Разделение. Величины Rf оснований и нуклеозидов

Зональный электрофорез применим для разделения любых ионов как сложных органических, так и неорганических, если только можно подобрать условия, когда подвижности этих ионов (в первую очередь величины заряда) отличаются друг от друга. Этим методом, например, успешно разделяются пуриновые и пиримидиновые основания благодаря различиям в константах ионизации их аминогрупп. Дополнительные возможности появляются при разделении нуклеозидов, если проводить электрофорез в бо-ратном буфере, так как боратный ион по-разному связывается с гидроксильными группами пентоз, сообщая всему иону дополнительный отрицательный заряд. Наконец, нуклеотиды имеют еще две ионогенные группы фосфата, и различия в константах диссо-циации вторичных гидроксильных групп (первичные гидроксилы фосфата диссоциированы во всем интервале pH, в котором нуклеотиды стабильны) можно использовать для разделения сложных [c.105]

Для разделения стандартных смесей оснований и нуклеозидов обычно применяют системы, приведенные на рис. 1. Эти системы довольно просты и дают надежно воспроизводимые результаты. Сравнение величин в приведенных системах дает наглядное представление о влиянии pH раствора и концентрации солей в системах на хроматографическую подвижность разделяемых веществ. [c.322]

Исследовалась также зависимость величин Rf от концентрации хлорида лития в элюирующем растворителе. Величины Rf нуклеотидов менялись в зависимости от концентрации растворителя, а степень изменения зависела от типа разделяемых соединений, например какие соединения анализировались— ди- или моноэфиры. Б то же время выяснилось, что Rf оснований нуклеиновых кислот, а также нуклеозидов не зависят от концентрации солей, если только концентрация последних не чрезмерно высока в этом случае уменьшение Rf, по-видимому, вызывается высаливанием. Для улучшения разделения между различными группами нуклеотидов можно использовать многостадийное хроматографирование. Например, смесь нуклеотидов аденина и урацила элюируют раствором хлорида лития 1 мин 0,1 М раствором, 5 мин 0,3 М раствором, 15 мин 0,7 М раствором и, наконец, 25 мин 1,5 М раствором. Элюирование проводят без промежуточной сушки, т. е. фактически осуществляется градиентное элюирование. Большое содержание солей мешает [c.129]

Эта техника имеет преимущества перед распределительной и адсорбционной хроматографией, когда она используется для фракционирования больших количеств материала, растворенного в воде. Очевидно, что основное использование ионообменной хроматографии состоит в выделении и фракционировании полинуклеотидов и нуклеотидов, но величины рКа гетероциклических оснований таковы, что в интервале pH 4—10 некоторые нуклеозиды могут нести по меньшей мере частичный заряд и, следовательно, могут быть разделены этим методом. Для ионообменника используют два основных типа подложки либо полистирол, либо целлюлозу, и оба типа широко использовались для разделения нуклеозидов. В ероятно, наиболее широко используется метод. [c.73]

Мононуклеотиды и нуклеотидполифосфаты разделяют на слоях эктеола методом ионообменной хроматографии в качестве растворителя пригоден разбавленный водный раствор хлорида натрия (табл. 115 и 117). Как правило, удовлетворительного разделения достигают за 15 мин. Величины Rf нуклеотидов являются функцией концентрации хлорида в растворителе скорость движения нуклеиновых оснований и нуклеозидов не зависит от концентрации хлорида. Это отчетливо видно из рис. 178, который заимствован из работы Рандерата [69]. [c.448]

Коффи и Ньюбург [45] изучали влияние изменения содержания сульфата кальция в качестве связующего в слоях ОЕАЕ-целлюлозы и обнаружили, что величины Rf (табл. 24.1) почти всех исследованных соединений сильно меняются, если в качестве растворителя используется соляная кислота. Наилучшее общее разделение рибонуклеотидов авторы работы [45] получили со смесью изомасляная кислота—раствор гидроксида амо-ния (уд. масса 0,90)—вода (33 1 16), однако лучшее разрешение зон 2 -фосфата и изомерного ему З -фосфата они достигли при элюировании пробы 0,005 н. соляной кислотой на слое ОЕАЕ-целлюлозы, закрепленной 10 % сульфата кальция. Поскольку гуаниловая кислота при рН<10 проявляет сильную тенденцию к образованию прожилок, монорибонуклеотиды растворяли в 0,1 н. растворе гидроксида аммония. Наилучшие условия для разделения дезоксирибонуклеотидов — сочетание ОЕАЕ-целлюлозы с 10 % сульфата кальция в качестве связующего и того же растворителя, что и для разделения рибонуклеотидов. Добавляя сульфат кальция к адсорбенту, удается отделить 2-дезоксицитидин-5 -фосфат от 2-дезоксиаденозин-5 -фос-фата при хроматографировании на слое без связующего зоны этих соединений перекрываются. Для разделения смесей, содержащих как рибо-, так и дезоксирибонуклеозиды, наилучшим оказалось сочетание разбавленной 0,005 н. соляной кислоты со слоями ОЕАЕ-целлюлозы без добавки связующего. При использовании связующего (сульфата кальция) величины Rf уридина и тимидина возрастали настолько, что их пятна перекрывались с пятнами цитидина и 2-дезоксицитидина. Нуклеозиды наносили на пластинку из раствора в нейтральном растворителе. Свободные основания в виде раствора в 0,1 н. соляной кислоте лучше всего разделялись растворителем Рандерата [42] на адсорбционных слоях ОЕАЕ-целлюлозы, не содержавших сульфата кальция. [c.123]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология