Хроматография пептидов на колонке с КМ-целлюлозой

Д. ХРОМАТОГРАФИЯ ПЕПТИДОВ НА КОЛОНКЕ С КМ-ЦЕЛЛЮЛОЗОЙ [c.200]

Е. ХРОМАТОГРАФИЯ ПЕПТИДОВ НА КОЛОНКЕ С ДЭАЭ-ЦЕЛЛЮЛОЗОЙ [c.202]

В распределительной хроматографии фракционирование осуществляется на колонках с фиксированной полярной (обычно водной) фазой. Разделяемые пептиды продвигаются в потоке подвижной фазы с разной скоростью в соответствии с коэффициентом распределения. В качестве носителя полярной фазы используют всевозможные гели и целлюлозу. В настоящее время метод находит ограниченное применение. [c.390]

Полученные таким обраэом липиды Содержат часто также свободные аминокислоты и пептиды, сахар и другие гидрофильные природные вещества, которые попадают в экстракт при добавлении веществ, способствующих растворению, например лецитинов. Отделение этих примесей затруднительно. Для отделения липидов от нелипидов пригодна хроматография на колонках с целлюлозой по Леа и Родесу [70] и препаративная хроматография на бумаге с применением растворителей, описанных Вестлеем, Вреном и Митчеллом [139]. Рекомендуется противоточное распределение [9, 53, 105]. [c.146]

Схема разделения и очистки пептидов, описываемая ниже (включающая гельфильтрацию, хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе или дауэксе-50, высоковольтный электрофорез и хроматографию на бумаге), применима к белкам средней молекуляр-1ЮЙ массы (до 40 000). Крупные фрагмеггты, плохо разделяющиеся на бумаге и элюирующиеся с нее, первоначально отделяют гель-фильтрацией, а основную часть пептидов после фракцио- шрования на ионообменнике очищают окончательно хроматографией на бумаге. Однако эта схема применима далеко ие ко всем типам гидролизатов белков. Например, мембран11ые белки плохо расщепляются ферментами с высокой специфичностью, такими, как трипсин или стафилококковая протеаза гидрофобные пептиды склонны к образованию агрегатов при гель-фильтрации, осаждаются на ионообменных колонках и экстрагируются в охлаждающую среду при высоковольтном электрофорезе на бумаге и в органическую фазу при промывках в реакции Эдмана. Оптимальная схема анализа структуры мембранных белков включает их фрагментацию с помощью химических методов на небольшое число крупных пептидов, разделение в денатурирующих условиях на полиакриламидных гелях и определение аминокислотной последовательности автоматическим методом после присоединения пептида к твердой матрице. Альтернативный вариант основан на использовании протеаз с низкой специфичностью (таких, как пепсин или эластаза). При этом образуется значительное число коротких пептидов, которые [c.352]

Неионообменная порошковая целлюлоза применяется в качестве носителя при распределительной хроматографии и электрофорезе на колонках и в слоях. Целлюлоза используется для хроматографического разделения сахаров, глицеридов, спиртов, фенолов, аминов, карбоновых и аминокислот, пептидов, белков, нуклеиновых кислот, уроновых кислот, липидов, алкалоидов, антибиотиков, гормонов, ферментов, витаминов, гербицидов и инсектицидов, неорганических ионов, красителей, углеводородов и других веществ. Применяется также для электрофореза белков, пептидов, аминокислот, нуклеиновых кислот, нуклеотидов. [c.127]

В настоящее время большинство описанных выше приемов вытеснены методами хроматографии и электрофореза. Применяли адсорбцию на смеси древесного угля с целитом с последующим элюированием водным этанолом [24, 251, однако полученные результаты не всегда воспроизводимы [26]. Другие авторы удаляли аминокислоты и низшие пептиды с помощью дауэкса-50 X 8 или зеокарба 225, трехмерная структура которых почти полностью исключает возможность сорбции гликопептидов [6, 25]. Хорошее отделение гликопептидов от аминокислот и других пептидов было достигнуто путем хроматографии продуктов протеолитического расщепления орозомукоида на колонке с бумажным порошком со гмесью к-пропанол — этанол — вода — уксусная кислота (5 15 5 0,75) в качестве растворителя [27]. Во многих случаях высокую степень очистки дает электрофорез на колонках типа описанных Поратом [28], в которых в качестве удерживающей фазы используется целлюлоза, подвергнутая этанолизу. Ли и Монтгомери [19] подвергали такую целлюлозу обработке борогидридом натрия, что приводило к более инертному материалу с низким электроэндоосмотическим фактором. [c.242]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология