Ренатурация антитела

Мы также приводим методику эффективной постановки вестерн-блот-анализа с использованием моноклональных антител (табл. 6.8). Исходя из нашего опыта, моноклональные антитела четко делятся на две группы антитела, работающие в таком анализе, и не работающие антитела. Работающие в блот-анали-зе антитела воспроизводимо эффективны, но никакими изменениями условий ренатурации белков нам ни разу не удалось сделать так, чтобы антитела, не работающие в блот-анализе, вдруг заработали. Интересно, что такие неработающие антитела оказываются достаточно эффективными при скрининге колоний (табл. 6.1), позволяя картировать их некоторые эпитопы. [c.197]

Эти и другие данные свидетельствуют о комплементарности, о структурном соответствии активного участка АТ и детермн-нантиой (или гаптеновой) группы АГ. Изучение взаимодействия АТ к поли- ,-аланину с олигопептидами аланина позволило оценить размеры активного участка АТ 2,5 X 1,1 X 0,2 нм Антитела — глобулярные белки. При денатурации АТ их способность к специфическому связыванию АГ или Г исчезает. В некоторых случаях удается осуществить ренатурацию антител с восстановлением их активности. Присутствие гаптена способствует рена-турации. [c.126]

Описаны аналогичные опыты по иммунологическому изучению тепловой денатурации и ренатурации ДНК из бактериофага Т4 [317]. Глюкозилировапные оксиметилцитозииовые остатки, по крайней мере частично, отвечают за образование антител. Эти детерминирующие группы вполне доступны в денатурированной ДНК. но не в нативной или ренатурированной ДНК. Таким путем удалось показать, что процесс ренатурации ДНК является бимолекулярным, зависит от ионной силы и характеризуется оптимумом температуры при 55". Доказана также и гетерологическая ренатурация ДНК из фагов Т2 и Тб [317]. [c.608]

В 1972 г. Д. Сачс и соавт. [114] разработали иммунологический метод, который был использован для изучения процесса ренатурации белков, не содержащих дисульфидных связей. Метод основан на предположении о двухфазном механизме свертывания и идентификации конформационных состояний фрагментов нативной трехмерной структуры белка с помощью специально подобранных антител. Далее выявляются зависимости между константой равновесия предельных состояний (D и N) и константами связывания антител с белковыми фрагментами. Д. Сачс и соавт. [115] применили метод для определения константы равновесия N D стафилококковой нуклеазы, а Дж. Харрел и соавт. [116] и Б. Фурье и соавт. [117] — для изучения конформаций промежуточных состояний миоглобина. О характере получаемой при исследовании иммунохимического метода информации можно судить по результатам рассмотренной в разд. 9.4. работы Л. Чавеца и Г. Шераги [86], применивших его в исследовании ренатурации рибонуклеазы А. [c.385]

Если антитела обладают высокой аффинностью к данному гаптену, то для их выделения используют комплекс сефарозы с другим, перекрестно-реагирующим гаптеном, обладающим меньшей аффинностью к данным антителам, и его же используют для элюции антител с сорбента. Избыток гаптена удаляют диализом, а гаптен, связанный с антителами, можно удалить денатурацией в 6М гуанидин-НС1 при температуре 4°С. Белок затем ренатури-руют диализом против растворов с убывающими концентрациями гуанидина-H l, а потом проводят диализ против ЗФР. Выход антител при денатурации — ренатурации в случае антител к диги-токсину колеблется в пределах от 73 до 94% ( urd et al., 1971). [c.71]

Принято считать, что обработка белков ДСН вызывает у них сильные конформационные изменения, которые могут приводить к изменению структуры или к полной утрате антигенных детерминант и активных центров ферментов. В то же время без такой обработки невозможно добиться того, чтобы все белки несли отрйцательный заряд и мигрировали к аноду в условиях электрофоретического фракционирования и переноса. То, что обработанные ДСН белки после переноса проявляют антигенную активность, может объясняться их частичной ренатурацией после удаления додецилсульфата в ходе отмывки блота. Другое возможное объяснение заключается в том, что антигенная активность, обнаруживаемая на блотах, связана только с теми эпитопами белков, которые зафиксированы непосредственно на уровне первичной структуры. Не исключено, что возможность обнаружения антигенов после обработки ДСН и переноса в действительности обусловлена сочетанием обоих названных факторов. В пользу первого предположения свидетельствуют результаты обнаружения как нативных, так и обработанных ДСН белков с помощью различных моноклональных антител. Более того, нам удавалось непосредственно зарегистрировать фермен- [c.352]

Инструктивная теория предсказывала, что если молекула антитела будет развернута (денатурирована), а затем вновь свернется (ренатурируется), то ее специфичность будет утрачена. Этому предсказанию противоречили экспериментальные данные по ренату-рации рибонуклеазы, полученные в лаборатории Христиана Анфинсена ( hristian Anfmsen). Вспомним, что денатурированная рибонуклеаза спонтанно восстанавливает исходную трехмерную структуру, специфичность и каталитическую активность после удаления денатурирующего агента (разд. 2.12). Для ренатурации присутствие субстрата не требуется. Этот принципиально важный факт относительно рибону- [c.240]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология