Генные зонды

Гибридизация с генным зондом [c.258]

Далее используют генный зонд (разд. 25.1.6). Это короткий одноцепочечный фрагмент ДНК, последовательность оснований которого комплементарна участку интересующего нас гена. Зонд можно получить в больщих количествах путем клонирования. В него вводят радиоактивную метку з Р, а затем добавляют его в раствор для гибридизации (комплементарного связывания) с ДНК на нитроцеллюлозном или нейлоновом фильтре. [c.259]

Кроссоверы крайне маловероятны, т. к. маркеры ДНК, обнаруживаемые специфичными для гена зондами, тесно сцеплены и чрезвычайно близко расположены к участку мутации внутри или в окрестностях мутантного гена. [c.145]

Сцеплена с Х-хромосомой варьирующая экспрессивность у женщин. Биопсия печени плода Обнаруживаются только гомозиготы выявление гетерозигот возможно с помощью генного зонда Обнаруживается только тяжелая форма детского возраста Увеличение активности многих лизосомальных ферментов [c.155]

Генетические болезни человека являются важной проблемой международного здравоохранения. Например, по оценкам Всемирной организации здравоохранения в мире более 200 миллионов носителей гемоглобинопатий и ежегодно появляется от 200 до 300 тысяч серьезно больных гомозигот или сложных гетерозигот. В кавказских популяциях каждый двадцатый является носителем муковисцидоза-рецессивного повреждения экзокринных желез, приводящего к смерти пораженных этой болезнью в возрасте около 20 лет. При некоторых генетических болезнях, для которых охарактеризованы дефектные белки (например, Р-глобин при Р-талассемии), можно проводить биохимические тесты на отсутствие генных продуктов в пробах эмбриональной крови. Этот подход, однако, не является общим, поскольку генетическая болезнь не всегда приводит к изменениям белков в эмбриональной крови. В этих случаях особую ценность представляют специфические генные зонды, которые можно использовать независимо от типа исследуемых клеток. [c.66]

Каким же образом проводится генетический скрининг Наиболее важными являются четыре метода биопсия ворсинок хориона, амниоцен-тез, диагностика эмбриона перед имплантацией и анализ ДНК с помощью генных зондов. [c.257]

Цель данного этапа — выявить в каком из фрагментов находится интересующая нас последовательность ДНК. Это делают с помошью генного зонда. Поскольку зонд плохо продвигается в геле, используют метод, называемый Саузерн-блоттингом (Эдвард Саузерн разработал этот метод в 1975 г.). Последовательность операции представлена на рис. 25.32 (см. также раздел о генетической дактилоскопии, 25.7.12). [c.259]

ДНК-маркеры [560 953]. Интенсивные исследования по молекулярной генетике апо-липопротеинов и ферментов, вовлеченных в метаболизм липидов, привели к созданию ДНК-зондов для многих из этих генов. Зонды используются с разными целями. Сцепленный с локусом LDL-рецептора полиморфизм по длине рестрикционных фрагментов [719] оказывается полезным для доклинической диагностики в тех семьях, в которых данные о повышении холестерина остаются не совсем ясными для интерпретации, но имеется по крайней мере один надежно диагностированный больной. Таким способом можно продемонстрировать и изоаллельную изменчивость LDL-рецептора (см. выше). Прямые диагностические зонды для дефектных генов LDL-рецепторов пока еще отсутствуют, и их создание представляет собой проблему (4.6.4). [c.304]

Для идентификации бактерий иногда используют также метод ДНК-зондов (генных зондов), являющийся разновидностью метода молекулярной гибридизации ДНК—ДНК. Реакция гибридизации ведется в этом случае не между двумя препаратами тотальной ДНК, а между фрагментом нуклеотидной последовательности ДНК (зондом), включающим ген (генетический маркер), ответственный за какую-то определенную функцию (например, устойчивость к какому-нибудь антибиотику), и ДНК изучаемой бактерии. Самым распространенным способом создания генных зондов является выделение специфических фрагментов путем молекулярного клонирования. Для этого вначале создают банк генов изучаемой бактерии расщеплением ее ДНК эндонуклеазами рестрикции, а затем отбирают нужный клон из суммы фрагментов ДНК методом электрофореза с последующей проверкой генетических свойств этих фрагментов методом трансформации. Далее выбранный фрагмент ДНК с помощью фермента лигазы вводят в состав подходящей плазмиды (вектора), а эту комбинированную-плазмиду вводят в удобный для работы штамм бактерий (например, Es heri hia соН). Из биомассы бактерии, несущей ДНК-зонд, выделяют плазмидную ДНК и метят ее, например, радиоизотопной меткой. Затем осуществляют гибридизацию ДНК зонда с ДНК бактерии. Образовавшиеся гибридные участки проявляют методом ауторадиографии. По относительной частоте гибридизации генетического маркера с хромосомой той или иной бактерии делают заключение о генетическом родстве этих бактерий с исследуемым штаммом. [c.197]

Прямое определение. Если генетическая болезнь является результатом делении ДНК, то для прямого выявления болезни можно использовать геномные ДНК-зонды или кДНК-зонды. При утрате значительного участка хромосомы, комплементарного соответствующему ДНК-зонду, последний не способен гибридизоваться на блотинговой пленке с ДНК, взятой у больного человека. Например, а-талассемия является результатом отсутствия в ДНК обоих а-глобиновых генов. В этом случае гомозиготность можно диагностировать по отсутствию любого фрагмента а-глобино-вого гена, гибридизующегося с а-генным зондом. Строго говоря, выявление гетерозигот с такими генными делециями не является прямым, поскольку зонд будет гибридизоваться с фрагментами ДНК нормальной хромосомы, дающими идентичное расположение полос на пленке Саузерна. Различие состоит в том, что интенсивность полос на авторадиограмме вдвое меньше, чем у нормальной ДНК (если, конечно, количество нормальной и гетерозиготной ДНК одинаковы), однако определить различия в дозах на блотинговых пленках Саузерна технически довольно сложно. При генетических нарушениях, локализованных в Х-хромосоме, по отсутствию гибридизации специфического зонда можно выявлять лица мужского пола с дефектным в результате делеции геном [20]. Но и в этом случае выявить носителей болезни женского пола можно лишь регистрируя обуславливаемый гибридизацией сигнал, составляющий по величине половину сигнала равного количества нормальной ДНК. [c.70]

Для небольших делеций гена или в случае, когда последовательность ДНК-зонда охватывает начало или конец делеции, генетическое нарушение можно установить путем идентификации характерных аномальных фрагментов ДНК на блотинговой пленке Саузерна. У носителя генетического нарушения будут наблюдаться как нормальные, так и аномальные полосы, а у больного человека-только аномальные. Таким способом можно выявить а-талассемию, используя а-глобиновый генный зонд, гибридизующийся в ДНК на участке, соседнем с началом делеции. Небольшие делеции, включающие всего несколько сотен пар оснований, можно детектировать по наличию аномальной полосы, которая располагается ниже полосы нормального рестрикционного фрагмента. Этим способом можно выявлять один из типов (3°-талассемии, обнаруженный только у индейцев (рис. 5.1.). [c.70]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология