Ацетон-нингидриновый раствор

Проявление нингидрином. Раствор нингидрина наливают в ванночку и равномерно пропитывают им хроматограмму. Хроматограмму высушивают под тягой и выдерживают в темноте при комнатной температуре около 12 ч. В этих условиях с нингидрином реагируют все а-аминокислоты (другие аминокислоты дают реакцию при более высокой температуре — около 100°С). Проявление хроматограмм при качественной хроматографии можно ускорить, помещая последние на 5—10 мин в термостат при 60° С. Окраска, получаемая при проявлении аминокислот нингидрином, неустойчива. Ее можно закрепить, опрыскивая проявленную хроматограмму из пульверизатора раствором ацетона, содержащим азотнокислую медь. Стойкую окраску можно получить при внесении в нингидриновый реактив кадмия (с. 135) или стронция. Окраска сохраняется в течение нескольких недель при проявлении аминокислот смесью 1%-ного раствора нингид-рнна в ацетоне и 1%-ного раствора хлористого стронция в 20%-ном растворе СН3СООН (1 6). [c.129]

Окрашивание электрофореграммы. В аналитическом варианте мотода высушенную электрофореграмму погружают в 0,5%-ный ацетон-нингидриновый или кадмий-нингидриновый раствор (см. стр. 192) и затем сушат 2—3 ч при 40—50°С. [c.99]

Гидролизат белкового сырья подвергают электрофорезу на бумаге в среде ацетатно-пиридинового буферного р-ра с )Н 5,2 при градиенте потенциала 10 в см в течение 30 мин. -глутаминовая и Ь-аспарагиновая к-ты в процессе электрофореза отделяются от остальных аминокислот, присутствующих в гидролизате, а также друг от друга в виде индивидуальных аминокислот. Электрофореграмму проявляют 0,5%-ным раствором нингидрина в ацетоне, высушивают, прогревают Б течение 3 мин. в сушильном шкафу при 80 . Полоску аминокислот вырезают. Нингидриновый комплекс элюируют [c.512]

После хроматографии в пиридиновых буферах обязательна отмывка бумаги ацетоном. Затем помещают лист бумаги в камеру, насыщенную хлором, на несколько минут, в течение этого времени нингидриновая окраска исчезает. После тщательного проветривания хроматограммы от следов хлора (вытяжной шкаф ) погружают ее в смесь (1 1) 2%-ного (масс./об.) водного раствора крахмала и 2%-ного (масс, об.) KI. Пептиды проявляются в виде темно-синих пятен на розово-голубом фоне (чем длиннее пептид, тем больше интенсивность окраски). [c.269]

Специфические реакции на отдельные аминокислоты. Наряду с нингидриновым реактивом существуют и другие реагенты, дающие цветные продукты с некоторыми аминокислотами. Это свойство избирательного окрашивания часто используют в хроматографии для идентификации отдельных аминокислот. Так, для определения соединений с гуанидиновой группой (аргинин) используют реакцию Сакагуши. Хроматограмму смачивают 0,1%-ным раствором 8-оксихинолина в ацетоне и после ее подсушивания на воздухе слегка опрыскивают из пульверизатора раствором гипобромита (1 мл брома в 500 мл 0,5 н. NaOH). Наблюдается оранжевое окрашивание. [c.131]

Количественное определение глютаминовой кислоты проводилось по следующему методу [12]. Хроматограмму протягивали через 1%-иый раствор нингидрина, испаряли ацетон на воздухе (1—2 мин) и для развития окраски пятен выдерживали в течение 25 мин в термостате при 60 . Нингидриковые производные аминокислот элюировали 4 мл 40%-ного метилового спирта i 2 мл 0,5%-ного раствора хлористого кадмия в 40%-ноы метиловом спирте в течение 2 ч. Растворы колориметрировали на колориметре ФЭК-М со светофильтром № 2 (длина волны 530 ммк). В связи с тем, что цветовой выход нингидриновых производных аминокислот подвержен некоторым колебаниям и оптические плотности растворов различаются даже для различных хроматограмм из одной камеры, на каждый лист наносили стандартный раствор аминокислоты в количестве 10—20у. [c.214]

Нингидриновый реактив. Растворяют 75 мг d lj в 6 мл воды, добавляют 0,3 мл ледяной уксусной кислоты, 2 г нингидрина и 100 мл ацетона [4]. [c.106]

Для определения пролина готовят нингидриновый реактив, содержащий 40 мл 6 М Н3РО4, 60 мл ледяной уксусной кислоты и 2,5 г нингидрина на каждые 100 мл смеси. Для растворения нингидрина эту смесь нагревают до 70° на водяной бане. Хроматограммы обрабатывают 0,02%-ным раствором нингидрина в ацетоне, окрашен- [c.43]

Содержимое колбы после отгонки хлороформа растворяют в 0,2 мл н-гексана или диэтилового эфира и при помощи капиллярной пипетки наносят на пластинку. Операцию повторяют 3—4 раза, каждый раз нанося раствор в центр первого пятна так, чтобы диаметр его не превышал 1 см. Рядом с пятном пробы (слева и справа) на расстоянии 2 см наносят на пластинку стандартный раствор, содержащий предполагаемое в пробе количество пестицидов. Пластинку с нанесенными веществами помещают в хроматографическую камеру, в которую налит подвижный растворитель гексан—ацетон (4 1). После подъема фронта растворителя на высоту 10 см хроматографирование прекращают, пластинку помещают в вытяжной шкаф на 5—10 мин для удаления паров растворителя, обрызгивают до влажного состояния нингидриновым реактивом и помещают в сушильный шкаф с температурой 100° С на [c.52]

Все описанные специфические реакции можно проводить после обнаружения нингидрином. Однако до проведения специфического обнаружения следует снять фиолетовую окраску, вызванную нингидрином. С этой целью хроматограмму погружают в раствор концентрированной соляной кислоты в ацетоне (1 10), после чего сушат. Перед обнаружением триптофана такое обесцвечивание не обязательно, поскольку реагент на триптофан растворен в смеси кислоты с ацетоном и обесцвечивает нингидриновые пятна. Чувствительность обнаружения реагентом Паули и диметиламинобензальдегидом на хроматограммах, обработанных и не обработанных нингидрином, одинакова, а чувствительность обнаружения реагентом Сакагучи после обесцвечивания нингидриновых пятен снижается. [c.126]

Забуференный нингидриновый реактив. Хроматограммы опрыскивают смесью уксусной кислоты (3 мл), пиридина (1,5 мл), ацетона (96 мл) и нингидрина (10 мг)-, бумажные листы можно погружать в эту смесь. Затем хроматограммы сушат на воздухе, после чего помещают на 5 мин в сушильный шкаф с температурой 105°. Каждый день следует готовить свежий нингидриновый реактив. Пиридин перед использованием необходимо перегнать над нингидрином. Для проявления аминокислот берут 1 мкл раствора с концентрацией 1 мг1мл в случае пептидов следует брать большие количества, учитывая при этом длину пептидной цепи. [c.143]

Незабуференный нингидриновый реактив. Более стабильным является незабуференный нингидриновый реактив, который можно использовать для многих хроматограмм. Однако этот реактив не дает такого разнообразия характерных цветных оттенков, как предыдущий. Незабуференный нингидриновый реактив представляет собой 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне он устойчив в течение длительного времени при условии хранения на холоду. [c.143]

Метод 2 [46]. Этот метод позволяет более быстро проводить определение гидролиза гиппурата. Готовят 1%-ный раствор гиппурата натрия в дистиллированной воде и разливают в пробирки по 0,4 мл. Пробирки, закрытые пробками, хранят в морозильнике при —20°С. Перед экспериментом содержимое пробирок размораживают и смешивают с ним до получения очень густой суспензии полную петлю выросшей культуры, взятой с поверхности твердой среды. Пробирку инкубируют в блочном термостате или в водяной бане при 37 °С в течение 2 ч. После инкубации добавляют приблизительно 0,2 мл нингидринового реактива [3,5 г ниигидрина растворяют в 100 мл смеси ацетона и бутанола (1 1, по объему)]. Пробирку не встряхивают [35]. Инкубацию продолжают при 37 С в течение 10 мин. Положительная реакция появление темно-фиолетовой окраски за счет глицина, образующегося при гидролизе гиппурата. Отрицательная реакция отсутствие окраски или наличие лишь слабого фиолетового оттенка. Следует использовать контрольные пробы с микроорганизмами, для которых реакция уже известна. [c.26]

Рис. 5.14. Хроматографическое разделение четвертичных оснований аммония и других основных соединений азота на сильнокислотном катионите [30]. Колонка 3,2X60 см ионит —дауэкс 50W-X8 (200 400 меш) элюент - 1 н. НС1, 90 мл/ч проба —раствор анализируемых соединений по 15 мг каждого в 1 н. НС элюат отбирали порциями по 10 или 20 мл и определяли состав а — нингидриновым методом, о — обрабатывая перйодатом и измеряя поглощение при 36Б нм, в — измеряя поглощение ipH 260 нм, г — обрабатывая смесью цианбромид — сульфаинловая кислота, O —обраба- тывая смесью щелочь — ацетон и измеряя флуоресценцию.

Справочник химика 21

Химия и химическая технология