Сахара хроматографическое разделение

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

При хроматографическом разделении ионы анализируемого вещества конкурируют с ионами, содержащимися в элюенте, стремясь вступать во взаимодействие с противоположно заряженными группами сорбента. Отсюда следует, что ионообменную хроматографию можно применять для разделения любых соединений, которые могут быть каким-либо образом ионизированы. Можно провести анализ даже нейтральных молекул сахаров в виде их комплексов с борат-ионом [c.31]

В аналитической части расширен набор задач по хроматографическому разделению сахаров и их производных. [c.4]

В основу количественного определения сахаров положены те же реакции, что и для их качественного обнаружения . Классические методы анализа использовали, главным образом, восстанавливающие свойства моносахаридов и сводились к весовому или объемному определению продуктов реакции, тогда как новейшие методы являются в большинстве случаев колориметрическими. Для определения содержания данного моносахарида в смеси с другими сахарами используют, как правило, предварительное хроматографическое разделение ряд методов количественного анализа может быть с известной осторожностью применен для определения суммы сахаров в исследуемой смеси. [c.414]

При проведении серии хроматографических разделений рекомендуют в качестве веш еств сравнения использовать эталонные вещества для определения положения пятна — метод, который уже известен в хроматографии на бумаге сахаров. При этом пользуются величиной Rst, определяемой следующим образом [c.48]

Бумага. Наилучшие результаты при хроматографическом разделении углеводов получаются на плотных сортах фильтровальной бумаги ( медленная № 4). При элюации сахаров следует по [c.155]

Для хроматографического разделения сахаров предложено несколько систем растворителей. Довольно часто используются следующие растворители н-бутиловый спирт — уксусная кислота — вода в соотношении 4 1 5 н-бутиловый спирт — этиловый спирт — вода — аммиак (40 10 49 1) фенол, насыщенный водой, с 1%-ным аммиаком н-бутиловый спирт — пиридин — вода (6 4 3) и некоторые другие. [c.78]

Некоторые сахара" с тремя-шестью гидроксильными группами применяют для разделения изомеров фенола, ароматических аминов и других соединений, способных к образованию водородных связей с ОН-группами сахаров. Для проведения хроматографического разделения при температуре приблизительно 500 °С предложено использовать в качестве жидкой фазы расплавы неорганических солей. [c.48]

Мешающие вещества. При анализе растворов, не прошедших хроматографического разделения, определению суммы редуцирующих сахаров мешает разнообразие их редуцирующих способностей и присутствие посторонних редуцирующих веществ — уроновых кислот, фурфурола и т. д. При анализе элюатов из хроматограмм этих помех нет. [c.85]

Хроматографические разделения основаны на селективной адсорбции и дифференциальной диффузии. Во многих случаях успешное разделение достигается обменом ионов, как, например, замена Са + на 2Na+ при умягчении воды. В других случаях искомые вещества адсорбируются из раствора и удерживаются адсорбентом, так что раствор непрерывно от них освобождается. Это имеет место, например, при удалении окрашенных веществ из растворов сахара твердыми адсорбентами. До настоящего времени хроматографический метод остается в значительной степени эмпирическим, т. е. нет определенных принципов, на которых можно основываться при выборе адсорбента, растворителя и элюента , когда требуется провести разделение какой-либо смеси. Выбор этот следует делать, основываясь на накопленном опыте. В последнее время,однако, эмпирические сведения накапливаются быстро, и уже сделано достаточно обобщений, чтобы дать некоторые теоретические основы, которыми можно руководствоваться при выборе методов для осуществления требуемых разделений. [c.169]

Один из методов, требующий значительного времени, но позволяющий преодолеть это затруднение, состоит в восстановлении продукта периодатного окисления до полиола с последующими гидролизом, хроматографическим разделением и определением сахаров обычными методами [2]. [c.487]

Таблица 8.1. Условия хроматографического разделения на бумаге сахаров в гидролизатах почвы и других биологических объектов

Для этих методов весьма важным является экстракция сахаров из бумаги. Для этой цели предложен ряд способов. Рекомендуется проводить экстракцию холодной водой способом, применяемым при хроматографическом разделении, или помещать бумагу с пятнами сахаров между двумя стеклышками и промывать ее водой (см. стр. 178). Проводить экстракцию при кипячении или повышенной температуре ввиду возможного разложения сахаров не рекомендуется. [c.276]

Неионообменная порошковая целлюлоза применяется в качестве носителя при распределительной хроматографии и электрофорезе на колонках и в слоях. Целлюлоза используется для хроматографического разделения сахаров, глицеридов, спиртов, фенолов, аминов, карбоновых и аминокислот, пептидов, белков, нуклеиновых кислот, уроновых кислот, липидов, алкалоидов, антибиотиков, гормонов, ферментов, витаминов, гербицидов и инсектицидов, неорганических ионов, красителей, углеводородов и других веществ. Применяется также для электрофореза белков, пептидов, аминокислот, нуклеиновых кислот, нуклеотидов. [c.127]

Методика опыта. Навеску 3—5 г свежего растительного материала (ячменя, ржи, пшеницы, молодых листьев и т. д.) помещают невысоким рыхлым слоем в фарфоровую чашку и фиксируют паром, для чего чашку помещают в работающий стерилизатор Коха на 20 мин. После этого растительную массу растирают и переносят с 15—20 мл теплой воды в коническую колбу емкостью 50 мл и ставят в водяную баню (для экстракции) при температуре 60— 80° С на 30 мин. Полученную разваренную массу фильтруют вначале через стеклянную вату, а затем через стеклянный фильтр № 4, осадок промывают 3—4 мл дистиллированной воды. Фильтрат и промывные воды собирают в мерную колбу емкостью 25 мл и содержимое ее доводят водой до метки. Отбирают пипеткой Мора 10 мл экстракта и выпаривают в небольшой фарфоровой чашке досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл воды. На полоску хроматографической бумаги (длина 55—60 см, ширина 5—6 см), отпустив 5 см от нижнего края, наносят в виде поперечной полосы 0,01 мл полученного концентрата. Пятно высушивают на воздухе и конец бумаги опускают в растворитель (насыщенный водой фенол). Хроматографическое разделение ведут нисходящим способом. Влажной камерой служит плотно закрывающийся аквариум, в который налито немного воды. После прохождения по бумаге фронта растворителя на расстояние 400мм (за 24—30 ч) от места нанесения испытуемого раствора хроматограмму подсушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре, а затем в сушильном шкафу при 70—80° С. Сухую хроматограмму проявляют, опрыскивая ее из стеклянного пульверизатора аммиачным раствором А НОз. После опрыскивания хроматограмму снова сушат в сушильном шкафу при 100—105° С. Через 5 мин бумага приобретает светло-коричневый цвет, а в местах расположения редуцирующих сахаров появляются темно-коричневые пятна (рис. 34). Эта реакция основана на восстановлении серебра редуцирующими сахарами. Для получения более четкой хроматограммы рекомендуют [c.156]

Прежде всего следует сказать, что с точки зрения химии углеводов обзор, приведенный в этой главе, конечно, неполный, потому что пришлось идти на компромисс из-за несоответствия между числом опубликованных статей и тем количеством страниц, которое отводилось для рассмотрения хроматографии этого типа соединений. Так как применение колоночной хроматографии для анализа углеводов рассматривалось ранее [1, 2, 3], мы остановимся главным образом на современных методах и на тех классических методах, которые, благодаря внесенным в них усовершенствованиям, успешно применяются в настоящее время. Кроме того, мы почти не включили сюда все статьи, в которых описаны разделения различных типов сахаридов (амнносахаров от нейтральных сахаров, кислот ряда сахаров от их лактонов и подобные примеры). Мы опустили также все статьи, в которых хром атография применялась для того, чтобы очищать синтезированные сахариды от следовых количеств непрореагировавших реа гентов и от некоторых неорганических компонентов. Эти хроматографические разделения являются простыми и во многих случаях похожи на фильтрацию. [c.59]

В работе [179] впервые была использована способность фосфатов сахаров образовывать комплексные соединения с боратом для их хроматографического разделения. Смесь 1-фосфата глюкозы, 6-фосфата глюкозы, 6-фосфата фруктозы и 5-фосфата ри-бозы разделили на дауэксе-1 (С1 -форма), причем в качестве подвижной фазы применяли буферные растворы аммиака (10 или 2,5- 10 М) —хлористого аммония (2,5- 10 М) со ступенчато изменяемой концентрацией бората (10 2—Ю- М тетрабората калия). [c.120]

Изучение хроматографического разделения в ацетатной среде было позднее распространено на 44 в основном гидро-ксилсодержашие органические кислоты для нахождения соответствующих условий проведения анализов в различных областях химии сахаров [34]. Некоторые альдоновые, альдобионовые, метилированные альдоновые, уроновые и биуроновые, альдегидо- и кетокислоты и гетероциклические кислоты были исследованы на сильноосновной анионообменной смоле дауэкс [c.165]

Поглощение менее полярных веществ, сорбирующихся в результате ван-дер-ваальсового взаимодействия с матрицей ионита было также исследовано в смешанных растворителях, содержащих воду. В отличие от сахаров, полиспиртов и других полярных неэлектролитов, слабополярные вещества типа слабых органических кислот (гл. 2. 6, стр. 50), фенолов [43], эфиров, углеводородов [45], кетонов [44] при обогащении растворителя органическим компонентом (метанол, уксусиая кислота) сорбируются менее охотно. Шерма и Риман [43 —45 ] использовали это обстоятельство при проведении хроматографических разделений. [c.135]

Сахар Определение по Бертрану Хроматографическое разделение и определение с антроном [c.429]

Адсорбенты. Выбор адсорбента до настоящего времени частично производится опытным путем. В то же время накапливается все больше данных о пригодности тех или иных адсорбентов для разделения веществ с определенным химическим строением, приводится несколько примеров применения специфических адсорбентов. В каждом отдельном случае выбирают такой адсорбент, который обладает наибольшей избирательностью по отношению к отдельным компонентам смеси, подлежащей разделению. Выбор адсорбента частично зависит от характера применяемых растворителей. Для анализа веществ с полярными группами в молекуле могут применяться окись алюминия и окислы других металлов. Для разделения кароти-1ЮНД0В обычно используются окись алюминия, гидрат окиси кальция, углекислый цинк и углекислый кальций, адсорбирующая способность которых уменьшается в приведенной последовательности. Стрейн исследовал последовательность адсорбции некоторых каротиноидов на колонках из сахара, целита и окиси магния. Относительная способность к адсорбции в значительной мере определялась избирательным сродством адсорбентов к характерным группам или частям молекул пигментов. Сахар преимущественно притягивает полярные гидроксильные группы ксантофиллов, а окись магния — ненасыщенные части молекул каротинов и ксантофиллов, а также и гидроксильные группы ксантофиллов. Стрейн применил колонки пз окиси магния для исследования ксантофиллов и хлорофиллов и показал, что распределение растворенных веществ в зонах адсорбции зависит от многих условий. Например, пигменты, образующие обычно одну окрашенную зону, могут образовать две зоны, в присутствии некоторых бесцветных примесей. Для разделения карбонильных соединений в виде 2,4-динитрофенилгидразонов был применен порошкообразный сернокислый магний.Брокманн показал, что растворимые в воде соли, например сульфаты меди и цинка, могут служить хорошими адсорбентами для хроматографического разделения производных азобензола. Сернокислый алюминий можно применять для разделения оксиантрахинонов, причем очень прочно адсорбированные вещества удается выделить только после растворения адсорбента в воде. [c.1491]

Для определения сахаров водный остаток после экстракции этилацетатом объединяли с промывными водами и пропускали последовательно через колонки с катионитом КУ-2 (в Н -фо,рме) и анионитом ПЭ-9 (в ОН -форме). Элюат,имевший обычно нейтральную реакцию, упаривали в вакууме до малого объема и использовали для хроматографического разделения на бумаге (растворитель к-бутанол -(-СНдСООН + Н2О 40 10 50 проявители мочевина, нафторезорцин, ка/ а-анизидин). Размеченные по проявленным контрольным полосам зоны хроматограммы вырезали и элюировали водой. В аликвотах элюатов определяли радиоактивность сахаров и их содержание с антроном (Павлинова, 1957). Радиоактивность измеряли в бесконечно тонком слое, пользуясь торцовым счетчиком и установкой тина Б. [c.95]

В лабораторной практике пористые смолы применяют главным образом с неводными или смешанными растворителями, в которых обычные ионообменные смолы очень мало набухают и поэтому равновесие уста навливается слишком медленно. После того как были разработаны методы разделения сахаров на обычной анионообменной смоле (гл. 9, разд. Г.П). Далберг и Самуэльсон [7] исследовали применение пористых смол для хроматографического разделения других смесей сахаров. Они писали Эти (пористые) смолы обладают преимуществом перед обычными смолами в хроматографическом разделении сахаров и, видимо, также во многих других ионообменных методах разделения . [c.269]

Этот вывод был экспериментально подтвержден другими исследователями, в частности Круном с сотр. которые проводили полньш гидролиз препаратов метилцеллюлозы и последующее количественное хроматографическое разделение полученных метилированных сахаров. Согласно данным Круна, при метилировании целлюлозы диметилсульфатом отношение реакционной способности ОН-групп элементарного звена составляет Сг Сз Се = = 3,5 1 2. При действии хлористого метила более высокая реакционная способность вторичной ОН-группы проявляется более отчетливо (отношение Сг Сз Се составляет 5 1 2). Аналогичные данные о более высокой реакционной способности вторичных ОН-групп при метилировании целлюлозы в присутствии щелочи в гомогенной и гетерогенной среде были получены и рядом других [c.375]

Аналогичный метод был применен Картер для синтеза дезоксицеллюлозы из цианэтилцеллюлозы с у = 95. Полученный препарат содержал около 30 элементарных звеньев дезоксиглюкозы на 100 элементарных звеньев макромолекулы. При хроматографическом разделении смеси сахаров, полученной при полном гидролизе, как основной продукт была идентифицирована 2-дезоксиглюкоза около 10% общего количества дезоксихаров составляла 6-дезокси-глюкоза. [c.439]

Хроматографическое разделение редуцирующих веществ. Нарезают 10—12 полосок размером 3x45 см хроматографической бумаги. Один конец каждой полоски вырезают так, чтобы он плотно входил в горлышко колбочки (приемника). На расстоянии 10 СЛ1 от другого конца наносят определенное количество исследуемого раствора, причем, если концентрация всех сахаров не превышает 3%, то наносят 3 раза по 0,01 мл, просушивая бумагу на воздухе после нанесения каждой порции раствора. Точное отмеривание и нанесение анализируемого раствора производят микропипеткой (рис. 46) с помощью специального приспособления, которое состоит из резиновой груши, заключенной в металлический кожух, и микровинта, служащего для регулирования наполнения и вытекания жидкости из пипетки. Цена деления микропипетки 0,001 мл. После нанесения анализируемого раствора полоски бумаги устанавливают в строго вертикальном положении (рис. 47). Конец полоски, на который нанесена проба, загибается в блюдце так, чтобы пятно пробы отстояло от края блюдца на расстоянии не менее 2 см. Второй конец полоски вставляют в горлышко колбы (приемник) так, чтобы его края плотно прилегали к стенкам. В блюдце наливают растворитель и всю установку накрывают стеклянным колпаком. Окружающая [c.143]

О легкости протекания реакции Лобри де Брюина и Альберда ван Экенштейна нельзя забывать при препаративной и аналитической работе с углеводами, так как она может наступить, например, при выпаривании или нагревании растворов сахаров в щелочном стекле, при длительном хроматографическом разделении от следов оснований, со-держацщхся в бумаге, и т. д. [c.161]

К нелетучим или слабо летучим компонентам, выделяемым из растительных и животных тканей, относят аминокислоты, другие органические кислоты и сахара. Перед проведением анализа методом ГЖХ следует увеличить давление их паров и уменьшить полярность, удаляя или заш,ищая функциональные группы путем окисления, ацетилирования, алкилирования или другими методами. После этого, проводя хроматографическое разделение в паровой фазе, можно получить о данных соединениях такую полную информацию, какую только удается собрать относительно более летучих соединений. Кроме того, усовершенствуя этот метод, можно определить состав и в меньшей степени строение некоторых продуктов конденсации, а именно белков, полисахаридов и гликозидов. До сих пор не появилось сообщений о нуклеотидах и нуклеиновых кислотах, но почти с уверенностью можно сказать, что метод ГЖХ. будет неоценимым при анализе фосфатных и сахарных компонентов, а вероятно, и азотсодержащих оснований, входящих в эти соединения. [c.528]

ЖИДКОСТЬ, а другая — полярную жидкость, поскольку некоторые изомерные эфиры сахаров могут разделяться на одной жидости и не разделяться на другой. Например, продукты метанолиза метилированного глюкоманнана при хроматографическом разделении на апьезоне М при 150° дают пять пиков (фиг. 198). Когда первые две фракции отобрали и подвергли повторному хроматографическому разделению на колонке с полиэфиром, получили восемь пиков (фиг. 199). Приведено недостаточно данных в отношении одних и тех же соединений, которые позволили бы судить, дает ли система с двумя колонками, использованная Бишопом и Купером, такое же разделение, как и метилированная оксиэтилцеллюлоза, применявшаяся Керчером. Весьма вероятно, что хорошее разделение получат при некоторых комбинациях этих колонок. [c.557]

Рис. 9.1. Аппаратура для проведения хроматографического разделения и автоматического анализа сахаров орциновым методом.

Хроматографирование проводится на колонке с силикагелем, специально выпускаемым для этой цели. Нейтральный силикагель, необходимый для разделения трифенилметиловых эфиров сахаров, готовят обработкой силикагеля раствором аммиака с последующей активацией сорбента при 150 °С [15]. За ходом хроматографического разделения удобно следить при помощи тонкослойной хроматографии (ТСХ) (см. гл. 6). Подходящим сорбентом для этой цели является кизельгель G, а проявителем — смеси бензола, эфира и этилацетата в различных соотношениях для обнаружения применяется смесь анисового альдегида с серной кислотой [16]. Как правило, подвижность сахаров на кизель-геле G оказывается выше, чем на силикагеле, заполняющем колонку. [c.111]

Боуп и Гисвольд удаляли сахара растворением сырого таннида караибской сосны в тетрагидрофуране с последующей обработкой водой и сульфатом натрия до тех пор, пока нижний слой не переставал давать реакцию на углеводы. Были описаны результаты сравнения различных методов очистки таниидов. Дополнительные статьи по хроматографическому разделению экстрактов таннидов подчеркивают тот факт, что экстракты содержат смеси веществ. [c.533]

Кент [1] и Кент с сотрудниками [2] проводят разделение глюкозамина и галактозамииа и некоторых других амипосахаров, в частности смесей, содержащих нейтральные сахара или аминокислоты, пользуясь переводом их с помощью 2,4-динитрофторбензола П 94) в соответствующие М-(2,4-динитрофенил)-производные. Результаты хроматографического разделения этих производных приведены в табл. 32. [c.292]

Некоторые типичные результаты хроматографического разделения сахаров и полиолов с использованием данного метода представлены в табл. 7.2. Хроматографию обычно проводят при повышенной температуре (50—85 °С), чтобы исключить возможность искажения формы пиков, связанного с частичным разрешением аномеров некоторых сахаров. Время анализа существенно различается в зависи.мости от типа используемой смолы. Так, например, для разделения глицерина, и-сорбита и о-ман-нита — соединений, часто встречающихся в пищевых продуктах, а также для их отделения от п-глюкозы, о-фруктозы и сахарозы на колонке (600X7 мм), заполненной смолой аминекс Q 15-S (22 3 мкм) в Са +-форме, при 80 °С требуется около 25 мин при скорости подачи воды 1 мл/мин [28]. Этот метод, в частности, пригоден для фракционирования полиолов, которые лучше разделяются в данных условиях, чем на привитых фазах [28, 30], что, видимо, связано с существенными различиями в устойчивости комплексов противоион—полиол. Считается, что механизм, описывающий данный тип хроматографии, включает лигандный обмен молекула полигидроксильного соединения обменивается на молекулы воды и удерживается в гидрат-ной оболочке противоиона смолы за счет взаимодействий, сила [c.16]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология