Скорость миграции белка

Метод зонального электрофореза имеет и некоторые недостатки. С его помощью нельзя произвести прямого определения скорости миграции белков. Между исследуемыми белками и поддерживающей средой возможны нежелательные взаимодействия, в результате которых часть белка адсорбируется в среде. Адсорбция происходит сильнее всего на бумаге, менее выражена на ацетат-целлю-лозной мембране и практически ничтожна в агаровом геле. [c.12]

Электрофорез в первом направлении проводят обычным способом, а затем полученную электрофореграмму используют без фиксации и окрашивания в качестве стартовой зоны для электрофореза во втором направлении, перпендикулярном первому. Если оба этапа электрофореза осуществляют в идентичных условиях, то скорость миграции белков в обоих направлениях одинакова и зоны разделенных молекул располагаются по диагонали. Очевидно, что такие системы улучшают разделение лишь постольку, поскольку оно зависит от удлинения пути миграции разделяемых белков. Чтобы повысить разрешение в значительной степени, необходимо на втором этапе изменить по крайней мере один из электрофоретических параметров. В настоящей главе приводится краткое описание некоторых методов двухмерного электрофореза. Несколько дополнительных вариантов обсуждаются в главах, посвященных разделению определенных классов белков, в частности белков жидкостей тела, рибосомных и мембранных белков. [c.227]

Для эффективного разделения белков при электрофорезе в ПААГ соотношение 7 о должно составлять 0,1—0,2. Отсюда следует, что оптимальная электрофоретическая подвижность белков в ПААГ лежит в пределах 0,01—0,1 см/ч на 1 В/см. При напряженности поля 10—20 В/см этому соответствуют скорости миграции белков в диапазоне 0,1—2 см/ч. Таким образом, при рабочей длине геля 10 см за 5 ч электрофореза наиболее быстрые белки могут достигнуть конца геля, в то время как наименее подвижные продвинутся лишь на 0,5 см. Цифры эти — сугубо приближенные и приведены здесь лишь для общей ориентировки. В конкретных случаях возможны существенные отклонения от них. Например, если заранее известно, что разделяемые белки сильно различаются между собой по заряду или размерам, то можно вести электрофорез в условиях более высоких подвижностей и ), т. е. в более крупнопористых гелях, и тем сократить время фракционирования в 2—3 раза. [c.15]

А. При скорости роста 40 мкм/ч за 9 сут будет покрыто расстояние в 9 мм (40 мкм/ч X 24 ч X 9 сут), что находится в пределах значений, полученных при измерении скорости перемещения белков по аксону (и примерно соответствует скорости миграции белков нейрофиламентов, см. рис. 11-24). [c.451]

Помимо наличия ts-свойства, биохимические опыты с еа-виру-сом А/Апп Arbor/6/60 выявили, что каждый сегмент содержит мутации относительно вируса дикого типа [44]. Однако фенотипический анализ са-вируса в процессе заражения клеток MD K или клеток фибробласта куриного эмбриона при 39 °С показал отсутствие дефекта по сравнению с вирусом дикого типа, за исключением более медленной скорости миграции белка Р2 [44]. Было решено, что са-мутации действуют на поздние реиликационные функции [119]. [c.234]

Пористость, длина и выбор буфера для нижнего (рабочего) геля определяются точно такими же соображениями, что и для простого непрерывного электрофореза. Единственное, что здесь своеобразно — это обязательное использование в составе рабочего буфера быстроподвижных ионов, мигрирующих в том же направлении, что и белки, например иона С1 для щелочных буферов или иона К" — Для кислых. Выше отмечалось, что использование таких ионов невыгодно, так как приводит к ограничению напряженности поля и скорости миграции белков. Однако в данном случае использование быстрых ионов диктуется самим существом метода, как это будет ясно из дальнейшего изложения. Заметим, кстати, что если концентрация этих ионов и зависит от pH буфера, то их электрофоретическая подвижность от pH совершенно не зависит. [c.66]

Данзилирование белков и пептидов позволяет следить за ходом их миграции при электрофорезе путем освещения гелей длинноволновым ультрафиолетовым светом, достаточно хо рошо проникающим через пирексовое стекло. Скорость миграции белков при данзилировании практически не изменяется, поэтому небольшие примеси данзилированных препаратов можно использовать в качестве маркеров при разделении неокрашенных белковых смесей. [c.98]

Б. Если судить по трем критериям (защищенность от действия протеазы, наличие связанных сахаров и отщепляемого сигнального пептида), этот белок переносится через микросомную мембрану. 1) Белок полностью чувствителен к протеазе в присутствии детергента (рис. 8-10, дорожка 7), но только частично чувствителен к протеазе в отсутствие детергента (рис. 8-10, дорожка 6). Таким образом, белок частично защищен от протеазы в присутствии микросом. 2) Скорость миграции белка возрастает после обработки его эндогликозидазой Н (рис. 8-10, ф. дорожки [c.373]

Электрофорез в полиакриламидном геле (ПААТ) в денатурирующих условиях — еще один метод фракционирования белков по различиям молекулярной массы. Скорость миграции белка в электрическом поле зависит не только от его суммарного заряда, но также и от величины и формы белковой молекулы. Для электрофореза в ПААТ в денатурирующих условиях в анализируемую смесь белков добавляют додецилсульфат натрия (ДДС-Ка, С Н ОЗОзКа), который представляет собой детергент с выраженными амфифильными свойствами. При этом олигомерные белки распадаются на протомеры, протомеры денатурируются и денатурированные пептидные цепи образуют мицеллы с ДДС-Ка, содержащие примерно вдвое больше белка, чем ДДС-Ка. Эти мицеллы имеют отрицательный заряд, обусловленный почти полностью ионами ДДС з)- Суммарный заряд [c.56]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология