Гуанидинхлорид

Гуанидинхлорид — 4M раствор в 80%-ной уксусной кислоте. [c.145]

Для хроматографического фракционирования смеси молекул, не сильно различающихся по своим массам, следует ориентироваться на линейный участок графика селективности, так чтобы для крайних значений молекулярных масс разделяемой смеси веществ значения оставались в интервале 0,2—0,8. То же самое относится и к определению самих молекулярных масс методом гель-фильт-рации. Впрочем, если это определение ведут в денатурирующем буфере (6 М раствор гуанидинхлорида), то надо учесть, что благодаря рыхлой упаковке денатурированных биополимеров вся область фракционирования смещается в сторону меньших значений молекулярных масс, чем те, которые приведены в таблицах для нативных глобулярных белков. Коррекцию на деформацию (и изменение размеров) белков следует вводить и в случае использования детергентов, применяемых для улучшения растворимости. Детергенты разворачивают белковые глобулы, увеличивая их эффективные размеры, и, кроме того, связываются с белками, что приводит иногда к заметному увеличению массы. [c.134]

Вместо гуанидинхлорида можно использовать азотнокислую соль гуанидина [34, 35] [c.216]

Большинство гелей, в частности агарозных, плохо выдерживает воздействие 6 М раствора гуанидинхлорида. Скорость течения падает, гранулы начинают лопаться, и колонка скоро выходит из строя. К этому надо добавить, что 6 М раствор гуанидинхлорида обладает заметной вязкостью, что заставляет повышать давление, подаваемое па колонку. [c.153]

Выход, % от теоретического (на гуанидинхлорид). .......88,0 [c.227]

Большинство авторов определило молекулярные массы а-глиадинов (табл. 6Б.4) в пределах от 27 000 до 38 000 Да [72, 73]. Этот диапазон может отражать определенную изменчивость молекулярной массы поскольку при использовании этого же метода в отношении нескольких а-глиадинов установлены [116, 114] разные молекулярные массы для каждого из них. Завышенные величины молекулярных масс для аг и аг-глиадинов, полученные гель-фильтрацией [147], объясняются тем, что исследования проводились в 0,1 М уксусной кислоте без предварительного восстановления дисульфидных связей и в отсутствие денатурирующего агента (мочевины или гуанидинхлорида), а также тем, что в этих условиях а-глиадины находятся не в форме статистического клубка. Ввиду этого результаты оказываются искаженными за счет конформации, которую принимают в этой среде а-глиадины и стандарты белков. Все а-глиадины образованы одной полипептидной цепью. [c.188]

На рис. 61 представлены графики селективности сефакрилов для двух вариантов фракционирования белков нативных (глобулярных) и денатурированных, имеющих форму статистических клубков (в 6 М растворе гуанидинхлорида). Как и в случае сефадексов, линейные участки графиков лежат в более узком интервале молекулярных масс, чем вся область фракционирования. Кроме того, весьма существенно отличаются друг от друга графики для нативных и денатурированных белков. Например, легко видеть, что нативный белок с М = 100 ОООна сефакриле S-400 должен иметь K v = 0,75, а в денатурированном виде на том же S-400 он будет двигаться в соответствии с Kav = 0,42, т. е. значительно быстрее. Этого и следовало ожидать из-за различия в плотности упаковки нативных и денатурированных белков. [c.118]

Жесткость сефакрилов, в том числе и наиболее крупнопористых, позволяет использовать их в водных буферах со скоростями элюции порядка 40 мл/см -ч и не слишком сильно снижать пх при работе с вязкими элюептами. Так, сефакрил S-400 не сжимается прп элюции колонки 6 М раствором гуанидинхлорида со скоростью 20 мл/см -ч, а сефакрил S-1000 позволяет с такой же скоростью вести элюцию чистым формамидом. Разумеется, столь высокие скорости [c.118]

Никаких неприятностей не происходит, если воспользоваться сшитой агарозой. По данным Ансари и Мэйг, колонка с сефарозой L-6B выдерживала воздействие 6 М гуанидинхлорида без видимых изменений своих характеристик в течение 10 мес. Жесткость матрицы позволила им увеличить скорость элюции до 6,8 мл/см -ч. Авторы использовали колонку размером 1,5 х 90 см, а элюцию вели 6 М раствором гуанидинхлорида в 0,1 М Na-фосфатном буфере. pH 7. Для семи белков с молекулярными массами от 2900 до 69 ООО был получен совершенно линейный калибровочный график [Ansari, IVIage, 19771. [c.153]

Белев и соавторы для определения молекулярных масс денатурированных белков методом гель-фильтрацип использовали сефакрил S-200 Superfine . Колонку размером 1,6 х ЮО см калибровали четырьмя полипептидами с известным числом аминокислотных остатков N) — от 71 (токсин) до 579 (БСА). Элюцию вели 6 М водным раствором гуанидинхлорида (pH 5) со скоростью 3 мл/см -ч. Для точности объем элюента определяли по весу. График селектив- [c.153]

Техника подготовки колонки и препаратов для гель-фильтрации в 6 М растворе гуанидинхлорида описана довольно подробно [Mann, Fish, 1972]. 6 M раствор гуанидинхлорида ( 50%) должен быть прозрачным. Оптическая плотность его резко увеличивается только вблизи длпны волны 225 им. Перед исиользованием раствор следует отфильтровать сперва через средний, а затем — через мелкий стеклянный фильтр и деаэрировать. [c.154]

В том же году Уи провел фракционирование набора из 16 денатурированных белков на колонке TSK-GEL 3000 SW (фирмы Тоуо Soda ) размером 0,75 X 60 см. В качестве элюеита был использован, как обычно, 6 М раствор гуанидинхлорида в 0,01 М фосфатном буфере, pH 6,5. Скорость элюции была снижена до 66 мл/см -ч, и фракционирование длилось 50 мин. Как видно пз рис. 79, точки калибровочного графика хорошо ложатся на прямую [c.155]

Сухой образец белка растворяют в минимальном объеме 4 М раствора гуанидинхлорида в 80%-ной уксусной кислоте (концентрация белка 1 — 10 мг/мл). К раствору белка добавляют о-йодозобензойную кислоту, предварительно растворенную в минимальном объеме того же раствора. Содержимое пробы преинкубируют с га-крезолом в течение [c.145]

Пример 16. Фракционирование гистонов Н1 и Н1° из культуры клеток яичников китайского хомячка [D Anna et al., 1981]. Эти гистоны экстрагировали из ядер 0,83 М H IO4. 9,.3 мг белка экстракта растворяли в 0,6 мл 8%-ного раствора гуанидинхлорида (ГХ) в 0,1 М фосфатном буфере (pH 6,8) с 0,5 мМ ФМСФ и вносили на колонку Bio-Rex 70 (1,5 X 22 см), уравновешенную тем же раствором. Элюцию вели линейным градиентом (8—14%) концентрации ГХ. Результат фракционирования представлен на рис. 121. [c.310]

Еслп стопт задача посадки на матрицу не очень хорошо растворимых в воде лигандов, то описанную реакцию можно проводить в 50%-ном растворе этиленгликоля или диметилформамида. Во избежание последующей конкуренции за вещество очень важно осуществить надежную отмывку всего не связавшегося с матрицей лиганда. Если возможно, то для этой цели вводят промывку 6 М раствором гуанидинхлорида. [c.378]

Этими факторами служат, как обычно, повышенная концентрация соли, наличие гуанидинхлорида и мочевины, органических раство-рителей и детергентов. В зависимости от доминирующего характера неспецифической сорбции можно отдать предпочтение какому-нибудь одному из них или их комбинации. Разумеется, возможны слу- [c.404]

Насос прогонял белковый раствор через колонки и далее через диализный блок (две пластины плексигласа с каналами, разделенные диализной пленкой). Первоначально ядрышковые белки вносили в систему в 2 IM растворе гуанидинхлорида в буфере (20 мМ MOPS, pH 7,4, + 10 мМ ЭДТА -f- 0,1 мМ ФМСФ) и такой же раствор подавали в каналы нижней пластины диализного блока. 1—2 мг белка, растворенные в 100 мл буфера, циркулировали в этой систе- [c.427]

В реактор 72 с обратным холодильником загружают порошок гуанидинхлорида, абсолютный спирт и алкоголят натрия, взятые соответственно отношению 1 5 3. Реактор охлаждают рассолом. Выделившийся осадок поваренной соли отфильтровывают на нутч-фильтре 75, а фильтрат насосом перекачивают в реактор 74, куда постепенно приливают циануксусноэтило-вый эфир. Реакционную массу подогревают до кипения и кипятят 15 мин при перемешивании, затем ее оставляют на 8 ч при комнатной температуре. [c.224]

В предыдущих опытах исходными веществами служили хлориды амидиния. Теперь следует установить, нельзя ли использовать гуанидинхлорид для стадийного синтеза солей дифосфотри-азиния. [c.111]

Методом гель-фильтрации в 6М гуанидинхлориде после восстановления дисульфидных связей и алкилирования белков [91] для фракции глиадина III (а- и р-глиадины) установлена молекулярная масса 37 000 Да, а для фракции глиадина IV (а-глиа-дин) — молекулярная масса 30 000 Да. В каждой из этих фракций эти же авторы с помощью ДДС-Na-ПААГ выявили по 3 полипептида с молекулярной массой 33 000, 35 000 и 41 000 во фракции глиадина III и 29000, 31 000 и 34 000 во фракции глиадина IV [89]. [c.188]

Все а-, р- и 7-глиадины состоят из единственной полипептидной цепи [64—69, 72, 73, 156]. Цистеины в молекулах а-, Р- и 7-глиадинов связаны внутримолекулярными дисульфидными мостиками. Эти дисульфидные мостики расположены так в полипептидной цепи, что их разрыв приводит к значительной фрагментации цепи [79]. В твердом состоянии после экстракции и лиофилизации глиадины имеют компактную структуру, в образовании которой, вероятно, участвуют гидрофобные остатки [163]. При высокой концентрации в растворе они стремятся к агрегированию, видимо, вследствие образования водородных связей между молекулами [8]. В денатурируюш,ей среде (8М мочевина и 0,1М муравьиная кислота) глиадины имеют рыхлую и асимметричную структуру, на что указывают коэффициенты трения. Восстановление дисульфидных мостиков еш,е сильнее увеличивает асимметрию и степень рыхлости, т. е. пространственного расширения молекулы [140]. Присущая ш-глиадинам вязкость в среде 6М гуанидинхлорида указывает на то, что в этих условиях они находятся в виде статистического клубка из-за отсутствия дисульфидных мостиков. Они обладают такой конформацией в присутствии 2М гуанидинхлорида — концентрации, которая не вызывает денатурации, следовательно, в нативном состоянии в растворе конформация ш-глиадинов — это статистический клубок. Аналогичное исследование а-, р- и 7-глиадинов показывает, что они не имеют жесткой глобулярной конформации, но, наоборот, представляют собой молекулы полужесткой структуры с низкой степенью организации [153]. Основываясь на известных N-концевых последовательностях, Перноле и Мосс [154] предложили модели вторичной структуры. Они представили а-, Р- и 7-глиадины в основном как р-структуру, прерываемую р-из-гибами и непериодическими структурами. Практически отсутствует а-спираль ш-глиадины четко различимы, поскольку наиболее выраженная их структура — это р-изгиб, прерываемый [c.196]

После экстракции белков из муки смесью УМЦ Хюбнер и Уолл [99] фракционировали невосстановленные глютенины гель-фильтрацией на сефарозе 4В и сефарозе 2В в среде 5,5М гуанидинхлорида модифицированным методом Мередита и Рена [135]. Глютенины разделялись в этих условиях на две большие группы, вероятно, весьма существенно различающиеся размерами молекул, поскольку одна из них исключена из обоих типов геля (приблизительная граница исключения носителя сефароза 2В составляет 20 млн.). [c.199]

Данная модель предполагает наличие как дисульфидных мостиков, так и слабых связей в структуре функционального глютенина для обеспечения солюбилизации глютенина в диссоциирующих агентах (мочевина, гуанидинхлорид, смесь УМС) и в мылах, а также для поведения субъединиц при электрофорезе. [c.216]

Кинетические методы в биохимическихисследованиях (1982) -- [ c.95 ]

Биофизическая химия Т.2 (1984) -- [ c.97 ]

Искусственные генетические системы Т.1 (2004) -- [ c.41 , c.120 , c.126 , c.127 , c.388 ]

Сборник Иммуногенез и клеточная дифференцировка (1978) -- [ c.35 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология