Электрофорез применение мочевины

Фракционирование рибосомных белков очень часто проводят также и методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН. Первое успешное применение этого метода описано Уорнером [1375]. Рибосомы, белки которых были помечены радиоактивными изотопами, растворяли в 0,1 М фосфатном буфере, содержавшем 0,5% ДСН и 0,5 М мочевину, и наносили на поверхность разделяющего геля. В состав этого геля входили 10%-ный акриламид и буфер, применявшийся для растворения рибосом. После электрофореза гели разрезали и по радиоактивности определяли положение белков. [c.311]

Следует привести еще несколько примеров успешного применения гель-фильтрации в тонком слое. Линк [36] показал, что фракционирование в тонком слое можно проводить в присутствии 8М мочевины или 6,5 М хлоргидрата гуанидина. В этих условиях он сопоставил скорости миграции нативного и модифицированного (восстановленного и алкилированного) р-белка из спинномозговой жидкости. Совпадение скорост-ей миграции обоих образцов указывало на отсутствие в белке субъединиц с различным молекулярным весом. В сочетании с электрофорезом тонкослойную гель-фильтрацию применяли как удоб1у>1й метод контроля при выделении аминоацил-т-РНК-синтетаз [37]. При сопоставлении результатов анализа путем тонкослойной гель-фильтрации на G-200 двух фракций с валил-т-РНК-синтетазной активностью, но несколько различавшихся в функциональном отношении, оказалось, что обе фракции довольно близки по размерам молекул [38]. Радола [67] использовал тонкослойную гель-фильтрацию для решения ряда задач к ним относится анализ сывороточных белков животных и человека, растворимых белков культуры клеток млекопитающих in vitro, растворимых белков из листьев шпината. [c.266]

В гл. 4 и 9 приведены ссылки на некоторые методики хроматографии, где с успехом применяют концентрированные растворы мочевины интересно отметить, что электрофорез в крахмальном геле также проводят в присутствии высоких концентраций мочевины. Пулик [24] недавно опубликовал убедительные результаты фракционирования продуктов, полученных при восстановительном расщеплении з-макроглобулина с применением геля, приготовленного следующим образом. Гидролизованный крахмал (60—65 г) смешивали с 250 г мочевины и смесь добавляли маленькими порциями к 300 мл буфера при энергичном перемешивании. Затем вязкий раствор нагревали при 70° в течение 10 мин, удаляли пузырьки воздуха и гель выливали в лоток для электрофореза. [c.257]

К электрофорезу в геле эти методы, разумеется, прямого отношения не имеют, так как являются примерами электрофореза в свободной жидкости. Именно с этого начиналось применение электрофореза для фракционирования биополимеров. Однако за последнее десятилетие, во всяком случае для аналитических целей, электрофорез в свободной жидкости был полностью вытеснен электрофорезом в гелях или на твердых носителях (бумаге, различных производных целлюлозы, полиамидных пленках и т. д.), который широко применялся при фракционировании пептидов, аминокислот и других сравнительно низкомолекулярных биологически важных молекул, в том числе и в высоковольтных вариантах. В свое время, например, очень важную роль сыграл метод фракционирования олигонуклеотидов гидролизата РНК двумерным электрофорезом. В первом направлении разделение вели на полосках ацетатцеллюлозы в пиридин-ацетатном буфере (pH 3,5) с добавлением 7 М мочевины, во втором — на ДЭАЭ-бумаге в 7%-ной НСООН [Brownlee, 1972]. Ввиду малой емкости ацетатцеллюлозы общая загрузка не превышала 0,1 мг гидролизата РНК, поэтому использовали препараты, меченные радиоактивным фосфором. [c.119]

Сам гелевый матрикс тоже не остался без изменения. Был предложен раствор геля HydroLink, имеющий целый ряд преимуществ перед стандартным полиакриламидным гелем, и мономеры которого к тому же менее токсичны по сравнению с акриламидом [Gelfi et al., 1990]. Этот гель характеризуется более высокой механической прочностью и химической стабильностью, позволяющей применять буферы с высоким pH. По существу, щелочные условия проведения секвенирующего гель-электрофореза, исключающие формирование у одноцепочечных фрагментов ДНК вторичной структуры без использования мочевины, позволили сократить время обращения с таким гелем перед этапом радиоавтографии за счет исключения необходимого ранее этапа ее удаления. Отсутствие мочевины в геле имеет также еще одно небольшое преимущество, заключающееся в более удобном нанесении препаратов ДНК в ячейки геля, чему обычно препятствует диффундирующая в буфер мочевина. Результатом применения такого геля стало большее количество (свыше 600) и более высокое качество читаемых полос ДНК с радиоавтографа геля. [c.173]