Распределительная хроматография фронт растворителя

С помощью распределительной хроматографии легко осуществляется разделение аминокислот и определение их в-смеси. Метод заключается в том, что каплю смеси аминокислот или гидролизата белка наносят на полоску фильтровальной бумаги, конец которой опускают в подходящий органический растворитель. Растворитель насасывается полоской фильтровальной бумаги и увлекает за собой нанесенные на бумагу аминокислоты. Скорость перемещения аминокислот на бумаге зависит от химического строения аминокислот и от их способности растворяться в подвижном и неподвижном растворителе. В качестве подвижного растворителя употребляют, например, водонасыщенный фенол (или н. бутиловый спирт, амиловый спирт и др.). Неподвижным растворителем является вода, пары которой насыщают фильтровальную бумагу (внешне бумага остается сухой). Чем меньше растворимость аминокислот в воде и чем больше их растворимость в феноле, тем быстрее они движутся вслед за фронтом органического растворителя. [c.21]

Величина R может изменяться в пределах от 0,00 до 1,00, при этом наилучшему разделению соответствуют значения от 0,1 до 0,8. Экспериментально установлено, что в двухфазных системах растворителей вещества, примерно одинаково растворяющиеся в обеих фазах, имеют У / около 0,5. Однако большинство веществ не одинаково растворяются в обеих фазах, поэтому располагаются либо ближе к линии старта, либо ближе к фронту растворителя. Вследствие этого в гомологических рядах не все члены имеют удовлетворяющие исследователей значения Ri. Разности величин приходящиеся на одну СНз-группу, не постоянны в гомологических рядах они максимальны в середине рядов и уменьшаются у их концов. В связи с этим в распределительную хроматографию введена новая величина являющаяся функцией / / [c.354]

С помощью бумажной распределительной хроматографии легко разделить аминокислоты и определить их в смеси. Этот метод основан на том, что органический растворитель, перемещаясь вдоль полос хроматографической (фильтровальной) бумаги, увлекает за собой растворенные в нем аминокислоты. Каждая аминокислота в своем движении достигает определенного уровня. Этот уровень характеризуется коэ ициентом / /, который является отношением расстояния от середины пятна до места нанесения раствора к состоянию расположения фронта растворителя, например, / / лейцина равен [c.26]

Важной характеристикой в бумажной распределительной хроматографии, так же как и в ТСХ, является К =х1х, где х — смещение зоны компонента х/ — смещение фронта растворителя. Методика определения в бумажной хроматографии не отличается от соответствующей методики в ТСХ, основанной на измерениях в соответствии с рис. 17.8. В начальный момент времени хроматографируемая проба наносится на начальную (стартовую) линию бумажной полоски и подвергается действию подвижной фазы (растворителя). Если компоненты окрашены, через некоторое время на хроматограмме можно будет видеть отдельные цветные пятна. Первый компонент будет иметь Я/,=х1/х1, второй — Я 2=Х2/Х1 и т. д. [c.348]

Возможности разделения в распределительной хроматографии зависят, главным образом, от коэффициентов распределения компонентов анализируемой смеси между неподвижной и подвижной фазами или от коэффициента Rf. При очень больших Rf компоненты пробы не успевают разделиться, а при малых / / слишком малой оказывается скорость процесса разделения. В связи с этим решающее значение приобретает выбор эффективно работающих растворителей. В выбранных растворителях отдельные компоненты пробы должны иметь разную растворимость, иначе разделения вообще не произойдет. Кроме того, в растворителе, являющемся подвижной фазой, растворимость каждого компонента должна быть меньшей, чем в растворителе неподвижной фазы, но все же составлять вполне заметную величину. Это ограничение связано с тем, что если растворимость вещества будет очень велика, вещество будет двигаться вместе с фронтом растворителя, а если растворимость будет очень мала, вещество останется на начальной линии (рис. 63). [c.165]

Распределительная хроматография на бумаге. Теория колоночной хроматографии была перенесена и в бумажную распределительную хроматографию. Бумага удерживает в порах воду (22%)—неподвижный растворитель, сорбируя ее из воздуха. Нанесенные на бумагу хроматографируемые вещества переходят в подвижную фазу и, перемещаясь с различными скоростями по капиллярам бумаги, разделяются. Однако определить значение Кр так, как это определялось в колоночном варианте, здесь невозможно, поэтому для количественной оценки способности разделения веществ на бумаге введен коэффициент представляющий собой отношение величины смещения зоны вещества (х) к смещению фронта растворителя (х ) (рис. 22), т. е. [c.79]

Тонкослойная хроматография. Этот способ разделения веществ основан на адсорбционной, распределительной или обменной хроматографии Обычно эти процессы протекают совместно. Тонкослойная хроматография очень похожа на бумажную, но вместо листа бумаги используют тонкий слой порошкообразного адсорбента. Для этого на прямоугольную стеклянную пластинку наносят тонкий слои (обычно 2—3 мм) гидроокиси алюминия или другого подходящего адсорбента на линии старта помещают исследуемые образцы и свидетели . Затем пластинку помещают в слегка наклонном положении, чтобы нижний конец, вблизи которого находится линия старта, был погружен в растворитель. Через некоторое время фронт растворителя подойдет к верхнему концу пластинки тогда проявляют пятна разделившихся веществ либо специальными краси- [c.147]

При отсутствии заметной адсорбции или ионного обмена движение вещества в основном зависит от его растворимости в подвижной фазе (проявляющем растворителе). Величину можно так же рассматривать как отношение скорости движения зоны выделяемого вещества к скорости движения фронта растворителя, т. е. подвижной фазы. По теории распределительной хроматографии величина R закономерно связана с коэффициентом распределения, что подтверждают и опыты. Коэффициент распределения является логарифмической функцией химического потенциала данного вещества, разделенного на величину RT. [c.199]

На рис. 99 показана схема распределительной хроматографии на бумаге ( восходящая хроматография ). На стартовую линию полоски хроматографической бумаги раздельно наносят по капле исследуемого раствора смеси вещества (А + Б) и предполагаемого компонента смеси — свидетеля (рис. 99,/), Нижний край полоски бумаги погружают в растворитель. Когда фронт растворителя почти достигнет верхнего края полоски бумаги, пройдя путь (рис. [c.317]

Каплю анализируемого раствора наносят на нижнюю часть полоски на расстоянии 2—3 см от края (линия старта). Вторую линию наносят на расстоянии 2—3 см от верхнего края полоски (линия фронта растворителя). Край полоски ниже линии старта погружают в небольшой сосуд с соответствующим растворителем. Жидкость в силу капиллярности перемещается по полоске снизу вверх. (восходящая хроматография) и увлекает с собой растворенные вещества. Последние передвигаются по бумаге с разными скоростями. Это приводит к распределению веществ в разных местах вдоль полоски бумаги (распределительная бумажная хроматография). С наибольшей скоростью движется фронт растворителя, когда последний достигает верхней линии, полоску высушивают и опрыскивают раствором соответствующего реагента (проявителя). При этом разделяемые вещества образуют с реагентом окрашенные пятна. [c.101]

Важной характеристикой в бумажной распределительной хроматографии является величина Rf = x xf, где X — смещение зоны компонента Х/ —смещение фронта растворителя (рис. 63). В начальный момент времени хроматографируемая проба наносится на начальную [c.163]

Принцип распределительной хроматографии основан на различии в коэффициентах распределения аминокислот между водой и органическим растворителем. Особенность метода распределительной хроматографии на бумаге по сравнению с обычной экстракцией ам.инокислот из водного раствора органическим растворителем заключается в том, что одну из фаз, чаще всего водную, помещают на какой-нибудь инертный твердый носитель, а органический растворитель — подвижная фаза,— проходя через первую, извлекает и распределяет аминокислоты на бумаге в соответствии с их коэффициентами распределения. Положение аминокислот на бумаге определяют по отношению скорости движения аминокислоты скорости движения фронта растворителя и обозначают Rf. Величина за висит в первую очередь от строения аминокислоты, затем от системы растворителей, pH среды и сорта бумаги, Чем полярнее аминокислота, тем меньше она растворяется в органических растворителях и тем меньше ее R . Увеличение длины углеродной цепи повышает . Введение в молекулу полярных групп, например, гидроксильной, аминной или карбоксильной понижает Rf Так, Rf фенилаланина в системе фенол/вода = 0,85, а тирозиит 0,51. Другие примеры изменения в зависимости от строения аминокислоты представлены на рис. 3 и 4. Подбирая соответствующие смеси растворителей, можно провести достаточно тонкое разделение аминокислот. Наиболее часто пользуются для такого разделения системами вода — фенол — аммиа вода — бутапол — уксусная кислота бутанол — аммиак — коллидин и т. д. Разделение можно проводить на одномерной или двумерной хроматограммах. Можно пользоваться также различными типами распределительной хроматографии на бумаге — нисходящей, восходящей и радиальной. Величины Rt для каждой из систем растворителей оказываются постоянными при соблюдении [c.479]

Распределительная хроматография. Принцип распределительной хроматографии впервые описан Мартином и Синджем в их работе по аминокислотам. В этом случае, вместо равновесия между твердой и жидкой фазами, устанавливающегося при работе по методу Цветта, равновесие устанавливается между двумя жидкими фазами, причем одна из жидкостей поддерживается в состоянии геля или находится на подходящем субстрате. Сначала был применен силикагель, способный адсорбировать до 70% воды и сохраняющий при этом вид сухого порошка. При пропускании раствора исследуемой смеси в несмешивающемся с водой растворителе (например, в хлороформе) через колонку из силикагеля происходит разделение компонент смеси, обусловленное различиями их коэффициентов распределения. Впоследствии в качестве стационарной фазы стали применять листы фильтровальной бумаги, насыщенной водой. Наиболее подходящими органическими растворителями оказались фенол, н-бутиловый спирт, коллидин и некоторые другие растворители, частично смешивающиеся с водой. Индивидуальные аминокислоты были идентифицированы по цветным реакциям и охарактеризованы величинами Rf, представляющими собой отношения скорости движения зоны адсорбции к скорости движения фронта растворителя. Можно также измерять и использовать для идентификации отношение расстояния, на которое переместилось данное вещество, к расстоянию, на которое перемещается эталонное вещество (например [c.1512]

М. М. Сенявин в 1959 г. указал на целесообразность применения скорости перемещения полос по колонке ионита взамен констант обмена. )та величина аналогична величине / в распределительной хроматографии, являющейся отношением скорости перемещения полосы иона к скорости перемещения фронта чистого растворителя. М. М. Сенявин рассмотрел возможности разделения смесей ионов элементов главным образом в пределах главных и побочных групп, т. е. по вертикальному направлению периодической системе в зависимости от радиусов ионов. Близки и химико-аналитические свойства соответствующих катионов. Положение ионов, образуемых соответствующими химическими элементами по группам, рядам и диагональному направлению в периодической системе является основой для предсказания условий хроматографического разделения различных смесей ионов на колонках ионообменных смол. Законо мер-ности комплексообразования и применения органических реагентов, как показали А. А. Гринберг и Л. М. Кульберг, также зависят от положения соответствующих элементов в периодической системе. [c.110]

М. М, Сенявин в 1959 г. указал на целесообразность применения (взамен констант обмена) скорости перемещения полос ионита по колонке. Эта величина аналогична величине Rf в распределительной хроматографии, являющейся отнощением скорости перемещения полосы иона к скорости перемещения фронта чистого растворителя. Он рассмотрел возможности разделения смесей ионов главным образом по вертикальному направлению, в пределах каждой главной и побочной группы в зависимости от радиусов ионов. [c.118]

Процедура состояла в следующем конец бумаги, ближайший к разделяемым пептидам, помещали в смесь органических растворителей и воды, налитую на дно герметично закрывающейся стеклянной банки. При этом растворитель поднимался вверх по бумаге. В такой ситуации каждый пептид мог либо мигрировать с растворителем (неполярная среда), либо оставаться на обводненной целлюлозе бумаги (высокополярная среда). Такой метод разделения называется распределительной хроматографией. Пептид с наиболее выраженными неполярными свойствами будет растворяться в растворителе и, следовательно, подниматься вместе с фронтом растворителя вверх по бумаге в то же время самый полярный из пептидов останется на бумаге внизу. Рассматриваемые методы-хроматография на бумаге и электрофорез-дополняют друг друга, поскольку они разделяют пептиды на основе независимых свойств первый-на основе различий в полярности, второй-на основе различий в общем заряде. Вся последовательность проведения анализа - избирательное расщепление белка на небольшие пептиды с их последующим разделением в двух направлениях-называется методом пептидных карт (отпечатков пальцев). [c.93]

Пик 7 наиболее часто встречается при использовании рефрактометрического детектора в жидко-жидкостной распределительной хроматографии, В этом случае компонент, элюируемый в виде относительно узкого пика с указанной формой фронта имеет заднюю часть, замаскированную продолжительным дрейфом нулевой линии. Это связано с тем, что компонент образца нарушает равновесие между подвижной и неподвижной жидкими фазами, существовавшее до его появления в колонке. Детекторы на основе дифференциальных рефрактомеров очень чувствительны к малейшим изменениям в составе растворителя [c.55]

Разделение продуктов гидролиза проводят методом распределительной хроматографии со смесью бутанола, ацетона и воды (40 50 10). Для этого в стеклянный сосуд наливают растворитель так, чтобы закрыть дно. После того как желоб, закрепленный в верхней части сосуда, заполнится наполовину, закрытый сосуд оставляют на несколько часов для насыщения воздуха внутри сосуда парами растворителя. Только после этого лист бумаги помещают в сосуд, погрузив верхний край листа в желоб и придерживая его тяжелой стеклянной палочкой так, чтобы базисная линия находилась на 3—5 см ниже края желоба. Сосуд закрывают крышкой, и спустя 2—3 ч фронт растворителя должен пройти четверть бумажной полосы. (В зависимости от конструкции сосуда и желоба хроматограммы будут несколько различаться, поэтому оптимальное время распространения фронта растворителя можно установить, только повторяя опыт.) Бумагу вынимают и сушат на воздухе. Затем обрабатывают анилинфталатом и после сушки на воздухе в течение 10 мин ее помещают в сушильный шкаф при 100°С еще на 10 мин для проявления сахарида в виде фиолетово-коричневых пятен. [c.251]

Распространенная форма распределительной хроматографии состоит в использовании пол1осок фильтровальной бумаги Обычно каплю рас-створа наносят вблизи конца длинной прямоугольной полоски хроматографической бумаги и оставляют сохнуть. Полоску бумаги подвешивают вертикально в закрытой камере и нижний конец ее до пятна опускают в подходящий растворитель (как правило, способный к смешиванию органический растворитель, содержащий водный раствор кислоты), давая ему возможность диффундировать вверх. Разделяемые вещества образуют хроматограмму, зоны которой располагаются на различных расстояниях от границы смачивания растворителем. Если значения Rf Rf равно отношению расстояний зонь 1 и фронта растворителя от места нанесения пятна) достаточно различаю гся, то зоны не перекрываются. [c.40]

Однако если в высокопроизводительных экстракционных процессах обычно стремятся достичь больших коэффициентов распределения, в процессах распределительной хроматографии они не должны превышать 0,10— ,15. В противном случае компоненты будут перемещаться по полоске бумаги с очень большой скоростью (в пределе—вместе с фронтом растворителя) и вследствие больших значений на полоске данной длины не будет достигнута нужная степень разделения смесей. Этим и объясняется целесообразность использования, например, метилэтилкетона вместо трибутилфосфата однако с таким растворителем в чисто нитратной системе (нитрат аммония на бумаге и разбавленная азотная кислота в органическом растворителе) коэффициенты распределения слишком низки, разделение проходит очень медленно. Поэтому и рекомендуется введение в органическую фазу, вместо азотной кислоты, роданистоводородной кислоты. [c.283]

Эрхард и Крамер [32] разделяли на тонких слоях силикагеля с помощью распределительной хроматографии карбобензокси (ИБО) производные аминокислот, КБО-пептиды, эфиры КБО-пептидов, пептиды со свободной аминогруппой, аминокислоты и хлоргидраты эфиров аминокислот. Для разделения применялись системы, состоящие из бутанола, ацетона, уксусной кислоты и водного аммиака или водного пиридина с различным соотношением компонентов. В этих системах эфиры КБО-пептидов двигаются вблизи фронта растворителя, КБО-пептиды — несколько медлен-нее, хлоргидраты эфиров аминокислот попадают в среднюю часть хроматограммы, а аминокислоты и пептиды остаются вблизи старта [33]. [c.315]

Сравнивая полученное нами уравнение для многократной экстракции с выражением для Rf, легко увидеть, что расстояние, пройденное компонентом, аналогично Имакс, а расстояние, пройденное фронтом растворителя — ль общему числу использованных воронок. Итак, в бумажной и тонкослойной распределительной хроматографии [c.284]

Как и хроматографию вообще, БХ можно разделить на распределительную, адсорбционную и ионообменную, а также на аналитическую и препаративную. По характеру методики мы различаем также проточную (непрерывную) хроматографию, соответствующую проявительной хроматографии в колонках (с тем различием, что не всегда элюируются все зоны), повторное хроматографирование, когда хроматографический процесс прерывают по достижении определенного положения фронта растворителя, хроматограмму сушат, после чего вновь проводят хроматографирование (иногда по нескольку раз) с той же или другой системой растворителей, и, наконец, одно- и двумерную, круговую и центрифужную хроматографию, а также хроматографию на хроматограммах клиновидной формы. В распределительной хроматографии можно выделить нормальную и обращенно-фазную хроматографию. В последнем случае (в отличие от нормального метода) неподвижная фаза более ли-пофильна, чем подвижная фаза. Отдельные типы БХ подробно рассматриваются ниже. [c.59]

При фильтровании раствора смеси веществ через адсорбционную колонку из нее в первую очередь вытекает растворитель, затем растворитель в смеси с наименее адсорбирующимся веществом, затем фракция, содержащая растворитель с первыми двумя наименее адсорбирующимися веществами, и т. д. (см. стр. 57 и рис. 19, а). Состав вытекающей жидкости можно анализировать непрерывно, определяя, папример, показатель преломления, который увеличивается ступенчато по мере появления фронтов отдельных компонентов. Неудобство метода состоит в том, что в чистом виде можно получать только наименее адсорбирующиеся вещества. Достоинством метода можно считать незначительное потребление растворителя при выделении больших количеств веществ. Из методов хроматографирования па фильтровальной бумаге к этой категории молшо также отнести капиллярный анализ в том первоначальном виде, который был предложен Шенбейиом. Однако фронтальный анализ применяется и при обычной распределительной хроматографии, правда, не столько для разделяемых веществ, сколько для самой смеси растворителей. Вода и другие вещества, обладающие большим сродством к целлюлозе, задерживаются в тех частях хроматограммы, которые находятся ближе к источнику растворителя, в то время как по направлению к фронту смесь относительно обогащается менее полярным компонентом. Иногда можно наблюдать второй фронт (например, при комбинировании бутанола с соляной кислотой), в других же случаях переход является непрерывным. [c.42]

Если при помощи подвижной фазы выбранного состава не удается разделить анализируемую смесь, прибегают к способу двумерной хроматограммы. Для получения двумерной хроматограммы применяют квадратные листы бумаги размером 20X20, 30X30 или 40X40 см. В начале опыта каплю исследуемого раствора наносят на бумагу в ее левом углу на расстоянии 5 см от краев (рис. 11.5, а). После высушивания образовавшегося пятна бумагу помещают в сосуд для хроматографирования, опускают нижний край бумаги в один из выбранных растворителей и производят хроматографирование восходящим способом. После того как фронт подвижной фазы достигнет заданного предела в верхней части бумаги, хроматографирование прекращают, бумагу высушивают и поворачивают ее на 90° против часовой стрелки. При этом место нанесения капли исследуемого раствора окажется справа, а линия, по которой происходил подъем зон анализируемых веществ, образует новую стартовую линию (рис. 11.5,6). В таком положении бумагу помещают снова в сосуд для хроматографирования и опускают ее нижний край в подвижную фазу иного состава и хроматографируют по восходяще.му методу. По достижении фронтом новой подвижной фазы заданной высоты хроматографирование прекращают, бумагу высушивают и проявляют. Получают двумерную хроматограмму такого типа, как изображено на рис. 11,5, в. Двумерная хроматография значительно расширяет возможности распределительной ЖЖХ. [c.219]