Аминокислота концевая введение трития

С-концевые аминокислоты пептидов или белков можно определить при помощи химических или ферментативных методов. Химические методы включают гидразинолиз, селективное введение трития, избирательное восстановление, образование альдегидов, алкоголиз оксазолов в кислой среде, тиоцианатное или цианамидное расщепление. При ферментативном определении используют карбоксипептидазы. Этот подход в последние годы [c.487]

РИС. 18.3. Избирательное введение трития в С-концевую аминокислоту [57]. [c.489]

Вейганд [12] обратил внимание на возможное применение подобного асимметрического синтеза для введения трития в а-по-ложение Ы-концевой аминокислоты. Это происходит, когда соответствующая оь-аминокислота реагирует с трифторуксусным ангидридом, в который добавлено некоторое количество меченой тритием воды. В результате обмена протона образуется меченый тритием псевдооксазолон. При реакции с оптически активным метиловым эфиром аминокислоты, например ь-конфигурации, псевдооксазолон дает соответствующее меченое тритием производное дипептида, которое затем может быть разделено с помощью перекристаллизации или препаративной ГЖХ. [c.179]

Среди химических методов определения С-концевих аминокислот к простейшим относится селективное введение трития. Это г метод обладает высокой чувствительностью, проводится с использованием легко доступных реагентов, при очень мягких условиях. После введения тритиевой метки избыточные атомы удаляются путем повторения чередующихся операций добавления—упаривания воды. Затем проводят гидролиз 6 М соляной кислотой (метансульфоновой кислотой, если предполагается определение Тгр [78]) далее аминокислоты разделяют обычными методами пептидного картирования и определяют радиоактивность в жидкостном сцинтилляционном счетчике. Первоначально этот метод был качественным [57], однако п настоящее время возможно количественное определе1ше трития. [c.488]

Селективное введение трития включает три последовательные реакции (рис. 18.3). В основе методики лежит различие в химической активности карбоксилов С-концевой аминокислоты и боковых цепей. С-Концевой карбоксил уникален, так как его можно активировать путем образования оксазолинона (внутримолекулярное взаимодействие с соседней по цепи пептидной связью, происходящее с выделением воды) [69]. Эта реакция проходит при участии уксусного ангидрида. Образующийся при этом оксазолинон содержит активный атом водорода, который легко замещается на тритий при обработке Ш2О в присутствии пиридина. Оксазолинон претерпевает катализируемую основанием рацемизацию, сопровождаемую гидролитическим раскрытием кольца и регенерацией С-концевой аминокислоты, содержащей атом трития при сх-углероде. [c.488]

Вторая методика была разработана для селективного введения трития в С-концевые остатки Pro и Asp [60]. В вышеуказанных условиях эти аминокислоты не образуют оксазолиноны, но дают либо смешанный ангидрид (Pro), либо циклический ангидрид (Asp). При обработке пиридином и эти ангидриды не включают метку, но их можно метить дейтериро-ванной уксусной кислотой. Методика включения метки в Pro и Asp при П0М0Ш.И кислотного катализа была упрощена до одностадийной и заключалась в обработке пептида смесью уксусного ангидрида и Ш2О. [c.490]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология