Концентрации распределение в кювете ультрацентрифуги, оптические

Оптические методы, применяемые для измерения распределения концентрации в кювете ультрацентрифуги, детально описаны Сведбергом и Педерсеном [1], а также в гл. IX (Диффузия) тома I настоящей книги. [c.484]

Взаимодействующие системы- могут быть исследованы количественно также с помощью аналитической ультрацентрифуги, если за связыванием лиганда можно проследить с помощью абсорбционной оптической системы [105, 107]. На рис. 9 представлены седиментационные диаграммы серии опытов с различными смесями НАД-Н (ДПМ-Н) лактатдегидрогеназы. Диаграмма, относящаяся к раствору НАД-Н (слева), показывает, что весь материал, поглощающий свет при длине волны 340 нм, мигрирует медленно, тогда как после добавления фермента часть или весь кофермент, в зависимости от концентрации фермента, седиментирует с тем же коэффициентом седиментации, что и нативный фермент. Из распределения поглощения света в кювете ультрацентрифуги в процессе седиментации можно рассчитать концентрацию связанного и свободного кофермента на основе этих данных рассчитывается среднее число связанных с ферментом молекул кофермента и по уравнению (3)—число связывающих, участков и константы диссоциации. [c.409]

Оптическая система ультрацентрифуги позволяет фиксировать распределения концентраций в кювете в процессе опыта. Эти рас- [c.206]

Имеется несколько приемов, позволяющих получить резкую начальную границу для измерения диффузии. Мы не будем касаться экспериментальных деталей. Отметим только, что точность измерений зависит от остроты начального распределения концентраций, а также от полного исключения конвекционных возмущений в кювете. Для достижения последнего условия прибор термостатируют с точностью до 1 10 —3 10 градуса. Далее оптическим путем (с помощью рефрактометрии или интерферометрии) определяют изменение концентрации с координатой х внутри кюветы. Практически, так же как и в оптических системах ультрацентрифуги, регистрируемой величиной является гра- [c.126]

Ультрацентрифуга состоит из металлического ротора диаметром несколько сантиметров, который вращается в вакууме при постоянной температуре. Ротор приводится в движение через электрический привод или каким-либо другим способом с заранее определенной постоянной скоростью вращения в диапазоне 1000—70 ООО об/мин. Небольшая цилиндрическая кювета, содержащая исследуемый раствор, помещается в ротор ближе к его внешней части. Устанавливающиеся в кювете градиенты концентрации определяют оптическим способом с помощью луча света, проходящего в направлении, параллельном оси вращения, и при каждом обороте ротора пересекаемого кюветой с раствором. Преломление или поглощение света, проходящего через различные участки кюветы, регистрируется соответствующей оптической системой. Последняя регистрирует концентрацию или изменение концентрации вдоль направления седиментации внутри кюветы. Развитие процесса осаждения молекул растворенного вещества можно проследить, фотографируя последовательные картины распределения по концентрации через определенные увеличивающиеся промежутки времени от начала седиментации. [c.220]

Основной частью ультрацентрифуги является ротор, способный вращаться с очень большой скоростью в термостатируемой вакуумной камере. В роторе имеются две ячейки для кюветы с раствором и для противовеса. Возникающий в кювете градиент распределения концентрации макромолекул за счет центробежных сил обусловливает соответствующее распределение величины показателя преломления, которое регистрируется оптическим методом. Коэффициент седиментации 5 определяют по градиенту концентрации [c.156]

С. помощью ультрацентрифуги можно определить мол. вес частиц методом, который освобождает нас от необходимости измерять диффузию и скорость седиментации. Этот метод называют методом седиментационного равновесия. Раствор белка центрифугируют со скоростью, которая точно уравновешивает стремление молекул белка к диффузии. Обычно такая скорость сравнительно невелика. При использовании коротких кювет и техники кратковременных ускорений можно достичь равновесия Е течение нескольких часов. Распределение концентраций регистрируется оптическими методами. Совершенствование метода седиментационного равновесия привело к тому, что метод опре- [c.414]

Использованная Т. Сведбергом центрифуга имела дископодобный ротор, в котором было сделано несколько вырезов. В этих вырезах закреплялись кюветы с коллоидными растворами. Кожух центрифуги имел вырезы для освещения коллоидных растворов, их наблюдения и фотографирования. Хотя кювета, заполненная коллоидным раствором, вращается с чрезвычайно большой скоростью, она при наблюдении и фотографировании кажется неподвижной. Этот оптический эффект известен каждому. Если на киноэкране демонстрируется какой-либо неподвижный объект, то это не означает, что кинолента перестает двигаться в аппарате. Она движется, но одинаковые кадры сменяются менее чем за 0,1 с. При такой скорости наш глаз не улавливает смены кадров, и кадр кажется наблюдателю неподвижным. В ультрацентрифуге смена кадров происходит значительно быстрее, и нашему глазу кюветы с коллоидным раствором кажутся неподвижными. При вращении ротора центрифуги коллоидные частицы отбрасываются центробежной силой к периферии (т. е. к дну кюветы). При установлении седиментационного равновесия можно экспериментально определить распределение концентрации по высоте кюветы и вычислить радиус по уравнению (XIII.2.2). [c.404]

Существенно, что распределение растворенного вещества в кювете должно регистрироваться в ультрацентрифуге в момент ее вращения на большой скорости. В первоначальных экспериментах Сведберга [446 —448] это достигалось измерением поглощения света растворенным веществом. С этой целью раствор фотографировали в свете с определенной длиной волны, и концентрация в различных участках кюветы рассчитывалась по относительному почернению фотографической пластинки. Этот метод обладает большими преимуществами при работе с некоторыми образцами биологического происхождения (например, белками и нуклеиновыми кислотами), которые имеют широкие полосы поглощения в ультрафиолетовом свете и, следовательно, подходящие значения оптической плотности могут быть получены при очень сильном разбавлении [453]. Как будет показано ниже, при интерпретации данных, полученных при таких концентрациях, когда отклонения от закона Рауля становятся заметными, возникают определенные осложнения, и поэтому чрезвычайно н елательно работать с как можно более разбавленными растворами. [c.158]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология