РНК-полимераза I и II кишечной палочки

Экзонуклеаза III —ДНК-специфическая фосфатаза. В небольших количествах обнаружена в клетках кишечной палочки и, как правило, ассоциирована с ДНК-полимеразой. Действие этого фермента весьма напоминает действие экзонуклеазы II, но экзонуклеаза III к тому же характеризуется высокоспецифичной фосфатазнойак- [c.88]

Сколько типов ДНК-полимераз содержится в клетке кишечной палочки [c.143]

Сигма-фактор — см. РНК-полимераза кишечной палочки. [c.81]

Наиболее изучены РНК-полимеразы прокариот, в частности кишечной палочки. РНК-полимераза кишечной палочки, представленная белком с М=487 ООО, состоит из пяти субъединиц двух а, одной р, одной р и одной ст. Форма субъединиц, их молекулярные массы и вероятный вариант компоновки показаны на рис. 46. [c.257]

Из кишечной палочки был выделен белок-репрессор, который очень прочно связывается с ДНК у самого начала определенного гена, между промотором и инициирующим кодоном, и не дает РНК-полимеразе считывать этот ген. Так реализовалось одно возможное объяснение. [c.50]

ДНК-полимераза III — фермент, обнаруженный в экстрактах из кишечной палочки. Этот фермент более термолабилен, чем ДНК-полимераза II, и легче ингибируется солями. Известны двойные мутанты кишечной палочки, биосинтез ДНК в которых весьма чувствителен к температуре. Эти мутанты не обладают активностью ДНК-полимеразы I, но имеют нормальную активность ДНК-полимеразы II и температурочувствительную активность ДНК-полимеразы III, что служит доказательством участия ДНК-полимеразы III в процессе репликации ДНК. [c.52]

Корнбергу с сотрудниками в 1967 г. удалось получить вирус полусинтетическим методом. Это был фаг фи X 174, созданный с помощью ДНК-полимеразы фермента, который ответствен за синтез новой ДНК-цепи при редупликации ДНК. Они извлекли 600 мг этого фермента из 90 кг бактерий кишечной палочки. [c.171]

Впервые ДНК-полимераза была выделена из кишечной палочки А. Корнбергом и сотр. (1958). Поскольку в последующие годы из этой же бактерии были вьщелены еще две полимеразы, она получила название полимеразы I. [c.249]

ДНК-связывающий белок активирует ДНК-полимеразы II и III. Сейчас он выделен и из клеток эукариот. В противоположность ДНК-связывающему белку существует и выделен белок, биосинтез которого у кишечной палочки кодируется геном № 5 фаговой хромосомы. Этот белок полностью блокирует матричную активность ДНК, т. е. является антагонистом ДНК-связывающего белка. [c.251]

РНК-полимераза кишечной палочки — ДНК-зависимая РНК-полимераза, которая подобно РНК-полимеразам других организмов катализирует реакцию биосинтеза РНК на ДНК-матрице из рнбонуклеозидтрифосфатов. [c.80]

РНК-полимераза кишечной палочки в настоящее время получена в высокоочищен-ном виде, многие ее структурные и функциональные особенности изучены. Холофер-мент с мол. массой 500 ООО в определенных условиях диссоциирует на несколько субъединиц. Две из них получили название а-цепей, каждая с мол. массой 39 ООО, одна — Р-цепи (мол. масса 155 ООО), одна — Р -цепи (мол. масса 165 ООО) и одна — о -фактора (мол. масса 95 ООО). Холофермент без а-фактора называется кор -ферментом. а-Фактор инициирует синтез РНК- Холофермент без а-фактора может катализировать синтез РНК на матрице ДНК тогда, когда используется гетерологичная ДНК. Добавление же а-фактора в систему с гомологичной ДНК восстанавливает синтез. С началом синтеза РНК а-фактор высвобождается с транскрипционного комплекса и может быть снова использован для активации кор -фермента. а-Фактор узнает гены, с которых должна транскрибироваться РНК. В отсутствие ст-фактора кор -фермент начинает транскрипцию РНК с произвольных генов ДНК, а при наличии его — со специфической стартовой точки. [c.80]

Главной полимеразой кишечной палочки является ДНК-полимераза III. Это—сложный, термолабильный белок (М = 300 ООО), состоящий из субъединиц сх (140000), р (37000), у (52000), 6 (32000), е (25000) и (10000) полимеразную реакцию осуществляет каталитический кор из oi-, е- и 0-субъединиц, в котором главную роль играет сх-субъединица р-, у- и 6-субъединицы являются регуляторными и усиливают действие каталитического ядра ДНК-полимеразы III. В клетке кишечной палочки всего 20 молекул этого белка. Именно ДНК-полимераза III ответственна у кишечной палочки за процесс репликации ДНК. Она работает в ее клетке в комплексе с белковыми факторами, тоже принимающими участие в репликации ДНК, полностью обеспечивая главную ступень ее биосинтеза—элонгацию (продолжение) сборки дезоксиполирибонуклеотидной цепи. [c.250]

Потом наступила очередь второго. Когда кишечная палочка заражается бактериофагом Т7, то сначала часть генов фаговой ДНК считывается хозяйской РНК-полимеразой. Но потом появляется совсем другая, фаговая РНК-полимераза, которая начинает считывать остальные, так называемые поздние , гены фаговой ДНК. Так в зараженной клетке происходит процесс перехода власти от законного хозяина, ДНК Е. oli, к вторгшемуся паразиту — фаговой ДНК. Заметим, между прочим, что факт переключения синтеза молекул РНК с ранних на поздние при фаговой инфекции был открыт нашим соотечественником Р. Б. Хесиным и его сотрудниками на рубеже 50-х и 60-х годов. [c.51]

ДНК-зависимая ДНК-полимераза (К. Ф. 2. 7. 7. 7.) — ДНК-нуклеотидилтранс-фераза, или фермент Корнберга (ДНК-полимераза 1), осуществляющий полимеризацию дезоксирибонуклеозидтрифосфатов на ДНК-матрице в присутствий ионов Выделенный из кишечной палочки после тщательной очистки фермент представляет собой препарат, гомогенный по критериям седиментации, хроматографии и электрофореза в крахмальном геле. Наряду с полимеразной активностью фермент обладает также экзонуклеазной активностью. [c.50]

ДНК-полимераза II — ассоциированный с клеточной мембраной кишечной палочки фермент, синтезирующий из дезоксирибонуклеозидтрифосфатов ДНК в направлении 5 - 3. Он максимально активен при наличии всех четырех трифосфатов, [c.52]

Терминацня транскрипции выражается в том, что РНК-полимераза узнает сигнал окончания синтеза РНК, в результате чего синтезированный полирибонуклеотид отделяется от ДНК-матрицы. Из экстрактов кишечной палочки выделен белковый фактор с мол. массой 200 ООО, с помощью которого РНК-полимераза узнает сигналы терминации. Этот белок был назван р-фактором. При отсутствии этого белка в бесклеточной системе на ДНК-матрице РНК-полимераза синтезирует гетерогенные РНК (от 5S до 35S), тогда как при добавлении р-фактора половину синтезирующей ся РНК составляют 12S- и 7S-PHK. Аналогичный механизм имеет место и при транскрипции соответствующих генов in vivo. [c.83]

Эююнукдеазы II и VI — экзонуклеазы, связанные с ДНК-полимеразой I кишечной палочки. Они осуществляют экзогенное расщепление ДНК соответственно в направлениях 3 -> 5 я 5 -> 3. Расщепление в направлении 3 -> 5, по-видимому, присуще той же молекуле белка, которая обладает и ДНК-полимеразной активностью. Расщеп-левие ДНК в этом случае начинается с З -гидроксильного конца цепи с образованием 5 -монофосфатов. В отличие от экзонуклеазы I этот фермент может осуществлять гидролиз я динуклеотидов, кроме того, он может гидролизовать ДНК не только с З -конца, но и с 5 -конца, в результате чего образуются 5 -мононуклеотиды. Лучшим субстратом для j j фермента являются денатурированные ДНК, но он не действует на олигонуклеотиды с 3 -фосфатным нуклеотидом на конце и на РНК. [c.89]

Л. Н. Ананьева и Ю. В. Козлов в нашей лаборатории поставили задачей выяснить, обладают ли ингибирующим действием все гистоны или только некоторые из них. Для этого из хроматина клеток асцитного рака Эрлиха мышей удаляли гистоны экстракцией растворайи Na l с постепенно повышающейся концентрацией. Полученные препараты служили матрицей для синтеза РНК. Транскрипцию вели в присутствии РНК-полимеразы из кишечной палочки, [c.143]

Она была впервые предложена А. Корнбергом (1958) на основании опытов, проведенных с ДНК-полимеразой, вьщеленной из кишечной палочки. В том же году С. Шпигельман тоже из кишечной палочки получил РНК-полимеразу (см. рис. 46). Позже она была изолирована из тканей млекопитающих и других животных. РНК-полимераза in vitro обеспечивает синтез РНК по аналогичной схеме [c.246]

В клетке кишечной палочки содержится около 400 молекул ДНК-полимеразы I—белка (М = 109 ООО), содержащего один атом Zn и представленного одной полипептидной цепью. ДНК-полимераза I хорошо связывается с одноцепочечной ДНК или с зонами разрыва фосфодиэфирных связей в биспиральной ДНК. Она обладает ясно выраженной ДНК-полимеразной активностью, т. е. способна ускорять реакцию переноса дезоксирибонуклеотидильных остатков с дезоксирибонуклеозид-5 -трифосфатов на растущий конец полидезоксирибонуклеотида—3 -гидроксильную группу дезоксирибозы его концевого нуклеозида. [c.249]

Кроме того, ей присуща экзодезоксирибонуклеазная активность в отношении одноцепочечной ДНК в направлении 3 - 5, т. е. тоже со стороны концевого дезоксирибонуклеозида, а также в направлении 5 - 3 со стороны начального дезоксирибонуклеотида молекулы. В 1-м случае достигается удаление с наращиваемого в процессе синтеза ДНК З -конца молекулы неправильно (ошибочно) присоединенных нуклеотидных остатков, во 2-м—разрушение праймера, необходимого для синтеза фрагментов Оказаки (см. ниже). Последнее очень важно. Так, у мутантов кишечной палочки, утративших эту функцию ДНК-полимеразы I, накапливаются фрагменты Оказаки и биосинтез ДНК приостанавливается. Сейчас полагают, что ДНК-полимераза I имеет большее отношение к созреванию реплицирующейся ДНК, нежели непосредственно к полимеразным процессам в репликационной вилке. Последняя функция более присуща ДНК-полимеразе III. [c.250]

ДНК-полимераза II присутствует в клетке кишечной палочки в количестве около 40 молекул (М=900Р0). Она представлена одной полипептидной цепью. ДНК-полимераза II плохо соединяется с одноцепочечными ДНК, но отлично оккупирует точки разрыва в одной из цепей биспиральной ДНК. Обладает лишь 10%-ной ДНК-полимеразной активностью по сравнению с ДНК-поли-меразой I. [c.250]

Кроме ДНК-полимераз, обладающих у прокариот к тому же нуклеазной активностью, в биосинтезе ДНК принимает участие ДНК-лигаза. Она открыта в 1967 г. одновременно в пяти лабораториях. Это белок с М = 96000. В клетке кишечной палочки, например, насчитывается около 2000 молекул ДНК-лига-зы. Ее функция состоит в обеспечении каталитического ускорения реакции образования фосфодиэфирной связи между 3 - и 5 -концами цепей ДНК, сближенных на расстояние одного нуклеотидного звена и закрепленных на комплементарной им, но непрерывной другой цепи ДНК. Такая ситуация возникает во многих случаях при устранении разрывов в одной из цепей ДНК, вызванных облучением, действием нуклеаз и т.п. при соединении новообразованного при репарации или в процессе нормальной репликации фрагмента с предшествующими или вновь созданными при этом фрагментами ДНК при ковалентном замыкании линейной молекулы ДНК в кольцевую структуру и т. п. Механизм ДНК-лигазной реакции представлен на рис. 84. ДНК-лигаза нашла применение в работах по синтезу генов и их фрагментов. [c.251]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология