации ДНК. Появление ДНК в градиенте плотности хлористого цезия согласуется с теориями, представленными на рис. 23.22. [c.359]

Как было указано, стрептомицины нарушают синтез белка на уровне 30S рибосом. Если эти последние диссоциировать в градиенте плотности хлористого цезия на кор-частицы (16S РНК + 15 белков) и на отделяющиеся белки (6 белков), то при реассоциации 30S рибосом доказано, что чувствительность к антибиотикам определяется кор-частицами. Каждая рибосома может связывать 1...2 молекулы антибиотика в присутствии ионов магния и уридин- или цитозин-содержащих полинуклеотидов. При этом отмечается не только ошибочное считывание [c.189]

Центрифугирование этих двух ДНК в градиенте плотности хлористого цезия покажет, что ДНК Е. соИ, у которой содержание О—С-пар выше, будет тяжелее и поэтому достигнет равновесия в более низкой точке градиента, чем ДНК морского ежа (см. табл. 27-3). [c.1003]

ДНК некоторых вирусов, например бактериофага SP8 (стр. 160), образуют при денатурации два компонента, имеющих различную плотность в градиенте плотности хлористого цезия [c.79]

С другой стороны, существуют методы расщепления ДНК (например, при помощи гидродинамического сдвига), приводящие к фрагментам, размеры которых для структурных исследований слишком велики эти фрагменты можно примерно оценить по их нуклеотидной последовательности с помощью метода гибридизации (см. стр. 61). Так, подвергая ДНК контролируемому расщеплению при помощи ультразвука, разделяя полученные фрагменты центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия и изучая их способность к гибридизации с разными видами РНК, удалось определить приблизительную длину участков ДНК, ответственных за биосинтез некоторых компонентов рибосомальной РНК, и определить их взаимное расположение [c.82]

При определении плавучей плотности ковалентно-замкнутой ДНК вируса полиомы (так называемой ДНК I) в градиенте плотности хлористого цезия с изменяющимся значением pH (щелочная область) наблюдается двухстадийный переход к денатурированному состоянию, характеризующемуся большей плавучей плотностью. Сопоставление этих результатов с аналогичными данными по изменению плавучей плотности той же самой ДНК, но с раз- [c.268]

Рис. 4.14. Разделение молекул ДНК с различной плотностью посредством центрифугирования в градиенте плотности хлористого цезия. Схематически изображены последова-

При ультрацентрифугировании достаточно концентрированного раствора соли малого молекулярного веса возникает градиент плотности, причем у дна ячейки плотность раствора оказывается наибольшей. Исследуемое вещество, подвергнутое ультрацентрифугированию в таком растворе, образует слой, положение которого определяется плотностью этого вещества. Концентрацию и тип соли можно подобрать так, чтобы этот слой располагался в средней части ячейки. При исследовании, например, водных растворов ДНК их центрифугируют в градиенте плотности хлористого цезия, взятого в концентрации 7,7 М (на протяжении столба жидкости высотой 1 см плотность СзС меняется от 1,64 до 1,76 г мл). Положение слоя ДНК определяют при этом по поглощению в ультрафиолете. [c.195]

Обычно пикорнавирусы очищают центрифугированием в градиенте плотности (хотя применялась и гель-фильтрация, в том числе в промышленных масштабах), В связи с малыми размерами пикорнавирусы имеют коэффициент седиментации 150— 160 5, меньший, чем у большинства других вирусов. Однако благодаря отсутствию липидов и исключительно компактной структуре они имеют высокую плавучую плотность (около 1,34 г/см в градиенте плотности хлористого цезия однако см. ниже разд. 5.3.3). В градиентах концентрации сахарозы такая плотность не достигается. Поэтому при очистке применяется разделение в сахарозных градиентах по скорости седиментации или разделение по плавучей плотности в градиентах хлорида или сульфата цезия. [c.59]

Плотность ДНК, измеренная методом седиментации в градиенте плотности хлористого цезия, также является линейной функцией содержания пар ГЦ. При измерениях в градиенте плотности на ширину слоя ДНК влияют два фактора — диффузия и гетерогенность образца. Так как уширение, обусловленное диффузией, зависит от молекулярного веса, влияние диффузии можно приблизительно учесть. Влияние гетерогенности образца на уширение для ДНК бактерий невелико если выразить его через содержание пар ГЦ, то оно составит всего несколько молярных процентов, что много меньше интервала в 50 мол.%, в пределах которого отличаются по содержанию ГЦ образцы ДНК, полученные из различных бактерий. Это объясняется тем, что, хотя содержание ГЦ в ДНК из различных бактерий сильно варьирует, молекулы ДНК одного и того же препарата различаются по содержанию ГЦ сравнительно мало. Как и следовало ожидать, у более сложных организмов ДНК оказывается более гетерогенной по содержанию ГЦ, чем у простых. В клетках млекопитающих гетерогенность ДНК по содержанию ГЦ достигает порядка 10%. [c.323]

ДНК ядер и хлоропластов отличаются не только по нуклеотидному составу. Удалось зарегистрировать различия в плотности этих двух видов ДНК, используя центрифугирование нуклеиновых кислот в градиенте плотности хлористого цезия. Если центрифугировать ДНК, извлеченную из целых листьев, т. е. в основном ядерную, то основной пик плотности будет соответствовать 1,689 (фиг. 24). ДНК, выделенная из тщательно очищенных хлоропластов, имеет основной пик плотности 1,697. [c.65]

Равновесное центрифугирование в градиенте плотности хлористого цезия является исключительно чувствительным методом для [c.577]

ПЛОТНОСТЬ ДНК в градиенте плотности хлористого цезия в результате смесь незамкнутых и циклических ДНК после центрифугирования образует два хорошо разделенных слоя. [c.32]

Градиент плотности хлористого цезия [c.165]

А. Плотность тяжелых и легких бактериальных рибосом. Клетки . соЦ, выращенные на меченной N , С Р -среде, смешивают с 50-кратным избытком клеток, выращенных на обычном питательном бульоне. Из этой смешанной популяции бактерий рибосомы экстрагируют, растирая клетки с окисью алюминия, а затем очищают дифференциальным центрифугированием. Затем рибосомы центрифугируют в градиенте плотности хлористого цезия. Каждый вид рибосом дает два максимума — а и Ь. Максимум Ь радиоактивности меченых, тяжелых рибосом находится непосредственно под максимумом а поглощения немеченых, легких рибосом. [c.392]

Раствор, содержащий равные количества ДНК, выделенной из культур В. subtilis. которые выращивались в средах NH4 I— НгО- и NHi l —Da, нагревали до температуры выше точки плавления ДНК и затем медленно охлаждали до 65 С для того, чтобы произошла ренатурация двойных спиралей. Раствор затем обрабатывали фосфодиэстеразой (ферментом, который расщепляет одноцепочечные, но не двухцепочечные полинуклеотидные цепи ДНК) и подвергали центрифугированию в градиенте плотности хлористого цезия. Обозначения на ординате и абсциссе соответствуют обозначениям иа фиг. 93. Поскольку на графике площадь каждой полосы пропорциональна количеству ДНК. [c.198]

Во многих организмах содержание Г + Ц митохондриальной ДНК отличается от такового ядерной хромосомной ДНК, и, следовательно, ядерную и митохондриальную ДНК у этих организмов можно отделить друг от друга благодаря их различной плавучей плотности при центрифугировании в градиенте плотности хлористого цезия. (Результаты, полученные при разделении ядерной и митохондриальной ДНК, свидетельствуют о том, что избыточность нуклеотидных последовательностей, откры- [c.511]

Данный метод очистки пикорнавирусов в градиентах концентрации сахарозы не требует много времени и существенных материальных затрат и мало сказывается на свойствах вирусов (см. ниже). Однако при этом препараты вирусов могут содержать некоторые контаминанты. Если требуется исключительно высокая степень очистки, может возникнуть необходимость в дополнительном центрифугировании в градиенте плотности хлористого цезия. Как правило, это необязательно можно осадить вирус для удаления сахарозы (разд. 5.2.3). [c.61]

Очистка пикорнавирусов центрифугированием в градиентах плотности хлористого цезия [c.61]

О получении первых экспериментальных данных, четко указывающих На полуконсервативный способ репликации, сообщили в 1958 г. Месел-сон и Сталь [24]. Клетки Е. oli выращивались на среде, единственным Источником азота в которой были ионы NHt. ДНК бактерий, появившихся через несколько последовательных делений исходных клеток в Данной среде, содержала только стабильный изотоп N. Такие бактерии быстро переносили в среду, содержащую NHt. Клетки оставляли в сре-Де на время, необходимое, чтобы их количество увеличилось вдвое, вчетверо и т. д. На разных стадиях выделяли ДНК и центрифугировали в Градиенте плотности хлористого цезия. Небольшие, но легко определяемые различия плотностей позволяли разделять двухцепочечные молекулы ДНК иа три фракции молекуды, содержащие только N молекулы, [c.195]

Гейдушеком и др. [26]. Используя в качестве затравки ДНК из бактериофага Т2, синтезировали РНК, меченную по фосфору, и выделили ее центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия. К ней добавили ДНК из фага Т2. Затем смесь нагревали в течение 10 мин до 100°, чтобы вызвать разделение двух цепей ДНК. Потом ее медленно охлан дали и оставили при 40° на 12 час. Об образовании гибрида в ходе отншга говорили результаты центрифугирования в градиенте плотности. Была получена всего одна полоса этот факт подтверждается как данными оптических измерений, так и измерениями радиоактивности. В контроле на холоде (12 час при 0°) была обнаружена только [c.233]

У бактериофагов а и SP8 две цепи ДНК настолько различаются но плотности, что в градиенте плотности хлористого цезия или на колонке с метилированным сывороточным альбумином их можно разделить на тяжелую и легкую цепи ДНК. В опытах in vitro обе цепи могут служить затравкой для РНК-нолимеразной реакции. Однако если из зараженной фагом бактериальной клетки выделить РНК, синтезированную in vivo, то такая РНК образует [c.237]

Фракцию быстрометящейся РНК обрабатывали в специальных условиях раствором ДНК, выделеино из асцитной опухоли Кребс И, выдерживали в течение 2 час при температуре 57° и медленно охлаждали до 25—30°. Затем смесь центрифугировали в градиенте плотности хлористого цезия и установили, что полоса, соответствующая по оптической плотности ДНК, радиоактивна. Это свидетельствовало о том, что между цепью ДНК и цепью радиоактивной РНК образовался гибрид. Никакой гибридизации не наблюдалось, если брали какую-либо чужую ДНК, например ДНК из зобной железы теленка (фиг. 84). [c.245]

Для седиментационных экспериментов удобной средой является забу-ференный раствор сахарозы с линейным градиентом плотности (обычно между 5 и 20%). Такой градиент можно создать в центрифужных пробирках до начала работы при помощи простого аппарата для перемешивания. В ряде случаев вместо сахарозы используют самообразующийся градиент плотности хлористого цезия. Седиментацию вещества в градиенте плотности можно регистрировать непрерывно при помощи ультрафиолетовой оптики, которой снабжена аналитическая центрифуга. Вместо этого можно также просто прокалывать дно пробирки или отбирать пробы с помощью сифона, опущен-в ого до самого дна пробирки. Отобранные пробы собирают в отдельные пробирки на коллекторе фракций. Концентрацию вещества в каждой из фракций определяют по поглощению света (в ультрафиолетовой области при 260 ммк), по реакционной способности (содержание дезоксирибозы), по биологической активности, по содержанию определенной радиоактивной метки (например, Р ) и т. д. [c.138]

В 1961 г. в журнале Nature были опубликованы работы двух групп авторов, сыгравшие исключительную роль в формировании современных представлений о процессах биосинтеза белка. В обоих случаях было использовано препаративное ультрацентрифугирование в одном из них компоненты бесклеточнои системы разделяли в градиенте плотности хлористого цезия, в другом использовали градиенты концентрации сахарозы. [c.8]

Рибосомная ДНК — часть внутриклеточной ДНК, определяющая структуру рРНК. Характеризуется высоким содержанием (Г + Ц)-пар и поэтому может быть легко отделена от остальной части генома путем центрифугирования в градиенте плотности хлористого цезия. В структуре ее содержится эквимолярное кмичество цистро-нов 28S- и 18S-PHK. Гены этих РНК чередуются и структурно тесно сцеплены друг с другом. [c.76]

Катенан получали следующим образом. ДНК, выделенную из фага 186 [78], циклизовали и после седиментации получали 58 вес.% мономера и 21 вес.% димера. Затем ДНК ЯсЬбт, меченную 5-бромурацилом (5 мкг/мл) (получена по методу Болдуина и сотр. [78]), перемешивали с различными количествами циклической ДНК 186 и отжигали. После этого продукты реакции центрифугировали в градиенте плотности хлористого цезия. Появление новых веществ с промежуточной плотностью указывало на образование катенанов. Результаты опыта приведены в табл. 1, где [c.46]

Одна часть раствора гибридной ДНК, выделенной из меченных 15N бактерий Е. oli, выращиваемых в течение одной генерации в среде, содержащей N, денатурирована таким образом, чтобы произошло разделение двух комплементарных полинуклеотидных нитей. ДИК-свидетель, выделенная из культуры пневмококков, была добавлена как к неденатурированной (Л), так и к денатурированной (Б) гибридной ДНК . соН. Оба образца ДНК исследовали центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия. На оси ординат показано поглощение ультрафиолетовых лучей и, следовательно, концентрация ДНК в градиенте плотности. [c.197]

Центрифугирование в градиенте плотности хлористого цезия риоосом нормальных и зараженных фагом бактерий, а также постинфекционной РНК, синтез которой индуцируется фагом. Светлые кружки — оптическая плотность при 254 нм (т. е. общее содержание нуклеиновой кислоты), темные кружки — радиоактивность (т. е. содержание меченой РНК) в каплях, собранных через отвсрстне [c.392]

Сателлитная ДНК Многие виды ДНК, особенно относящиеся к фракциям высокоповторяющихся последовательностей, характеризуются как сателлитная ДНК. При центрифугировании фрагментированной ДНК в градиенте плотности хлористого цезия выявляется основная полоса или пик. По обе стороны от основного пика часто видны маленькие пики. Соответствующая им ДНК и называется сателлит-ной. Количество и локализация пиков сател-литной ДНК видоспецифичны (рис. 2.79). Локализация пиков в градиенте плотности хлористого цезия определяется нуклеотидным составом последовательностей. Отдельный пик может стать заметным только в том случае, если состав этой фракции отличается от состава основной фракции ДНК. В хромосомах сателлитная ДНК обычно соответствует конститутивному гетерохроматину. У человека она находится также вне центромерной области в Y-хромосоме и в хромосомах 1, 9 и 16. Она [c.116]

О сателлитной ДНК человека говорилось в разд. 2.3.1.2. Речь шла о том, что термин сателлит Хфименяется при описании результатов центрифугирования ДНК в градиенте плотности хлористого цезия, которое, помимо основного пика ДНК, выявляет ряд минорных компонентов, специфичных для каждого вида (рис. 2.80). Сателлитная ДНК состоит из относительно коротких, высокоповторяющихся последовательностей их биологическая функция неизвестна, однако вполне возможно, что они оказывают влияние на кроссинговер во время мейоза [437]. У людей выявлено, выделено и охарактеризовано четыре фракции сателлитной ДНК- AT I-IV они составляют около 4% ДНК человека или 1/5-1/6 всей его высокоповторяющейся ДНК. Эти четыре сателлитные фракции транскрибировали для получения радиоактивных комплементарных кРНК, которые затем гибридизировали in situ с метафазными хромосомами людей и человекообразных обезьян (рис. 7.7) с целью выяснения их эволюционной истории. Эти исследования показывают, что неполные данные могут использоваться для построения гипотезы, хорошо вписывающейся в сложившиеся теоретические конструкции. [c.15]

Для субклонирования используется векторная плазмида рВК322. Этот вектор является Атр Те1 Выделяют ДНК этой плазмиды и проводят ее очистку равновесным центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия с бромистым эти- [c.52]

Если требуется большое количество чистой ДНК, грубые экстракты ДНК могут быть очищены дифференциальным центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия, содержащего бромистый этидий (БЭ) (приложение 4[П]). Затем для удаления солей ДНК подвергают диализу, осаждают из, раствора и концентрируют с помощью этанола. На этой стадии удаляются и многие низкомолекуляраые примеси. ДНК, очи- [c.237]

У обоих фагов Одна цепь ДНК отличается от другой по плавучей плотности. Благодаря этому после плавления ДНК этих бактериофагов тяжелую и легкую цепи можно разделить при помощи центрифугирования в градиенте плотности хлористого цезия. Если теперь взять только тяжелые цепи ДНК, то благодаря тому, что Za -оперон был включен в геномы Я и ф 80 в противоположных ориентациях, лишь один участок этих цепей будет иметь комплементарные последовательности оснований. Это участок ДНК /ас-оперона. Тогда при гибридизации тяжелых цепей получается совершенный дуплекс только на участке Za -оперона, а остальные части цепочек останутся неспаренными (рис. 11.6, А). Их удаляли действием нуклеазы, специфичной к однонитевой ДНК, и таким образом получили ДНК генов лактозного участка Е. соИ в чистом виде (рис. 11.6, ). Эксперимент Дж. Беквита и других принято считать началом генной инженерии. Поскольку подход к выделению /ас-оперона весьма специфичен для бактерии Е. соН, его сменили другие приемы, применимые в работе с любыми организмами. [c.268]

Затем клегки, выращенные на среде, содержащей только азот переносили на среду с и продолжали инкубацию. Через определенный промежуток времени брали пробы клеток, выделяли из них ДНК, очищали от примесей и анализировали в градиенте плотности хлористого цезия. Результаты этого эксперимента приведены в табл. 15. [c.33]

Часть клеток, выращенных на среде с собирали, промывали средой, разрушали, после чего из гомогената методом дифференциального центрифугирования выделягш субклеточные фракции. Из каждой фракции выделяли ДНК и анализировали ее в градиенте плотности хлористого цезия (табл. 16). [c.34]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология