Нуклеозиды разделение

РАЗДЕЛЕНИЕ НУКЛЕОЗИДОВ И НУКЛЕОТИДОВ [c.207]

I. Смесь бутанола, уксусной кислоты и воды (12 3 5). Применяют для разделения смеси оснований, а также пуриновых и пиримидиновых нуклеозидов и нуклеотидов. [c.62]

Рибонуклеаза. — Одна из рибонуклеаз была выделена в кристаллическом виде из бычьей поджелудочной железы Купит-цем (1940). Панкреатическая рибонуклеаза гидролизует рибонуклео-тидные связи, в которых пиримидиновый нуклеозид этерифицирован по З -положению сахара. Этот фермент содержит 124 остатка аминокислот и четыре дисульфидные связи. Установление первичной структуры этого фермента Муром и Штейном (1960) явилось важной вехой в химии белка. Последовательность частично была определена на окисленной рибонуклеазе, которая при энзиматическом расщеплении дает 24 пептида. Их размеры позволяют непосредственно определить последовательность химическими и ферментативными методами. Наконец, ферментативный гидролиз нативного белка, разделение содержащих цистин пептидов, окисление их до цистеиновых пептидов и аминокислотный анализ последних позволили выяснить, каким образом восемь по-луци1стинооых о статков связаны друг с другом (рис. 27, стр. 740). [c.739]

РАСПРОСТРАНЕНИЕ, ВЫДЕЛЕНИЕ И РАЗДЕЛЕНИЕ НУКЛЕОЗИДОВ [c.70]

Вероятно, ограниченное использование в настоящее время этого метода, применение которого в области нуклеозидов в будущем может только возрасти, связано в основном с легкостью разделения нуклеозидов другими методами. [c.75]

До недавнего времени очень сложной задачей являлось разделение смеси полученных при гидролизе нуклеозидов на индивидуальные вещества. В настоящее время этот вопрос удовлетворительно рещается с помощью хроматографии этой смеси на ионообменных смолах, которая была детально разработана Коном. Услугу в этой сложной операции может оказать и использование противоточного распределения. [c.190]

Таким образом, эта глава будет начинаться с широкого рассмотрения методов выделения и разделения смесей нуклеозидов (в основном из природных источников). Общие методы синтеза нуклеозидов будут рассмотрены достаточно подробно, вслед за чем будут описаны синтезы некоторых специфичных типов нуклеозидов, например, С-нуклеозидов, циклонуклеозидов и т. д. Будут лишь перечислены физические методы, используемые для определения структуры нуклеозидов, хотя основные литературные ссылки будут приведены. Будут рассмотрены лишь те химические реакции, которые представляют особый интерес для химика, работающего в области нуклеиновых кислот. Помимо того, общие реакции углеводного остатка и гетероциклов можно найти в главах, относящихся к этим вопросам. [c.70]

На рис. 4.3 и 4.4 приведены примеры разделения компонентов таблеток от головной боли и некоторых нуклеозидов на сорбентах этого типа. [c.101]

И. X. примен. для разделения фенолов и карбоновых к-т (на анионитах), аминосахаров, нуклеотидов, нуклеозидов, пуриновых, пиримидиновых и др. оснований (на сульфо-катионитах). Белки, нуклеиновые к-ты и др. высокомолекулярные соед. разделяют с помощью агарозных и декстрановых гелей и производных целлюлозы (напр., диэтиламиноцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы). Большое значение имеет автоматич. анализ смесей прир. аминокислот на мелкодисперсных грапулиров. сульфока-тионитах. [c.226]

Комбинированное использование потенциометрического метода и двухволновон спектрофотометрии позволяет с высокой чувствительностью определять количественный состав многокомпонентных смесей без их разделения. Подобный анализ основан на зависимости спектров поглощения индивидуальных компонентов от pH среды и позволяет провести определение концентраций компонентов,, имеющих, например, близкие или даже идентичные спектры поглощения в нейтральной среде при обычных условиях. При этом, например при определении количественного содержания различных нуклеотидов в составе ДНК отпадает необходимость в предварительном хроматографическом разделении этих компонентов. Предварительное хрсшатографичеокое разделение вызвано тем, что спектры поглощения нуклеозидов перекрываются между собой настолько сильно, что обычные спектрофотометрические методы определения концентрации компонентов оказываются неприменимыми. [c.279]

Эту технику нельзя, конечно, четко выделить отдельно, поскольку она зависит от набивки колонны это лишь развитие и совершенствование ранее описанных методов. Однако данный метод имеет столь большие преимущества в эффективности и в скорости разделения, что целесообразно отдельно рассмотреть области его применения. Были применены набивки для ионного обмена, адсорбции и гель-фильтрации использование всей этой техники описано Леонардом для разделения некоторых цитокининов (производных аденозина), включая их разделение ня цис- и транс-то-меры [34]. Применение в области нуклеиновых кислот находится еще в стадии становления, но со временем этому методу несомненно предназначено сыграть важную роль в разделении смесей нуклеозидов, а колонки для гель-фильтрации будут широко применяться при обессоливании элюатов нуклеозидов после ионообменной хроматографии. [c.75]

Сорбенты широкого применения дополняют сорбентами для решения специализированных задач разделение энантиомеров (хиральные), нуклеотидов, катехоламинов, нуклеозидов, гидрофильных и гидрофобных протеинов, биополимеров, в том числе олигонуклеотидов, вирусов, РНК и других аминокислот анализ сахаров, определение анионов в воде, полициклических ароматических углеводородов (РАН) в питьевой воде, биологически активных экстрактов. [c.238]

Бариевые соли адениловой, гуаниловой, уридиловой и ци-тидиловой кислот являются наиболее удобной формой для выделения, хранения и применения нуклеотидов. Последние находят все больщее применение как для препаративных целей (синтез нуклеозидов, коферментов и т. д.), так и для биохимических исследований и в медицинской практике. Нуклео-зид-2 (3")-фосфаты бария могут быть получены из рибонуклеиновой кислоты щелочным гидролизом с последующим разделением методом ионообменной хроматографии и осаждением в виде бариевых солей. [c.93]

Разделение методом ХТС и методом хроматографии на бумаге пуринов и пиримидинов, а таюке их нуклеозидов (растворитель — вода) [69] [c.444]

Рис. 12. Газо-хроматографический анализ нуклеозидов. Разделение проводилось на колонке (180x0,4сл1) с 1% фторированного силиконового полимера рР-1, нанесенным на силиконизирован-ный газ-хром Р. Темпе )атура 230° С [64].

И. X. применяется для разделения катионов металлов, напр, смесей лантаноидов и актиноидов, 2г и НГ, Мо и W, КЬ и Та последние разделяют на анионитах в виде анионных хлоридных комплексов в р-рах соляной и плавиковой к-т. Щелочные металлы разделяют на катионитах в водных и водно-орг. средах, щел.-зем. и редкоземельные металлы-на катионитах в присут. комплексонов. Большое значение имеет автоматич. анализ смесей прир. аминокислот на тонкодисперсном сульфокатионите.в цитратном буфере при повыш. т-ре. Аминокислоты детектируют фотометрически после их р-ции с нингидрином или флюориметрически после дериватизации фталевым альдегидом. Высокоэффективная И. X. (колонки, упакованные сорбентом с размером зерен 5-10 мкм, давление для прокачивания элюента до 10 Па) смесей нуклеотидов, нуклеозидов, пуриновых и пиримидиновых оснований и их метаболитов в биол. жидкостях (плазма крови, моча, лимфа и др.) используется для диагностики заболеваний. Белки и нуклеиновые к-ты разделяют с помощью И. X. на гидрофильных высокопроницаемых ионитах на основе целлюлозы, декстранов, синтетич. полимеров, широкопористых силикагелей гидрофильность матрицы ионита уменьшает неспецифич. взаимод. биополимера с сорбентом. В препаративных масштабах И. х. используют для вьщеления индивидуальных РЗЭ, алкалоидов, антибиотиков, ферментов, для переработки продуктов ядерных превращений. [c.264]

Здесь уместно заметить, что разделение оснований (н том числе минорных), нуклеозидов, нуклеотидов и их фосфорных эфиров в аналитических целях чаще ведут. мстодо.м ТСХ, чем на попообмеп-ных колонках. [c.321]

Упомянем также работу, где фракционирование большого числа минорных нуклеозидов с помощью распределительной ТСХ на целлюлозе осуществляли вообще без использования радиоактивных изотопов, проводя визуальное детектирование пятен под УФ-светом. Правда, при этом авторам приходилось наносить на пластинку (в пятне диаметром 1,5 сл1) 2—3 оптические единицы, т. е. около 0,1 мг гидролизата тРНК, а в качестве пластинки пспользовать лист покрытой целлюлозой алюминиевой фольги размером 20 X 50 см, зато приведенная ими картина разделения нуклеозидов содержит около 40 пятен. Количественную оценку (для расшифровки структуры тРНК) проводили по УФ-поглощению элюатов из пятен [Rogg et al., 1976]. [c.495]

Очевидно, что многие нуклеозиды являются интермедиатами в биосинтезе н расщеплении нуклеотидов и полинуклеотидов. В дополнение к так называемым спонгонуклеозидам (термин, применяемый к модифицированным пуриновым нуклеозидам, полученным из карибской губки ryptotethya rypta), которые являются производными арабинозы, многие антибиотики являются производными нуклеозидов, часто имеющих модифицированные углеводные остатки они будут детально обсуждаться позднее. Нуклеозиды сравнительно легко выделить из химических или ферментативных гидролизатов природных полинуклеотидов условия и практические детали этого процесса можно найти в общих учебниках по нуклеиновым кислотам [2, 7, 24]. Все коммерчески доступные образцы основных нуклеозидов получены этим путем. Для выделения больщих количеств таких нуклеозидов наиболее целесообразно применение относительно грубого фракционирования, основанного на различной растворимости, и методов ионного обмена. Для выделения малых количеств модифицированных нуклеозидов либо из природного источника, либо полученных в результате химического синтеза, пригодны многочисленные более эффективные методы, и они будут обсуждаться отдельно. Наконец, следует помнить, что выделение нуклеозидов часто осуществляют дефосфорилированием нуклеотидов [25], выделение и разделение которых не будет рассматриваться в настоящей главе. [c.72]

По мере разделения перекрученных qeneit исходной молекулы к их основаниям, ставшим теперь доступными, присоединяются комплементарные нуклеозид-5 -трифосфаты, но с противоположных концов двух цепей. При взаимодействии трифосфатов с З -оксигруппами предыдущих нуклеотидов в растущих цепях образуются новые 3, 5 -фосфодиэфирные связи и освобождаются молекулы неорганического фосфата. В результате каждая из двух родительских цепей дает начало двойной спирали с новой цепью, когда та становится достаточно длинной. Раньше принято было считать, что раскручивание исходных цепей может происходить только на концах двойной спирали. Сейчас установлено, что эти цепи расходятся в нескольких местах на протяжении всей спирали, а образовавшиеся в каждом месте полинуклео-тидные фрагменты соединяются в процессе еще одной реакции (она здесь не показана), давая законченные нити очень большой длины. ФФ — неорганический пирофосфат. [c.484]

Однако в большинстве случаев происходит хаотическая конденсация, и этот метод имел бы лишь очень ограниченное значение для синтеза пирофосфатов, если бы не было ионообменных и других методов разделения. Несимметричные пирофосфаты можно получать с хорошими выходами, применяя большой избыток одного из компонентов. Корана и сотр. [87, 159, 192, 273], изучавшие детально взаимодействие нуклеозид-5 -фосфатов с избытком 85%-ной фосфорной кислоты, синтезировали 5 -пирофосфат (СХХП) и 5 -трифосфат (СХХIII) аденозина, уридина и гуанозина. Вначале в качестве растворителя применяли водный пиридин, но при этом возникли трудности из-за неодинаковой растворимости ДЦК и фосфорной кислоты. Эти трудности недавно были преодолены путем [c.119]

Эта техника имеет преимущества перед распределительной и адсорбционной хроматографией, когда она используется для фракционирования больших количеств материала, растворенного в воде. Очевидно, что основное использование ионообменной хроматографии состоит в выделении и фракционировании полинуклеотидов и нуклеотидов, но величины рКа гетероциклических оснований таковы, что в интервале pH 4—10 некоторые нуклеозиды могут нести по меньшей мере частичный заряд и, следовательно, могут быть разделены этим методом. Для ионообменника используют два основных типа подложки либо полистирол, либо целлюлозу, и оба типа широко использовались для разделения нуклеозидов. В ероятно, наиболее широко используется метод. [c.73]

С помощью электрофореза удалось осуществить немногочисленные разделения нуклеозидов, однако обычно этот метод используется для контроля за протеканием реакций. Метод особенно полезен для определения N-замещенных в ядре пирймидиновых нуклеозидов, но интервал pH, при которых исключаются какие-либо существенные миграции, довольно узок, что ограничивает возможности метода. Одно частное применение в области нуклеозидов— это проведение электрофореза рибонуклеозидов в боратном буфере при pH 10. В этих условиях образуется стабильный комплекс между боратом и ис-диольными группами, что приводит к миграции рибонуклеозидов к аноду [30]. [c.74]

Спустя 25 лет после изобретения этой техники, ее применение в области нуклеозидов все еще очень ограничено из-за отсутствия летучести у большинства производных нуклеозидов. Необходимой летучестью обладают триметилсилильные эфиры нуклеозидов, которые могут быть получены действием Л ,0-бис (триметилсилил)-ацетамида на нуклеозид [31]. Если вводить пробу при 260 °С, то каждый нуклеозид дает на хроматограмме только один пнк. Для получения этих эфиров могут быть также использованы гексаме-тилдисилазан и/или триметилхлорсилан. Практические детали процесса силилирования и методы, используемые для разделения таких производных, обобщены в обзоре по газо-хроматографиче-скому анализу производных нуклеиновых кислот [31]. В более [c.74]

Хроматография на бумаге. Впервые в современной форме метод бумажной хроматографии был описан Консденом, Гордоном и Мартином [16]. Хроматографирование на бумаге может быть применено для разделения микрограммовых количеств многих веществ, таких, как алкалоиды, нуклеозиды, нуклеотиды, сахара, аминокислоты, флавоноиды, таннины, стероиды, птеридины и фосфолипиды. Метод имеет много общего с распределительной хроматографией в качестве носителя используется фильтровальная бумага. Однако в этом случае не происходит распределения в истинном смысле этого слова (между несмешивающимися растворителями), так как разделение достигается с помощью растворителей, смешивающихся с водой. Согласно Ледереру [2], вопрос о том, обусловлен ли процесс хроматографирования на бумаге адсорбцией на водно-целлюлозном комплексе или же распределением внутри этого комплекса, рассматриваемого в качестве стационарной фазы, относится скорее к области терминологии, чем к существу дела . [c.21]

Большое распространение в последнее время получила хроматография на полиамиде (е-поликапролактаме). Было показано, что полиамиды в зависимости от способа получения обладают различной разделительной способностью [154]. В качестве связующего для полиамидных слоев хорошо зарекомендовала себя целлюлоза [43, 154]. Полиамид применяли также и для приготовления незакрепленных слоев [154]. Помимо целлюлозы в качестве связующего можно использовать крахмал. Слои с пре-красны.ми механическими свойствами мол<но получить из смеси полиамида, силикагеля и крахмала [94]. Полиамид пригоден для разделения фенолов. В этом случае при использовании водных систем растворителей характер разделения аналогичен получаемому при применении хроматографии с обращенными фазами, т. е, в системе с гидрофильной неподвижной фазой (см. разд. 3.2.1.3) [154]. Необходимо помнить, что элюотропный ряд растворителей в случае полиамида совершенно иной, чем применительно к другим сорбентам. Это объясняется разным характером взаимодействия между хроматографируемым веществом и сорбентом. Помимо фенолов в тонком слое полиамида хроматографировали антипиретики [54], тиаминовые производные [60], антибиотики [77], консервирующие вещества [57, 90], аминокислоты и их производные, нуклеозиды и нуклеотиды [163, 164] и другие соединения. Хроматографируемые вещества хорошо вымываются из полиамидного слоя, поэтому пластинки с полиамидом можно использовать для повторных разделений [163]. [c.41]

Современную синтетическую и теоретическую органическую химию отличает широкое применение физических методов, которые облегчают выяснение структуры соединения и исследование механизма реакции. Современная органическая химия вооружена множеством специфических приемов для введения определенных групп в органические соединения, эффективными методами для разделения смесей и очистки веществ. Стабильной теоретической базой органической химии являются электронная теория и представления квантовой химии. В настоящее время можно синтезировать почти любое сложное органическое соединение, теоретически можно предсказать существование новых необычных соединений. Синтезированы природные соединения с очень сложной структурой алкалоиды стрихнин и морфин, зеленый пигмент растений хлорофилл, витамин В12 (Р. Вудворд), полипептиды с более чем 30 остатками аминокислот например, гормон инсулин человека, состоящий из 51 остатка аминокислот (П. Зибер), рибонуклеиновые кислоты, состоящие из 50 и более нуклеозидов (Г. Корана). [c.12]

Рандерат первым описал анализ методом ХТС нуклеиновых оснований, нуклеозидов и мононуклеотидов [68—71], а также анализ нуклеотид-полифосфатов и нуклеотид-коферментов [71—73]. По эффективности разделения ХТС на целлюлозе и силикагеле Г превосходит хроматографию на бумаге [69, 70]. При получении хроматограммы на слое целлюлозы и хроматограммы на бумаге при совершенно одинаковых условиях пятна на тонком целлюлозном порошке получаются меньше и более резко очерченными, чем на волокнистой бумаге [71]. Кроме того, для разделения производных нуклеиновых кислот методом ХТС затрачивается меньше времени, чем для разделения методом хроматографии на бумаге [70—72]. [c.442]

Согласно Тамму, Шапиро, Лифшицу и Чаргафу [88], дистиллированная вода пригодна для разделения методом хроматографии на бумаге пурин-и пиримидин-оснований и их нуклеозидов. Рандерат [69, 71], а также Рандерат и Струк [70] нашли, что вода обеспечивает также хорошее разделение на слое целлюлозы в течение 45 мин. Рандерат [69] использовал воду для фракционирования пуклеооснований и нуклеозидов на силикагеле Г. [c.443]

Рандерат и Струк [70] рекомендуют для фракционирования нуклеозид-монофосфатов, нуклеозиддифосфатов и нуклеозидтрифосфатов на бумаге или слое целлюлозы смесь и-бутанол — ацетон — ледяная уксусная кислота — 5%-пый аммиак — вода (9 + 3 + 2 + 2 + 4) (табл. 114). Если зти же компоненты смешать в соотношении 7 + 5 + 3 + 3 + 2, то получится растворитель, даюш,ий хорошее разделение на слое целлюлозы (табл. 114) и пригодный также для фракционирования нуклеотидов на слое силикагеля Г [71]. Для достижения сравнимых результатов с этой системой в случае слоя целлюлозы достаточно 90 мин, в то время как в случае силикагеля Г необходимо 150 мин. Щелочные растворители, конечно, не могут быть непосредственно использованы на силикагеле Г для разделения сильнокислых нуклеотидов. Рандерат [69] указывает, что добавка 15 г этилендиаминте-трауксусной кислоты на 200 мл растворителя улучшает разделение. [c.443]

В табл. 113 проведено сравнение разделения нуклеооснований и нуклеозидов на слоях целлюлозы, силикагеля Г, эктеола (ионообменник) и бумаге. [c.444]

На слоях эктеола и целлюлозы можно лучше отделить основания от соот-ветствуюш их нуклеозидов, чем на силикагеле Г. В противоположность этому, для фракционирования оснований неорганический слой подходит лучше, чем слои эктеола или целлюлозы. В отношении разделения нуклеозидов эти три различных материала оказываются примерно равноценными. [c.445]

Анализ нуклеиновых оснований и нуклеозидов на слоях эктеола, целлюлозы и силикагелд Г превосходит хроматографию на бумаге по чувствительности обнаружения разделяемых веществ, а также по четкости разделения [c.445]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология