Стрептавидин

Нормальная ДНК Г. Связывание зондов со стрептавидином отмывание [c.197]

В. Добавление конъюгата стрептавидин-щелочная фосфатаза [c.200]

Конъюгат стрептавидин-щелочная фосфатаза [c.200]

Рис. 9.12. Выявление мутаций в разных сайтах одного гена. Б - биотин СА -стрептавидин ЩФ — щелочная фосфатаза.

Характеристики Авидин Стрептавидин [c.67]

Авидин и стрептавидин в качестве меченых зондов 68 [c.276]

Если частота использования кодонов у чужеродного гена отличается от таковой у организма-хозяина, то проблему нехватки специфических аминоацил-тРНК можно решить, синтезировав часть гена-мишени или даже весь ген с более близким к хозяйскому организму набором кодонов. Так, в одном из исследований было показано, что количество стрептавидина, образу-юшегося при экспрессии синтетического гена с ОС-содержанием 54%, было в 10 раз больше, чем при экспрессии природного гена с СС-содержанием 69%. Однако этот подход довольно сложен и может применяться лишь в редких случаях. [c.129]

Добавляют авидин (белок куриного яйца) или стрептавидин (бактериальный аналог авидина) (рис. 9Л, Б). [c.190]

Рис. 9.10. Метод ПЦР/ЛОЗ. Б — биотин Д — дигоксиге-нин ЩФ — щелочная фосфатаза СА - стрептавидин.

Чтобы определить, произошло ли лигирование, 5 -конец зонда X метят биотином, а З -конец зонда V — дигоксигенином, низкомолекулярным соединением, связывающимся с соответствующим антителом. После гибридизации и лигирования проводят денатурацию ДНК для высвобождения гибридизовавшегося зонда и переносят смесь в небольшую пластиковую лунку, покрытую стрептавидином. Лунку промывают, чтобы удалить весь материал, кроме связавшегося со стрептавидином биотинилированного зонда. Затем добавляют в лунку антитела к дигоксигенину, предварительно соединенные со щелочной фосфатазой. После промывания, в ходе которого происходит удаление несвязанного конъюгата, добавляют бесцветный хромогенный субстрат. Окрашивание раствора в лунке свидетельствует о связывании антитела к дигоксигенину с зондом, меченным дигоксигенином, т. е. о том, что этот зонд был лигирован с зондом, меченным биотином. Если же окрашивания не происходит, значит лигирования не было. [c.198]

Рисунок 21. Определения малых количеств человеческой ДНК методом гибридизации биотинилированного олигонуклеотида с образцами иммобилизованной ДНК. Визуализация образовавшегося ассоциаты происходит путем связывания с биотином конъюгата Пероксидазы хрена со Стрептавидином и дальнейшего окисления хромогена ТМВ.

Добавить 30 мл предварительно нагретого Отмывающего раствора и 180 мкл конъюгата (Пероксидаза хрена — стрептавидин). Инкубировать на водяной бане-шейкер при -1-50ОС ( 1°С) при 50-60 об/мин. в течение 10 минуг ( 1 мин.). После инкубации раствор слить. [c.194]

МОЖНО свести к минимуму с помощью химических или каких-либо другах методов, стрептавидин и его койъю1аты являются наилучшим решением этой проблемы. [c.67]

В нашей лаборатории для разработки различных методов иммуноанализа мы применяли имеющиеся в продаже конъюгаты авидина с ферментами, а также синтезировали препараты биотинилированных белков и стрептавидина с хемилюминесцентной меткой. [c.67]

Получение белков с хемилюминесцентной меткой. Стрептавидин или очищенные фракции IgG моноклональных антител обрабатывали сукцинимиднымн производными аминобутил-этилизолюминола (ABEI-H), как описано ранее [4]. Полученные конъюгаты очищали гель-фильтрацией на сефадексе G-25 и хранили при -20 °С. [c.67]

Авидин и стрептавидин в качестве меченых зондов. Принципиальная схша этого метода представлена на рис. 5.3. Исследуемый образец инкубировали с высокоаффинными моноклональными антителами, ковалентно связанными с полистирольными шариками диаметром 6,5 мм [19 ]. Затем в систему вводили биоти-нилированные антитела к другим эпитопам антигена. По завершении иммунологической реакции добавляли авидин, меченный ферментом, или содержащий хемилюминесцентную метку стрептавидин. В зависимости от используемого маркера измерение осуществляли спектрофотометрически или по интенсивности люминесценции. [c.68]

Рис. 5 . Калибровочный график определения ЬСН, полученный с использованием авидии-биотиновой системы, стрептавидина с хемилюминесцентной меткой и измерения интеисивности люминесценции.

По завершении иммунологической реакции добавляли стрептавидин, несущий хемилюминесцентаую метку. Через 30 мин гранулы промывали. Интенсивность свечения связанной метки регистрировали при щелочном pH с использованием системы микропе-роксидаза - пероксид водорода [20]. Калибровочный график зависимости логарифма интенсивности хемилюминесценции (произвольные единицы) от логарифма концентрации ЬСН представлен на рис. 5.5 [21 ]. Предел обнаружения гормона с помощью данного [c.71]

В данном разделе описаны различные типы двухцентрового иммунометрического аналиэа для определения hGH в плазме крови. Аналогичные методы можно применять и для определения других пептидных гормонов (например, LH, h G или TSH), поскольку некоторые реагенты (например, стрептавидин и биотинилированные ферменты) универсальны. Для определения нового ант и -на потребуются только иммобилизованные и биотинилированные антитела против различных эпитопов этого антигена. [c.75]

Стрептавидин и биотинилированные ферменты как зонды 73 [c.276]

Молекулярная биотехнология принципы и применение (2002) -- [ c.129 , c.190 , c.191 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.224 ]

Новые методы имуноанализа (1991) -- [ c.66 , c.66 , c.73 ]

Искусственные генетические системы Т.1 (2004) -- [ c.125 , c.126 , c.128 , c.235 , c.242 , c.342 ]

Биосенсоры основы и приложения (1991) -- [ c.75 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.224 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология