Вирусы, фракционирование

Фракционирование белков методом гель-фильтрации используется довольно редко, очевидно, ввиду низкой (по сравнению с другими хроматографическими методами) эффективности, присущей самому процессу (см. выше). Однако в тех случаях, когда число компонентов белковой смеси заведомо невелико, такое фракционирование может оказаться вполне эффективным приемом. Так, четыре главных белка вируса рака молочной железы мышей были успешно разделены по молекулярной массе методом гель-фильтрации их ком- [c.139]

Эта сорбция носит, по-видимому, ионный характер и происходит за счет отрицательно заряженных силанольных групп на поверхности стекла. Здесь трудно ожидать надежной воспроизводимости, поэтому, вероятно для фракционирования сорбцию на стекле применяют редко (заметим, однако, что сорбция на пористом стекле широко применяется для очистки и концентрирования вирусов). Были исследованы эффективность и условия сорбции аминокислот [c.247]

Ультрафильтрация — это процесс разделения, фракционирования и концентрирования растворов с помощью полупроницаемых мембран. При этом жидкость непрерывно подается в пространство над мембраной под давлением 0,1... 1,0 МПа. Процессы ультрафильтрации выполняют на мембранах со средним диаметром пор от 0,01 до 0,1 мкм, называемых ультрафильтрационными мембранами. В процессах ультрафильтрации из исходной смеси отделяют самые мелкие бактерии и сферические вирусы, крупные белковые молекулы и т. п. Эти процессы используют для стерилизации жидких сред. [c.518]

Применяется для фракционирования и очистки белков, ферментов, вирусов, пептидов, нуклеиновых кислот, нуклеотидов и других веществ среднего и высокого молекулярного веса. Главная область применения — препаративная биохимия. [c.280]

Стремительное развитие биоорганической химии, физической химии полимеров и молекулярной биологии дало хроматографии новый объект исследований — высокомолекулярные соединения. Возникла необходимость в разделении синтетических полимеров и биополимеров, нуклеиновых кислот, белков, а также вирусов, фагов, рибосом и пр. Достигнутый в этом направлении успех позволил одному из крупнейших специалистов в области молекулярной биологии Френсису Крику сказать, что хроматография наряду с рентгеноструктурным анализом, электронной микроскопией и ультрацентрифугированием обеспечила все наиболее крупные успехи молекулярной биологии. Здесь следует особо выделить методы фракционирования биополимеров на ионообменных целлюлозах [2] и основанную на биоспецифической сорбции афинную хроматографию [3]. [c.10]

Том 3 посвящен практическому применению жидкостной колоночной хроматографии для анализа широкого круга соединений, включая как неорганические (изотопы), так и органические вещества, имеющие синтетическое (элемент- и металлорганиче-ские соединения, пестициды, красители, полимеры и некоторые лекарственные препараты) и природное происхождение (ферменты, нуклеиновые кислоты и их компоненты, алкалоиды, антибиотики, витамины, пигменты и гетероциклические соединения). Описана также возможность применения жидкостной хроматографии для фракционирования клеток, вирусов (и фагов) и субклеточных частиц. [c.4]

Поскольку вирусы во многом сходны с нуклеиновыми кислотами, мы приведем здесь лишь несколько примеров их очистки или фракционирования. Вирусные частицы легко отделить от различных низкомолекулярных примесей [82, 83], в том числе и от протами-на, который используют для осаждения, например, вируса полиомы. После растворения в крепком растворе поваренной соли вирус можно отделить от белка на сефадексе 0-75 [84] (см. также [77, 78]). Однако для разделения различных вирусов ввиду их значительных размеров необходим гель с максимальными размерами пор (см. гл. И). Для этого может служить гранулированный [85] или сферический [86, 87] гель агара, а также специальное пористое стекло [88]. Палочкообразные вирусы в таком случае распределяются [c.223]

Применяют сефадексы для фракционирования высокомолекулярных веществ (вплоть до вирусов), очистки и обессоливания биологических субстратов, фрак- [c.56]

Интервалы фракционирования по мол. массе (белки, вирусы) Предельное давление в колонке, см вод. ст. Скорость Зернение [c.60]

Для выделения и отделения небольших количеств вирусов из больших объемов воды разработана сложная система центрифугирования и фракционирования [16]. [c.281]

Вирусные частицы впервые были очищены и выделены в кристаллическом виде Стенли, которому удалось перекристаллизовать вирус табачной мозаики при помощи фракционирования сернокислым аммонием. В некоторых отношениях вирус ведет себя подобно чистому белку. Так, например, его можно растворить, а затем перекристаллизовать при осаждении сернокислым аммонием. Однако полученные вирусные кристаллы являются, повидимому, живыми , так как они обладают способностью размножаться в растениях, которым были введены следы вируса. Количество вируса может при этом за 4 дня увеличиться примерно в 1 ООО ООО раз по сравнению с тем количеством, которое было введено [112]. [c.397]

Методы, связанные с применением ионообменных смол, целлюлоз или гелей, основаны на одном и том же принципе. При других методах фракционирования на колонках, когда используются более или менее инертные гели, состоящие из шариков различной пористости, разделение происходит главным образом благодаря различию в размерах разделяемых частиц. Так, применение агара или, еще лучше, агарозы вместо декстрановых гелей дало возможность распространить принцип, лежащий в основе фракционирования с помощью сефадекса, на частицы, размеры которых соответствуют размерам вирусов [3, 470]. Но каковы бы ни были эти различия, во всех методах, связанных с применением гелей, более или менее важную роль в процессе разделения играет ионный обмен. [c.44]

В последние годы исследование проблем вирусного онкогенеза носит очень интенсивный характер, поскольку ученые надеются получить при этом ценную информацию о канцерогенезе у человека. Биологическая сложность этого явления ставит исследователя в очень трудное положение. Тот факт, что большинство онкогенных вирусов никогда не достигает высокой концентрации и что многие из них в ходе онкогенеза утрачивают свою целостность, делает эти вирусы трудно доступным объектом для биохимического исследования. До сих пор излюбленными методами исследователей, занятых изучением онкогенных вирусов, были иммунологические методы. Однако появившаяся недавно возможность метить вирусы радиоактивными атомами открыла новое поле для применения методов молекулярной биологии, таких, как фракционирование центрифугированием в градиенте концентрации сахарозы и гибридизация. [c.266]

Рис. 2.4. Примеры фракционирования градиентов, содержащих радиоактивно меченный вирус, с помощью устройства, показанного на рис. 2.3. а — меченный f 5S]-метионином вирус, фракционирование градиента с помощью устройства типа (а) (фракции по 2 мл) б — меченный Р вирус, фракционирование градиента с помощью устройства типа (б) (фракции по 2 мл) в — меченный 35S]-метионином вирус, фракционирование с помощью устройства типа (е) фракции по 0,5 мл). По оси абсцисс отложены номера фракций, а по оси ординат —радиоактивность в 50 мкл, выраженная в имп./мин-10 . Направление центрифугирования во всех случаях справа налево данные для верхних фракций градиентов не приведены. А — пик инфекционных вирионов (160S) В — пик пустых капсидов (80S) С — пик неинфекционных РНК-со-держащих частиц (130S)

Сефакрилы используют для очистки плазмид, рибосом п даже целых вирусов, для фракционирования рестрпктазных фрагментов ДНК и др. Соответствующие пртгеры приведены ниже. [c.119]

Агароза Сефароза СМ-сефароза Поперечно сшитый полиса-1 харид на основе нейтрального компонента агара Сшивка -СН2-СН(0Н)СН2-0-СН2- образуется в результате взаимодействия с 2,3-дибромпро-панолом Карбоксиметильная -О-СНг -СОО- Для фракционирования очень крупных молекул, высокополимерных ДНК вплоть до вирусов Носитель для аффинной хроматографии Катионообменная хроматография [c.239]

Шведский ученый Пер-Оке Альбертсон предложил использовать для разделения бактерий, вирусов, фрагментов клеток, мембран, ядер, белков, нуклеиновых кислот и любых других частиц биологического происхождения двухфазные водные растворы полимеров — иолиэтиленгликоля, декстрана и их производных [2, 279, 280]. Фракционирование в двухфазной водной системе основывается на избирательном распределении частиц между этими фазами, аналогичном распределению растворимых веществ. Метод Альбертсона получил широкое распространение и используется во многих биохимических и микробиологических лабораториях, так как позволяет в мягких условиях, без нарушения структурной целостности и изменения нативных свойств осуществлять выделение и очистку лабильных биологических объектов, а также дать определенную информацию о их строении. Реализация этого метода в промышленном масштабе, например, для выделения вирусов или получения чистых ферментов, не встречает, по мнению автора, принципиальных трудностей, однако в очистке воды он не может быть использован. Очевидно, и любая другая модификация экстракции жидкость — жидкость неприменима при микробной очистке промышленных сточных вод и, конечно, такой метод совершенно непригоден для водоподготовки. [c.194]

Данная глава посвящена выделению хроматографическими методами интактных клеток и субклеточных частиц. Многие исследователи выделяют вирусы и субклеточные частицы хроматографированием на пористых стеклах, гелях, ионитах для фракционирования клеток чаще всего пользуются пористыми стеклами. Очевидно, наиболее перспективным в этом отношении методом следует считать аффинную хроматографию. Действительно, фракционирование клеток на хроматографических носителях, так называемая хроматография сцепления (adheren e), имеет много общего с аффинной хроматографией. Клетки определенного типа вначале более или менее избирательно сорбируют на носителе, а затем после удаления сопутствующих примесей элюируют подходящим элюентом. Однако на практике вторую стадию часто опускают и проводят элюирование путем экстракции в статических условиях. И наоборот, многие операции, проводимые в статических условиях, можно выполнять на хроматографических колонках. Именно по этой причине чрезвычайно трудно провести четкую границу между строго хроматографическими методами и элюированием в статических условиях. [c.309]

Гидроксилапатит применяют главным образом в препаративной биохимий, для фракционирования и очистки белков, ферментов, вирусов, нуклеиновых кислот, полинуклеотидов, пептидов, полярных липидов. Емкость загрузки колонок по белку составляет 1—5 мг/см и больше. Элюирование адсорбированных веществ и регенерацию колонок осуществляют фосфатными буферными растворами (градиентно, от 0,001 до 0,4 М) или 1 М Na l. [c.32]

Агарозные гранулированные гели применяют для выделения и фракционирования очень крупных молекул, в том числе вирусов, бактериофагов, субклеточных частиц (например рибосом), белков, нуклеопротеидов, нуклеиновых кислот, полисахаридов, Ог других мягких гелей агарозы отличает болёе широкие интервалы фракционирования. Агарозы используют также в качестве носителей иоспецифических сррбентов для аффинной хроматографии (см. разд. 120), [c.62]

В 1954 г. Петерсон и Собер [1] предложили ионообменники на основе целлюлозы, которые оказались очень эффективными при разделении белков, нуклеопротеидов, липоидов и других высокомолекулярных соединений, включая даже вирусы. Принципиальным преимуществом целлюлозных сорбентов по сравнению с ионообменными смолами является возможность фракционирования биологически активных объектов с сохранением их активности. Хроматография таких объектов на ионообменных смолах всегда сопровождается денатурационными явлениями, значительной необратимой сорбцией и в ряде случаев гидролитическими эффектами [2]. [c.181]

Представляют определенный интерес также работы Рейда и Джонса по фракционированию протеинов [219], Даниэлса [220] — по удалению больших количеств (NH4)2S04 из антитоксина дифтерии (смесью Na-катионита и С1-анионита), деионизация вируса полиомиелита [221, 222]. Деминерализация растворов антибиотиков освещена в монографии Самсонова [223]. [c.194]

Среди природных гелей, применяемых при фракционировании методом ГПХ, следует отметить крахмал [167, 186], желатину [190а] и агар [138, 170, 171]. Общим для указанных трех гелей является низкая степень сшивания, пластичность и высокое сопротивление потоку растворителя в колонке. Кроме того, эти гели содержат группы, обусловливающие возможность ионного обмена и адсорбции, поэтому для большинства целей природные гели использовали гораздо реже, чем синтетические, параметры которых легче регулировать. С другой стороны, агаровый гель содержит, вероятно, поры необычно больших размеров. Полсон [138], используя в качестве геля гранулированный агар, смог осуществить фракционирование белков молекулярного веса вплоть до 6,6 10 . Стир и Аккерс [170, 171] на агаровых гелях разделили даже вирусы и компоненты клеток. Полсон [138] получил простое соотношение между концентрацией агара в геле (с) и диаметром молекулы растворенного вещества (ё), проникающей в гель [c.136]

Щелочные боросиликатные стекла можно выщелочить кислотой и щелочью и получить системы с очень однородными по размеру порами в диапазоне 170—2500 А [2196, 219в]. Благодаря узким распределениям по размерам пор пористые частицы стекол обладают уникальными свойствами, позволяющими проводить исследование самого механизма гель-проникающей хроматографии [230], а такн е проводить фракционирование конкретных систем. Обычно можно применять смеси стекол различной степени пористости. На пористых стеклах были проведены разделения искусственных смесей вирусов растений и бычьего сывороточного альбумина [230 а], а также фракционирование образцов полистирола и нолиизобутилена молекулярного веса 10 000-3 400 ООО [2306]. [c.137]

При обработке РНК вируса табачной мозаики РНК-азой Т1 освобождается в виде мононуклеотида около 26,9% общего содержания гуанина таким образом, такое количество гуаниловых нуклеотидов содержится (как полагают) в нуклеиновой кислоте в виде участков из двух или более гуаниловых остатков [173]. Образуются также ДИ-, три- и тетрануклеотиды с гуанозин-3 -фосфатом на конце. Однако независимое определение гуанозин-З -фосфата и гуанозин-2, З -циклофосфата, выделяющихся при действии очищенной РНК-азы Т1 на РНК вируса табачной мозаики, показало, что освобождается около 55,7% общего содержания гуанина (по сравнению с теоретическим значением 24,0% при расчете на беспорядочное распределение оснований) [174]. При подобной обработке дрожжевой РНК выделяется 48,7% общего содержания гуанина при беспорядочном распределении оснований надо ожидать только 27,5%. Однако приводится также значительно более низкая величина процента выделения [559]. Фракционирование на ЭКТЕОЛА-целлюлозе пуриновых олигонуклеотидов (содержащих на конце пиримидиновый нуклеотид) из гидролизатов РНК панкреатической рибонуклеазой показало, что продукты более высокого молекулярного веса особенно богаты остатками гуаниловой кислоты, т. е. действительно имеются цепочки из остатков гуаниловой кислоты [175]. [c.394]

В результате ферментативного воздействия, определяли последовательно после каждого отщепления Ы-концевого остатка по методу Эдмана (см. гл. 6). При изучении гемоглобина (Брауницер был удачно применен последовательный гидролиз белка разными про-теолитическими ферментами. В этом случае на белок действовали трипсином, а затем полученные пептиды гидролизовали пепсином, специфичность которого значительно повышали, ограничивая время реакции. Методические трудности, связанные с фракционированием сложных гидролизатов и определением полной структурной формулы белка, были преодолены в результате упорного труда нескольких групп ученых. Мы теперь знаем полную аминокислотную последовательность инсулина, глюкагона, рибонуклеазы, гемоглобина, белка вируса табачной мозаики, а также кортикотропина и других пептидных гормонов приближаются к завершению работы по установлению строения папаина, лизоцима, химотрипсиногена, трипсииогена, цитохрома с успешно продвигается изучение некоторых других белков. Изучение последовательности аминокислот проводилось на частичных кислотных гидролизатах или на гидролизатах, полученных при действии различных протеолитических ферментов. Чисто химические методы избирательного расщепления пептидных цепей не имели до сих пор значительного успеха, и эта область остается еще нерешенной задачей пептидно химии. [c.117]

Ситовая (гель-фильтрационная) хроматография связана в основном с различием в скоростях диффузии молекул и макромолекул компонентов смеси в поры соответствующих сорбентов, в частности набухающих органических пористых полимеров — сефадексов, биогелей, а также ненабухающих макропористых силикагелей или силохромов и макропористых стекол. В этом случае вещества с большими молекулярными весами, образующие наиболее крупные частицы, практически не диффундируют в поры и поэтому элюируют первыми. Удерживаемые объемы таких веществ на подходящих по размерам пор ситах увеличиваются с уменьшением их молекулярных весов или объемов. Это позволяет разделять олигомеры и смеси полимеров по молекулярным весам и в благоприятных случаях определять их размеры или молекулярновесовое распределение, а также производить препаративное фракционирование полимеров, очистку вирусов и бактерии [8]. [c.414]

Размеры некоторых вирусов столь велики, а их седимента-ционные константы имеют столь высокие значения (от 150 S и, по крайней мере, до 275—350 S), что седиментация даже при относительно слабых гравитационных полях заканчивается довольно быстро. Например, при ускорении, равном 60 000 X ё, в течение 1 часа был получен вирус папилломы кролика 99,9%-ной чистоты [285]. Белки с размерами молекул, не превышающими размеры молекул гемоглобина, удается сконцентрировать в небольшом пространстве на дне пробирки в течение примерно 4 час. при относительной центробежной силе, соответствующей 100 000 — 200000X5 [21]- В благоприятных случаях можно достигнуть значительного разделения двух белков, седиментационные константы которых различаются в 2—3 раза. Для веществ, которые по скорости оседания мало отличаются друг от друга, может оказаться необходимым многократное ультрацентрифугирование однако следует помнить о том, что если можно изменить соотношение обоих компонентов, то часто увеличивается возможность успешного их разделения с помощью какого-либо иного метода, например химического фракционирования. Методы ультрацентрифугирования полезно применять для удаления смол, гликогена или других полисахаридов, которые часто имеют тенденцию соосаждаться с белками и затрудняют их кристаллизацию. [c.67]

При разделении белков иногда применяются центрифуги типа Шарпля. Гравитационное поле в такой центрифуге при максимальных достижимых скоростях является достаточным для успешного отделения более тяжелых частиц вирусов от основной массы примееей [294]. Центрифуги этого типа полезны также для отделения кровяных шариков от плазмы и бактерий от культураль-ной жидкости и для разделения белиов, осаждаемых в большом количестве из плазмы крови человека с помощью фракционирования спиртом ( метод 6 [181]). Такие центрифуги могут быть также успешно использованы в недавно разработанных методах накопления и разделения форменных элементов крови и в новых методах фракционирования [12, 51, 295]. [c.68]

Кегля на белках раковых тканей или на некоторых вирусах до настоящего времени заканчивались неудачей. Следует также указать на то, что с -лейцин, открытый в гидролизатах волоса старых лошадей [67] с помощью очень остроумного приема, почти наверняка является артефактом, образовавшимся в результате гидролиза или последующего фракционирования аминокислот (фракционированной перегонки эфиров). Высказанная в 1946 г. Риттенбергом и Шемином (168] точка зрения, согласно которой свидетельства в пользу существования rf-аминокислот в белках животного происхождения не являются убедительными , сохраняет, повидимому, полностью свое значение и в настоящее время и может быть распространена на растительные белки. [c.112]

Получение ультрафиолетовых спектров поглощения вирусов — метод в наши дни весьма доступный, так как регистрирующие спектрофотометры имеются сейчас почти во всех лабораториях. Для регистрации спектра требуется всего лишь 0,05—0,2 мг вируса, причем материал этот может быть использован повторно. По характеру кривой поглощения можно судить о содержании в вирусе белков и нуклеиновых кислот. Отношение величины поглощения при 260 и 280 нм ( 260/ 280)1 а также отношение ыакс/ мин характеризует относительное содержание нуклеиновых кислот и белков в пробе, а отсутствие изменений в характере спектра после дальнейшей очистки и фракционирования препаратов вируса служит дополнительным указанием на чистоту выделенного вируса (см. гл. IV, разд. В). [c.48]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология