ДЭАЭ-целлюлоза обработка

Для очистки аденовирусов обычно используют комбинированный метод, состоящий из экстракции вируса из клетки дезоксихолатом натрия, обработки нуклеазами и фреоном 113 и равновесного центрифугирования в градиенте плотности хлористого цезия [855], Иногда применяют метод изоэлектрической преципитации, хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе и сефадексе Г 200 и метод двухфазных полимерных систем. При дифференциальном центрифугировании происходят большие потери вируса, по-видимому, вследствие его агрегации. [c.11]

Повторное прогревание Обработка ДЭАЭ-целлюлозой Обработка гелем гидроокиси алюминия С у [c.12]

Мелкие частицы из препаратов ДЭАЭ-целлюлозы удаляют при отстаивании суспензии и декантации надосадочной жидкости, так же как при обработке КМ-целлюлозы. [c.203]

В результате такой обработки диэтиламиноэтил-группировки придают ДЭАЭ-целлюлозе свойства анионообменника. [c.216]

Обработка дауэксом-50 X 8 з) осаждение спиртом электрофорез на колонках Обработка дауэксом-50 X 8 з) гель-фильтрация или диализ ДЭАЭ-целлюлоза Диализ дауэкс-50 х 16 ) ДЭАЭ-целлюлоза [c.240]

Новейшие попытки получения очищенного тиреоглобулина основывались на использовании ДЭАЭ-целлюлозы с изменениями характера предварительной обработки целлюлозы и условий градиентной элюции [17, 14, 18-23]. [c.219]

I. Обработка ДЭАЭ-целлюлозы. [c.48]

Обработка ДЭАЭ-целлюлозой [c.11]

Для катионообменной хроматографии можно использовать КМ-сефадекс G-50. Его предварительную обработку следует проводить так же, как и ДЭАЭ-сефадекса, с той лишь разницей, что КМ-сефадекс сначала обрабатывают 0,5 н. НС1, а затем отмывают щелочью. Процедура хроматографии на КМ-сефадексе G-50 та же, что и на КМ-целлюлозе. [c.217]

Навеску порошка сорбента суспендируют в 50-кратном и более объеме дистиллированной воды, перемешивают и оставляют набухать на ночь. Слой жидкости над ионообменником декантируют, снова заливают дистиллированной водой, перемешивают и через 2—2,5 ч верхний слой жидкости декантируют вместе с неосевшими мелкими частицами. К оставшемуся осадку приливают 50-кратный объем 0,5 н. NaOH, тщательно перемешивают и через час ионит фильтруют через воронку Бухнера Осадок на воронке промывают водой до pH 7,0. Затем ионит перемешивают в 50-кратном объеме 0,5 н. НС1 и через 30—60 мин (время обработки ионита кислотой не должно быть большим) отмывают дистиллированной водой примерно до pH 5,0. На следующем этапе в случае анионитов, например ДЭАЭ-целлюлозы, сорбент повторной обработкой щелочью переводят в ОН -форму. Для этого его суспендируют в 50-кратном объеме 0,5 н. NaOH, перемешивают и через час отмывают дистиллированной водой до pH воды. В случае катионитов, например КМ-целлюлозы, сорбент повторной обработкой кислотой переводят в Н+-форму. Для этого его суспендируют в 50-кратном избытке [c.109]

Обработка ДЭАЭ-це люлозой. ДЭАЭ-целлюлозу предварительно уравновешивают 2 мМ калий-фосфатным буфером (pH 7,6) и отжимают на бухнеровской воронке. Порцию отжатого осадка добавляют к центрифугату, полученному на предыдущей стадии (в соотношении приблизительно 1 5), и перевешивают 10—15 мин. Центрифугируют [c.285]

Обработка ДЭАЭ-целлюлозы. Независимо от микроструктуры ионообмейник обрабатывают следующим образом сначала его перемешивают с 15-кратным количеством (сухой вес/объем) 0,5 н. НС1 30 мин при комнатной температуре и на воронке или декантацией отмывают дистиллированной водой до pH 4. После этого ДЭАЭ-цел-люлозу 30 мин при комнатной температуре перемешивают с 15-кратным количеством 0,5 н. NaOH и отмывают дистиллированной водой, до тех пор пока суспензия не будет давать нейтральной реакции. Обработанную таким образом целлюлозу уравновешивают стартовым буферным раствором. [c.202]

Анионообменные целлюлозы. Обычные И. с. имеют ограниченное применение в хроматографии белков, поэтому Петерсон и Собер [36] изучили сорбенты на основе целлюлозы, из которых наиболее широко применяется ДЭАЭ-целлюлоза. Ее получают обработкой очень чистой древесной целлюлозы хлоргидратом 2-хлорэтилди-этнламмна, приводящей к диэтиламииоэтильному (ДЭАЭ) производному. Это вещество с успехом использовали для разделения сывороточных белков [37J и олигонуклеотидов [381. [c.70]

Для выделения транспортных РНК из тканевого гомогената применяют депротеинизацию фенолом с последующим удалением других примесей, например путем адсорбции РНК на ДЭАЭ-целлюлозе и элюции. Затем транспортные РНК осаждают спиртом. Из дрожжей или Es heri hia oli можно выделять транспортные РНК в больших количествах прямой обработкой клеток фенолом [26,34]. Описан также способ получения больших количеств транспортных РНК из зародышей пшеницы [20]. [c.197]

При обработке целлюлозы хлористым р-хлорэтилдиэтиламмонием в щелочной среде синтезируется ДЭАЭ-целлюлоза. [c.216]

В последние 10 лет в нескольких лабораториях были разработаны методы получения высокоочищенной карбоангидразы из эритроцитов [34—42]. Они заключаются в осаждении гемоглобина смесью хлороформ—этанол [37, 39, 42] с последующей хроматографией на колонке, заполненной ДЭАЭ-целлюлозой [34, 37, 42], ДЭАЭ-сефадексом [43] или гидроксилапатитом [37, 39, 42]. Белок хорошо переносит лиофилизацию, и в большинстве методов она используется на той или иной стадии выделения. Накопленный опыт препаративной работы выявил некоторые особенности методов очистки фермента. Обработка смесью хлороформ—этанол существенно не меняет большинство физико-химических свойств. Но, как показал рентгеноструктурный анализ, воздействие этой смеси на фермент С человека снижает качество кристаллов [22, 23]. Для удаления гемоглобина лучше использовать гель-фильтрацию [37] или хроматографию на ДЭАЭ-сефадексе [43]. Качество кристаллов повышается, если проводится электрофоретическая очистка фермента [23] и если не применяется лиофилизация [22, 23]. [c.562]

Бык Обработка толуолом, фракционирование (N [4)2304, хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе 370 0.9 ИЗ — Карташева и др., 1967 [c.198]

Фракцию а-казеина, которая была получена в виде нерастворимой кальциевой соли, Вог [43, 44] назвал g-казеином, Макмикин и сотр. [45] — ai-казеином и Лонг и сотр. [46]—аг-казеином. а-Казеин содержит два основных компонента с оптической плотностью, равной 45% оптической плотности казеина, полученного после первого этапа его обработки с использованием хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе в присутствии 4,5 М мочевины. Эти компоненты взаимодействуют с >с-казеином (см. ниже) в соответствующих весовых соотношениях, образуя комплексы в отсутствие двувалентных катионов, или мицеллы, способные образовывать комки с реннином в присутствии двувалентных катионов. С помощью электрофореза на крахмальном геле было показано, что обе главные фракции гетерогенны [47]. Первая элюированная фракция названа agi, 2-казеином она является смесью si- и ад2-казеинов, причем asi-казеин обладает большей подвижностью при pH 8,4 вторая фракция была названа ад-казеином. [c.42]

Стильман и Сегалов [20] сообщили о результатах исследований по очистке и характеристике ФСГ свиньи. Предложенный ими метод очистки состоял из фракционирования сульфатом аммония, обработки панкреатином и хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. Протеолитическая обработка, видимо, необходима, чтобы избежать потери активности при очистке препарата. Весьма вероятно, что после очистки по этому методу конечный продукт представляет собой вещество, сходное с продуктами переваривания нативного гормона. Как сообщалось в статье, очищенный препарат, по данным электрофореза, был гомогенен. Аминокислотный состав был обычным за исключением высокого содержания цистина (6,5%). [c.239]

Карстен и Пирс [27] получили гликопентиды из ТСГ обработкой гормона трипсином и папаином и использовали сефадекс для выделения углеводсодержащих пептидов из инкубационной смеси. Дальнейшее разделение было достигнуто с помощью хроматографирования на ДЭАЭ-целлюлозе. На основании анализа гликопептидов авторы сделали вывод, что все углеводы сосредоточены в одном компоненте, состоящем из 1 остатка фукозы, [c.242]

В последнее время созданы ионообменники на основе полимерных углеводов крахмала, целлюлозы, декстрана. Наибольший интерес и широкое распространение получили ионообменники, получаемые из целлюлозы, например карбоксиметилцеллю-лоза КДИД (катионит), диэтиламиноэтилцеллюлоза (ДЭАЭ-цел-люлоза — анионит, получаемый путем обработки целлюлозы эпихлоргидрином и триэтиламином). Эти ионообменники используются для хроматографической очистки различных белков. [c.95]

Сухой ионит предварительно подвергают кислотной и щелочной обработке и лишь затем уравновешивают рабочим буфером. Аниониты, например ДЭАЭ-целлюлозу, суспендируют в 0,5 М НС1 (15 мл/г) и перемешивают в течение 30 мин. Жидкость отделяют фильтрованием, ионит промывают водой и суспендируют при перемешивании в равном объеме 0,5 М NaOH в течение 30 мин. Жидкость вновь отделяют, ионит промывают водой. Затем ионит суспендируют в рабочем буфере (20 мл/г), перемешивают в течение 10 мин, отделяют путем декантации и фильтрованием. Операцию повторяют трижды до тех пор, пока pH и электропроводность жидкости над ионитом не сравняется с параметрами рабочего буфера. Катиониты обрабатывают аналогичным образом, однако в иной последовательности. Например, КМ-целлюлозу промывают вначале 0,5 М ЫаОН, а затем 0,5 М НС1. Иониты, поставляемые во влажном виде, не нуждаются в предварительной тренировке , их уравновешивают рабочим буфером по обычной методике. [c.41]

Антигены, Антигены, используемые для иммунизации, должны быть очень хорошо очищены, для чего можно использовать метод иммуноаффинной хроматографии или классические методы . Чистая GGT из почек быка может быть выделена солюбилизацией фермента в присутствии дезоксихолата натрия с последующей обработкой -бутанолом, фракционированием сульфатом аммония и хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе [27]. Полученный после разделения на сефарозе 6В препарат GGT подвергается протеолитическому гидролизу бромелаином, и полученная GGT (легкая форма) очищается электрофорезом в полиакриламидном геле [28]. Чистая GGT из почек крысы (фермент П1) может быть получена [29] подобным методом. [c.153]

Большую ценность в методическом отношении представляют работы Т. И. Тихоненко [105, 110], который применил для колоночной хроматографии в препаративных целях ДЭАЭ-целлюлозу в волокнистой форме, отличающейся высокой проходимостью матрицы для концентрированных белковых растворов. Одновременно была решена проб-лема обработки больших количеств вируссодержащего материала (до 6—25 л), концентрирования и очистки вирусов до степени, пригодной ддя работы на ультрацентрифуге, В дальнейшем подобная форма ионообменников (волокнистые ДЭАЭ- и ТЭАЭ-целлюлозы) была успешно применена для очистки и фракционирования/Бируса Сендай [9, 48, 49], вируса гриппа [54, 64, 89] и классической чумы птиц [124, 125] [c.122]

Хроматография овомукоида, полученного по методу Лайнвивера и Маррея, на колонке с КМ-целлюлозой дала увеличение удельной активности на 55% (на основании экстинкции при 280 ммк) [13]. Однако препарат, элюированный с КМ-целлюлозы, не дает одного пика при вторичном хроматографировании в тех же условиях. Это наводит на мысль, что применяемая обработка вызывает некоторую деградацию препарата, возможно, в результате подкисления среды (pH 3,7—4,3). При хроматографии на ДЭАЭ-целлю-лозе при pH 7 препарат Лайнвивера и Маррея [5] дал пик, обладавший активностью, и после вторичного хроматографирования содержал 67% исходного количества гексоз и 82% величины абсорбции при 280 ммк исходного материала [21]. [c.26]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология