Очистка вирусов гриппа

Очистка вирусов гриппа [c.181]

Методы очистки вирусов гриппа [c.184]

В последнее время колонки с агарозой стали использовать для очистки и фракционирования вирусов растений и животных [250, 763, 764]. Так, Пеппер [633] использовал хроматографию на колонке с фосфатом кальция с последующей гельфильтрацией на 4%-ной агарозе для очистки вируса гриппа А2. При подобной двухэтапной процедуре достигалась 860-кратная очистка вируса по белку. При этом вирус гриппа отделялся от рибосом [140]. [c.146]

На рис. 18.11 показан пример полной очистки вируса гриппа от сопутствующих белков на колонне, заполненной одним из макропористых сит — глюкозосилохромом. Вирус гриппа не удерживается необратимо на модифицированном так кремнеземе и из-за молекулярно-ситового эффекта выходит из колонны первым. Лишь после этого появляется пик сопутствующих ему белков. [c.344]

Разработаны многочисленные методы очистки вирусов гриппа из аллантоисной жидкости или из культуральной среды. Выбор конкретного метода определяется требуемой степенью чистоты. Чистоту полученного вируса можно установить с помощью электрофореза вирионных белков в полиакриламидном геле (рис. 6.5), но, как и в случае всех оболочечных вирусов, почкующихся через плазматическую мембрану, даже при самой тщательной очистке невозможно избежать контаминации вируса клеточными белками. Кроме того, вирус может быть плео-морфным, что осложняет его очистку центрифугированием в градиентах плотности. Тем не менее при работе с вирусами, дающими высокий титр в культуре клеток или куриных эмбрионах, удается получить препараты, степень контаминации которых клеточными белками незначительна. На первой стадии очистки из содержащей вирус аллантоисной жидкости или культуральной среды удаляют клеточный дебрис с помощью низкоскоростного центрифугирования (10 мин при 2000—10 000 д). Все стадии следует проводить при 0°С, чтобы свести к минимуму потери инфекционности и протеолиз вирионных белков. [c.181]

Методы адсорбции. Еще в 1941 г. Солк [707] применил метод адсорбции я элюции на фосфате кальция для концентрирования и очистки вируса гриппа. За эго время было испытано множество разнообразных веществ, специфически сорбирующих вирусы каолин, активированный уголь, коллоидальный гипс, бентонит, окиси и гидроокиси металлов и другие минеральные сорбенты. В настоящее время для предварительного концентрирования и частичной очистки вирусов применяют лишь фосфат кальция и сульфат бария. Для концентрирования и очистки миксовирусов в настоящее время применяют метод адсорбции-элюции на эритроцитах, основанный на феномене, обнаруженном впервые Херстом [402] в 1941 г. и получившем название гемагглютинации. Процесс адсорбции вируса гриппа на эритроцитах был подробно изучен М. И. Соколовым [101] в 1949 г. Т, В. Еремеев и О. М. Чалкина [29] усовершенствовали этот метод, использовав для адсорбции формалини-зированные эритроциты. [c.44]

Ф, Г. Исупов и Н. П. Тагирова [42] проводили сравнительную очистку вирусов гриппа, кори, бешенства и аденовирусов с помощью депротеиыизации фторуглеродами. Очистка вируса гриппа фреоном-113 давала лучшие результаты по сравнению с методом адсорбции и элюции на куриных эритроцитах, но повторная обработка фреоном-113 приводила к падению титра вследствие удаления g-aнтигeнa. Авторы показали, что этот метод был эффективен только по отношению к аденовирусам. [c.89]

Удобен и эффективен метод концентрирования и очистки вируса гриппа из аллантоисной жидкости при помощи сернокислого бария [574]. Сульфат бария в виде водной суспензии (12,5 г на 100 мл дистиллированной воды) прибавляют к равному объему вируссодержащей аллантоисной жидкости и встряхивают 10 минут при комнатной температуре. Смесь оставляют на ночь при 4°. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок сульфата бария ре суспендируют в Vio исходного объема 0,25 М цитрате натрия, pH 8. Осадок перемешивают в гомогенизаторе нри комнатной температуре 5 минут. После стояния в течение ночи при 4 эяюат отсасывают, а осадок промывают 0,25 М раствором цитрата натрия, pH 8. Элюаты объединяют и центрифугируют при 800 g в течение 15 минут. После цикла дифференциального центрифугирования вирус ресуспендируют в 0,01 М фосфатном буфере, pH 7,2. Выход вируса составляет 70—75% при 500-кратной очистке. [c.103]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология