Хроматография в мочевине на ДЭАЭ-целлюлозе

Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе в присутствии высокой концентрации мочевины является одним из лучших методов фракционирования денатурированных или химически модифицированных белков. [c.207]

Подготовка ДЭАЭ-целлюлозы для хроматографии в С1 "-форме производится так же, как указано выше, но уравновешивание колонки, растворение фракционируемого материала и элюирование осуществляют буферными растворами, содержащими 8М мочевину. В качестве стартового буферного раствора в данном случае используют буферный раствор трис-НС pH 8, содержащий 0,05 М С1 и 8 М мочевины. Чтобы предотвратить агрегацию и ассоциацию молекул фракционируемого материала в присутствии мочевины, к буферному раствору добавляют 0,1% додецилсульфата натрия. В полученном растворе, содержащем оба детергента (мочевину и додецил-сульфат натрия), растворяют фракционируемый материал, который диализуют против того же раствора в течение 24 ч. [c.207]

Как это было впервые показано при колоночной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе [36], олигонуклеотиды можно разделить по величине их отрицательного заряда, добавляя в растворитель 7—8 М мочевину. Анало-гачным образом олигонуклеотиды были разделены на слоях ПЭИ-целлюлозы при pH 7,9 в присутствии 7—2 М мочевины. [c.47]

Все выше упомянутые фракции казеина можно получить и исследовать с помощью хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе с буферными растворами, содержащими мочевину [36—38]. Кроме того, было доказано, что наиболее ценным методом для разделения компонентов казеина является электрофорез на крахмальном геле с мочевиной [36, 39, 40] этот метод применим также для оценки гомогенности компонентов [35]. [c.42]

Недавно был описан практический метод определения подтипов гаптоглобинов [976]. С помощью хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе из плазмы выделяют белковую фракцию, обогащенную гаптоглобинами. Остальные белки, присутствующие в этой фр-акции, не мещают определению подтипа гаптоглобина. Белки восстанавливают дитиотреитолом (0,5 мг/мл) в 8 М мочевине. К смеси добавляют инсулин (в качестве белка-маркера с известной подвижностью) и основной фуксин и проводят электрофорез в вертикальных трубках или пластинах геля (7=10%), содержащего одну из буферных систем Девиса [281] и мочевину. Электрофорез продолжают до тех пор, пока основной фуксин не окажется на расстоянии 10 мм от нижнего края геля. Белки окрашивают амидовым черным и определяют подтипы гаптоглобинов путем сравнения полученной картины с электрофореграмм ми белков-свидетелей. [c.344]

Фракцию а-казеина, которая была получена в виде нерастворимой кальциевой соли, Вог [43, 44] назвал g-казеином, Макмикин и сотр. [45] — ai-казеином и Лонг и сотр. [46]—аг-казеином. а-Казеин содержит два основных компонента с оптической плотностью, равной 45% оптической плотности казеина, полученного после первого этапа его обработки с использованием хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе в присутствии 4,5 М мочевины. Эти компоненты взаимодействуют с >с-казеином (см. ниже) в соответствующих весовых соотношениях, образуя комплексы в отсутствие двувалентных катионов, или мицеллы, способные образовывать комки с реннином в присутствии двувалентных катионов. С помощью электрофореза на крахмальном геле было показано, что обе главные фракции гетерогенны [47]. Первая элюированная фракция названа agi, 2-казеином она является смесью si- и ад2-казеинов, причем asi-казеин обладает большей подвижностью при pH 8,4 вторая фракция была названа ад-казеином. [c.42]

Олигонуклеотиды несут большой отрицательный заряд, поэтому они с успехом могут быть разделены на слабых крупнопористых анио-нообменниках. Для этой цели используют колонки, заполненные ДЭАЭ-сефадексом, ДЭАЭ-целлюлозой, Эктеола-целлюлозой и др. Нуклеотиды элюируются с колонки в градиенте концентрации Na l в порядке увеличения их молекулярной массы. Для подавления неспецифической сорбции нуклеотидов на полисахаридных матрицах хроматографию проводят в присутствии 7 М мочевины. [c.177]

Хроматография гаироко применяется для разделения и очистки полинуклеотидов. Методы, разработанные для определения РНК и ДНК, будут рассмотрены в следующих главах подробное описание этих методов можно найти в соответствующих обзорах [32, 33]. При разработке методов хроматографирования были испытаны колонки из фосфата кальция [34—36], метилированного альбумина [37, 38], полиметакрилата магния (амберлит ШС-50) [39, 53] и като-2 (катионный крахмал) [54] наилучшие результаты были получены при использовании замещенных производных целлюлозы, например эктеола-целлюлозы (целлюлоза, обработанная апихлоргидрином и триэтаноламином) [19, 23, 31, 40—42] или ДЭАЭ-целлюлозы (диэтиламиноэтилцеллюлоза) [43, 44]. При использовании таких колонок наиболее эффективное разделение олигонуклеотидов, содержащих от двух до семи нуклеотидов, достигается путем градиентной элюции мочевиной. С успехом применяются также колонки с сефадексом, обладающим свойством молекулярного сита [45]. Для очистки информационной РНК употребляют колонки из ДНК [46, 47, 48, 49] (стр. 234). [c.34]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология